郁海靜，丁士剛，張 靜，楊雪玲，劉琳娜，王 曄

幽門螺桿菌 (helicobacter pylori，H.pylori)于1982年由澳大利亞學(xué)者Warren和Marshall首先從慢性活動(dòng)性胃炎患者的胃黏膜中分離出，多種細(xì)菌因子以及毒力因子參與了H.pylori相關(guān)疾病的發(fā)生、發(fā)展。硫氧還蛋白 (thioredoxin，TRX)最初發(fā)現(xiàn)于大腸桿菌，后相繼發(fā)現(xiàn)于幾乎所有的原核及真核生物，是一種具有氧化還原活性的小分子蛋白質(zhì)，分子量約為12 kDa，TRX主要分為TRX－1和TRX－2兩型，TRX－1主要位于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中，而TRX－2僅位于線粒體中［1］。TRX－1具有強(qiáng)大的清除體內(nèi)活性氧的功能，能保護(hù)細(xì)胞免受損傷。有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，在TRX－1過度表達(dá)情況下可減輕H.pylori感染引起的胃黏膜炎癥［2］。目前關(guān)于H.pylori感染與血清TRX－1水平關(guān)系尚不清楚。本研究探討了血清TRX－1水平與H.pylori感染及胃黏膜病理改變的關(guān)系，以進(jìn)一步明確其臨床意義。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象 選擇2009年4—7月于北京大學(xué)第三醫(yī)院進(jìn)行胃鏡檢查的患者116例，其中男56例，女60例;年齡16～79歲，平均 (44.3±15.1)歲;所有患者除外糖尿病、慢性肺病、慢性肝病、腫瘤以及嚴(yán)重感染等疾病。記錄患者的一般情況 (性別、年齡、身高、體質(zhì)量)。

1.2 血清TRX－1檢測 所有患者于胃鏡檢查前7～10 h空腹抽取靜脈血2 ml，注入血清分離管中，室溫1 000 g離心15 min，分離血清，置于－20℃冰箱內(nèi)備檢。血清TRX－1水平檢測采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn) (ELISA)法測定。應(yīng)用商品化的試劑盒 (Human TRX ELISA Kit，Groundwork Biotechnology，Diagnosticate公司)，嚴(yán)格按照試劑盒說明進(jìn)行操作。

1.3 H.pylori和胃黏膜組織病理學(xué)檢查 所有患者進(jìn)行胃鏡檢查的同時(shí)于胃竇和胃體分別鉗取至少一塊組織進(jìn)行病理學(xué)檢查。組織固定于10%甲醛溶液，常規(guī)石蠟包埋，5 μm連續(xù)切片，行Warthin－Starry(WS)及HE染色，進(jìn)行組織學(xué)評(píng)價(jià)、分類并判定H.pylori感染狀況。胃黏膜組織學(xué)評(píng)價(jià)依據(jù)悉尼胃炎分類標(biāo)準(zhǔn)［3］。血清H.pylori抗體采用ELISA法測定，應(yīng)用商品化的試劑盒 (H.pylori抗體檢測試劑盒，北京貝爾生物工程有限公司)，嚴(yán)格按照試劑盒說明進(jìn)行操作。同一患者胃竇和胃體黏膜中任何一項(xiàng)WS染色陽性，同時(shí)血清H.pylori抗體陽性則判定為H.pylori感染。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 11.5軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。測得的血清TRX－1為非正態(tài)分布，兩組間比較采用非參數(shù)檢驗(yàn)(Mann－Whitney u檢驗(yàn))。計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 所入選的116例患者中H.pylori陽性75例，H.pylori陰性41例;慢性淺表性胃炎 (CSG)91例 (其中H.pylori陽性57例)，慢性萎縮性胃炎 (CAG)25例 (其中H.pylori陽性18例)。

2.2 H.pylori對(duì)血清TRX－1水平的影響 H.pylori陽性患者血清TRX－1水平為9.45 ng/ml，高于H.pylori陰性患者的8.99 ng/ml，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (u=1 488.000，P=0.775)。

2.3 CSG和CAG患者血清TRX－1水平比較 CSG患者血清TRX－1水平為8.98 ng/ml，低于 CAG患者的10.40 ng/ml，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (u=1 068.000，P=0.641)。

2.4 不同胃黏膜組織病理情況下H.pylori感染與否對(duì)血清TRX－1水平的影響 無論是CSG還是CAG患者，H.pylori陽性者與陰性者的血清TRX－1水平間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＞0.05，見表1)。

表1 不同胃黏膜組織病理情況下H.pylori感染與否對(duì)血清TRX－1水平的影響 (ng/ml)Table 1 The influence of H.pylori Infection or not to serum TRX－1 levels in different gastric mucosa tissue pathological conditions

2.5 不同性別患者血清TRX－1水平比較 男性患者血清TRX－1水平為8.24 ng/ml，低于女性患者的10.27 ng/ml，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (u=1 315.000，P=0.044)。

2.6 不同性別患者H.pylori感染與否對(duì)血清TRX－1水平的影響 所入選病例中H.pylori陽性患者75例，其中男39例，女36例;H.pylori陰性患者41例，其中男17例，女24例，H.pylori陽性與陰性者的性別構(gòu)成間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (χ2=1.179，P=0.278)。無論是男性還是女性，H.pylori陽性者與陰性者的血清TRX－1水平間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＞0.05，見表2)。

表2 不同性別患者H.pylori感染與否對(duì)血清TRX－1水平的影響Table 2 The influence of H.pylori infection or not to serum TRX－1 levels in different genders

3 討論

H.pylori是微需氧革蘭陰性桿菌，主要定植在胃黏膜上皮及黏膜層，口腔牙菌斑及結(jié)腸中也有。H.pylori感染導(dǎo)致黏膜慢性活動(dòng)性炎癥，中性粒細(xì)胞及巨噬細(xì)胞等炎性細(xì)胞浸潤，釋放大量活性氧，導(dǎo)致氧化應(yīng)激，氧化損傷在慢性胃炎、消化性潰瘍以及胃癌的發(fā)生中有重要的作用［4－5］。TRX－1是具有氧化還原活性的蛋白，具有多種生物學(xué)功能，能夠直接清除活性氧，參與炎癥反應(yīng)，維持細(xì)胞的氧化還原狀態(tài)，同時(shí)具有細(xì)胞生長刺激和趨化作用，還能調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄因子NF－κB，并參與細(xì)胞凋亡［6］。血清TRX－1水平是氧化應(yīng)激和炎性疾病的重要標(biāo)志［7－9］，在炎癥以及氧化應(yīng)激下表達(dá)上調(diào)［6］。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明內(nèi)源性TRX－1可能是胃黏膜組織抵御氧化應(yīng)激損傷的重要因子之一［10］。Kimio等［2］進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示，內(nèi)源性過度表達(dá)的TRX－1通過抑制中性粒細(xì)胞的趨化而降低氧化應(yīng)激，減低H.pylori感染導(dǎo)致的胃黏膜炎癥。H.pylori感染狀況是否會(huì)影響血清TRX－1水平，二者的關(guān)系又如何?本研究結(jié)果顯示，H.pylori陽性與陰性患者血清TRX－1水平間無差異，提示H.pylori感染狀況對(duì)血清TRX－1水平可能無影響?？紤]可能與H.pylori的致病性、H.pylori與宿主的相互作用以及個(gè)體差異、地域差異和環(huán)境等多種因素有關(guān)。另外Noyan等［11］研究認(rèn)為在胃癌患者中血清H.pylori抗體陽性組與H.pylori抗體陰性組血清氧化應(yīng)激參數(shù)及抗氧化酶活性無差異，由此推論在胃炎患者中H.pylori感染不同狀況下血清氧化應(yīng)激指標(biāo)TRX－1水平可能無差異。為進(jìn)一步明確H.pylori的菌株及致病力，可進(jìn)行H.pylori基因組學(xué)分析，對(duì)于H.pylori感染能否引起TRX－1表達(dá)水平上調(diào)，有待進(jìn)一步對(duì)胃黏膜組織TRX－1水平以及氧化應(yīng)激標(biāo)記物進(jìn)行分析。

本研究進(jìn)一步分析顯示，CSG和CAG兩種不同胃黏膜病理學(xué)改變對(duì)血清TRX－1水平?jīng)]有影響，在兩種不同胃黏膜病理學(xué)改變情況下，H.pylori感染與否對(duì)血清TRX－1水平也沒有影響。Kimio等［2］的研究顯示，TRX－1主要存在于壁細(xì)胞，CAG時(shí)由于胃黏膜萎縮可導(dǎo)致產(chǎn)生TRX－1的細(xì)胞減少。karnes等研究［12］表明CAG時(shí)由于胃黏膜變薄，胃酸減少而導(dǎo)致H.pylori感染減少或H.pylori被清除，由H.pylori感染引起的氧化應(yīng)激減輕或消失，從而導(dǎo)致血清TRX－1水平進(jìn)一步下降，由此推論CSG與CAG患者血清TRX－1的水平應(yīng)有差異，但本研究結(jié)果卻恰好相反，可能由于產(chǎn)生TRX－1的胃黏膜細(xì)胞的減少不足以導(dǎo)致血清TRX－1水平的下降，另外TRX－1可由多種正常細(xì)胞和異常細(xì)胞分泌，如成纖維細(xì)胞、呼吸道上皮細(xì)胞以及活化的T淋巴細(xì)胞及B淋巴細(xì)胞，血清TRX－1水平可能不能直接反映胃內(nèi)產(chǎn)生的TRX－1情況，也不能真實(shí)反映其與H.pylori感染的關(guān)系。尚需要進(jìn)一步檢測胃液中或者胃黏膜組織中TRX－1的表達(dá)水平。

本研究發(fā)現(xiàn)血清TRX－1水平與性別有關(guān)，男性患者血清TRX－1水平與女性患者間有差異。Shoko等［13］研究發(fā)現(xiàn)在輕度腎小球?yàn)V過率下降的患者中，血清TRX－1水平與男性患者高度相關(guān)，多項(xiàng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)［14－15］發(fā)現(xiàn)TRX－1的表達(dá)水平及抗氧化應(yīng)激作用與性別有關(guān)。由此推測男性、女性患者性激素水平的不同可能對(duì)血清TRX－1水平有影響，有待進(jìn)一步研究。

總之，雖然本研究發(fā)現(xiàn)不同H.pylori感染狀況及胃黏膜病理狀況對(duì)血清TRX－1水平?jīng)]有影響，但是需要進(jìn)一步分析感染H.pylori的菌株和細(xì)菌毒力，評(píng)價(jià)胃黏膜中TRX－1的表達(dá)水平，進(jìn)一步探討TRX－1在胃黏膜病變中發(fā)揮的作用。

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