李高文 張 玲 萬 勇 于紀(jì)棉 (寧波衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院藥理教研室，浙江 寧波 3500)

目前認(rèn)為良性前列腺增生癥(BPH)主要是由于體內(nèi)雄/雌激素失調(diào)，前列腺細(xì)胞增殖動力學(xué)改變而引起〔1〕。裂環(huán)異落葉松脂酚二葡萄糖苷(SDG)為植物雌激素，具有雌激素樣和抗雌激素樣雙重活性〔2〕。SDG具有抑制大鼠前列腺增生的作用，其具體機制與SDG提高機體抗氧化能力、清除自由基等有關(guān)〔3〕，而其對前列腺增生小鼠體內(nèi)的雄、雌激素水平是否有影響未見報道。本文以丙酸睪酮誘發(fā)小鼠BPH模型，觀察了SDG對小鼠前列腺指數(shù)、血清前列腺特異性酸性磷酸酶(PAP)、前列腺組織中睪酮(T)和雌二醇(E2)水平的影響。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 ICR雄性小鼠60只，體重18～20 g，普通級，購自溫州醫(yī)學(xué)院實驗動物中心〔實驗動物許可證號:sysxk(浙)2005-006〕，各組動物自由取食、飲水，測試10 h前禁水禁食。

1.2 試劑與器材 SDG(含量≥90%)由北京大學(xué)藥學(xué)院楊東輝教授提供，用雙蒸水溶解。丙酸睪酮注射液(上海通用藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，批號070102);癃閉舒膠囊(石家莊科迪藥業(yè)有限公司，批準(zhǔn)文號:國藥準(zhǔn)字Z10960007);PAP測試盒購自南京建成生物工程研究所;T和E2測定試劑盒均購自北京北方生物技術(shù)研究所。電子天平(BS110S，北京賽多斯儀器公司);可見分光光度計(722N，上海精密科學(xué)儀器有限公司);光學(xué)顯微鏡(Leica DFC280);離心機(LDZ5-2，北京醫(yī)用離心機廠生產(chǎn));輪轉(zhuǎn)式切片機(KD202C，浙江金華科迪儀器設(shè)備有限公司);550型酶標(biāo)儀(美國Bio-Rad公司)。

1.3 動物模型制作及給藥方法 動物模型制備參考文獻〔4〕進行，將小鼠隨機分為正常對照組、模型組、SDG 40、80、160 mg/kg劑量組和30 mg/kg癃閉舒組;癃閉舒組給藥劑量按照文獻〔4〕折算成小鼠用劑量。除正常對照組外，其余小鼠每日按5 mg/kg皮下注射丙酸睪酮造模，同時灌胃給予SDG或癃閉舒膠囊混懸液1次，連續(xù)21 d。最后一次給藥24 h后，將各組動物稱重后處死，摘取前列腺稱濕重，計算前列腺指數(shù)，前列腺指數(shù)=前列腺濕重(mg)/小鼠體重(g)。

1.4 前列腺病理學(xué)檢查 10%甲醛溶液固定前列腺組織，經(jīng)脫水、透明、石蠟包埋后切片，HE染色，在光鏡下觀察小鼠前列腺組織結(jié)構(gòu)變化，照相。

1.5 血清PAP測定 斷頭取血，室溫放置20 min后離心，1 000 r/min，10 min，分離血清，－20℃凍存，嚴(yán)格按照試劑盒使用說明操作。

1.6 前列腺組織中T及E2含量測定 取部分新鮮前列腺組織勻漿，采用酶聯(lián)免疫吸附法測定T和E2水平，酶標(biāo)儀下讀數(shù)，嚴(yán)格按照試劑盒說明操作。

1.7 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS11.5統(tǒng)計軟件包，數(shù)據(jù)以表示。單因素方差分析，組間差異采用t檢驗。

2 結(jié)果

2.1 SDG對小鼠前列腺濕重、指數(shù)以及血清PAP含量的影響如表1所示，模型組與正常對照組小鼠相比，小鼠前列腺濕重、指數(shù)和血清PAP含量均顯著增加(P＜0.01)，SDG 80和160 mg/kg組以及癃閉舒組不同程度地逆轉(zhuǎn)上述變化，且有顯著性差異(P＜0.05或P＜0.01)。

2.2 SDG對小鼠前列腺組織T及E2水平的影響 由表2可見，與正常對照組相比，模型組大鼠前列腺組織中 T(P＜0.001)和E2(P＜0.001)水平顯著升高，使大鼠前列腺組織在外源性雄激素作用下出現(xiàn)增生。與模型組比較，80 mg/kg和160 mg/kg劑量的SDG組及癃閉舒組均可顯著降低模型大鼠前列腺中 T(P＜0.05或 P＜0.01)和 E2(P＜0.01或 P＜0.001)水平。

2.3 SDG對小鼠前列腺組織病理學(xué)改變的影響 見圖1，鏡下見正常對照組腺體排列清楚，腺腔無擴張，腺上皮單層柱狀，可見少許基底細(xì)胞及明顯基膜，腺體間可見較明顯的間質(zhì)。模型組腺體排列密集，部分腺腔擴張、變大，部分區(qū)域呈假復(fù)層，腺上皮變厚呈乳頭狀突向腔內(nèi)，給藥后腺上皮細(xì)胞不同程度減小，復(fù)層和乳頭狀增生不明顯。

圖1 SDG對小鼠前列腺組織病理學(xué)改變的影響(HE，×40)

表1 SDG對小鼠前列腺濕重、指數(shù)以及血清PAP含量的影響(n=10，)

表1 SDG對小鼠前列腺濕重、指數(shù)以及血清PAP含量的影響(n=10，)

與正常對照組比較:1)P＜0.01;與模型組比:2)P＜0.05，3)P＜0.01

組別 劑量(mg/kg)前列腺濕重(mg)前列腺指數(shù)(mg/g)PAP(U/L)正常對照組22.9±4.4 0.69±0.14 1.21±0.72模型組 31.4±5.01) 0.98±0.161)3.65±1.971)SDG組 40 30.5±4.9 0.86±0.16 2.54±0.69 80 25.3±4.23) 0.77±0.143)1.49±1.543)160 24.9±4.53) 0.76±0.133)1.44±0.863)癃閉舒組 30 26.8±2.42) 0.76±0.053)1.43±1.653)

表2 SDG對小鼠前列腺中T和E2水平的影響(n=10，)

表2 SDG對小鼠前列腺中T和E2水平的影響(n=10，)

與正常對照組比較:1)P＜0.001;與模型組比較:2)P＜0.05，3)P＜0.01，4)P ＜0.001

組別 劑量(mg/kg) T(ng/ml) E2(pg/ml)正常對照組0.12±0.02 0.58±0.04模型組 1.52±0.261) 0.98±0.031)SDG組 40 1.45±0.2 0.89±0.07 80 1.11±0.12) 0.75±0.032)160 0.79±0.13) 0.52±0.044)癃閉舒組 0.16 0.68±0.044) 0.54±0.044)

3 討論

賈彬等〔5〕發(fā)現(xiàn)，外源性睪酮可以顯著增加小鼠前列腺指數(shù)，本實驗也發(fā)現(xiàn)SDG能顯著降低小鼠體內(nèi)主要雄激素之一的睪酮含量，而PAP的合成和分泌也依賴雄激素的存在。此外，研究發(fā)現(xiàn)體內(nèi)E2水平與前列腺體積呈正相關(guān)，即E2水平越高，前列腺體積越大〔6〕。

目前關(guān)于BPH的病因中，性激素平衡失調(diào)的內(nèi)分泌學(xué)說受到公認(rèn)〔1〕，因此抗雄激素藥和雌激素擬似藥廣泛應(yīng)用于BPH的治療。近年來流行病學(xué)調(diào)查和實驗研究表明植物雌激素對BPH有防治作用〔7〕，然而在動物實驗中發(fā)現(xiàn)，雌激素的濃度與前列腺基質(zhì)細(xì)胞生長呈倒U形關(guān)系，即在一定濃度范圍，雌激素刺激基質(zhì)細(xì)胞增殖，否則表現(xiàn)為抑制作用〔8〕。相應(yīng)地有研究者也認(rèn)為高濃度雌激素具有促進前列腺增生的作用〔9，10〕。段曉慧等〔11〕調(diào)查了38例老年BPH患者血清性相關(guān)激素的變化，發(fā)現(xiàn)這些患者體內(nèi)E2水平呈高水平狀態(tài)，經(jīng)藥物治療后體內(nèi)E2水平下降，本實驗與其有相似結(jié)果。而SDG作為一種植物雌激素，沒有發(fā)揮其潛在的雌激素樣作用，這可能與小鼠體內(nèi)較高的雌激素環(huán)境有關(guān)，還可能通過對下丘腦-垂體-性腺軸產(chǎn)生負(fù)反饋抑制，降低雌激素的濃度。總之，本實驗顯示SDG可能通過降低T和E2水平，調(diào)節(jié)紊亂的雌、雄激素水平，達到拮抗小鼠前列腺增生的作用。而其改善BPH的途徑是否涉及其他機制及其臨床效果還有待進一步研究。

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11 段曉慧，潘曉明，肖永新，等.老年前列腺增生癥血清性相關(guān)激素(FSH、LH、E2、T、PRL、P、T/E2)變化觀察〔J〕. 中國性科學(xué)，2009;18(1):10-3.