王鋒，汪年松，高許萍，范瑛

(上海交通大學附屬第六人民醫(yī)院腎臟科，上海200233)

聯(lián)合檢測CD146與P-選擇素對2型糖尿病腎病的意義

王鋒，汪年松，高許萍*，范瑛

(上海交通大學附屬第六人民醫(yī)院腎臟科，上海200233)

目的探討2型糖尿病腎病患者外周血CD146與P-選擇素表達的意義。方法選取2型糖尿病患者80例與正常對照20例，分為正常組(Non-DM)、糖尿病無腎病組(DN0)、微量蛋白尿組(DN1)、大量蛋白尿組(DN2)與腎功能不全組(DN3)，每組20例。用ELISA法檢測外周血CD146與P-選擇素的表達水平。結(jié)果DN0組患者外周血CD146表達[(319.6±15.9)ng/ml]與P-選擇素水平[(57.9±3.1)ng/ml]明顯高于對照組[(243.5±14.7)ng/ml和(45.3±2.7)ng/ml]，兩組比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。DN1，DN2，DN3三組的CD146與P-選擇素水平高于DN0組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。DN1，DN2，DN3三組的CD146水平分別為(415.3±29.0)ng/ml、(486.6± 34.3)ng/ml、(515.9±36.9)ng/ml，P-選擇素水平分別為(66.8±3.4)ng/ml、(79.6±4.6)ng/ml、(81.5±5.1)ng/ml。結(jié)論CD146與P-選擇素水平在2型DN患者患者的表達水平隨著DN進展而升高。

糖尿病腎病；CD146；P-選擇素

CD146是一種近年發(fā)現(xiàn)的細胞粘附分子，屬于免疫球蛋白超家族，可表達在內(nèi)皮細胞、腫瘤細胞以及腎小管上皮細胞。CD146與粘附分子P-選擇素均與內(nèi)皮細胞損傷以及炎癥有關，有研究提示其與腎臟疾病關系密切。本研究對2型糖尿病腎病(DN)患者的外周血CD146與P-選擇素水平進行了檢測，以探討在2型DN中的意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2009年1月至2009年12月在我院期間就診的2型糖尿病患者(T2DM)80例與健康對照20例，分別進行血清CD146與P-選擇素水平測定。T2DM根據(jù)2003年美國糖尿病協(xié)會(ADA)制定的空腹及餐后2 h血糖標準進行診斷；DN依據(jù)2004年美國ADA制定的24 h尿白蛋白排泄率(UAER)分期及血清肌酐(Scr)標準進行診斷分組。非糖尿病對照組(Control，20例)患者，無糖尿病家族史，口服葡萄糖耐量實驗(OGTT)檢查結(jié)果血糖正常的本院退休職工及志愿者。所有患者均排除血液病、血栓性疾病以及服用抗凝藥物。本項目獲上海交通大學附屬第六人民醫(yī)院倫理委員會批準。

對于T2DM組，根據(jù)6個月內(nèi)連續(xù)兩次測定24 h尿蛋白排泄率(UAER)、血肌酐(Scr)測定值，分為：①糖尿病無腎病組(DN0)20例：兩次測24 h尿白蛋白排泄率(AER)＜30 mg/24 h或20μg/min；T2DM病程≥10年；②微量蛋白尿組(DN1)20例：300 mg/24 h＞AER≥30 mg/24 h或200μg/min＞AER≥20μg/min；③大量蛋白尿組(DN2)20例：兩次測AER≥300 mg/ 24 h或≥200μg/min；④腎功能不全組(DN3)20例：臨床蛋白尿伴兩次Cr≥115μmol/L，進行替代治療的患者不納入研究。

1.2 檢測方法CD146與P-選擇素檢測用ELISA試劑盒(上海閃晶生物公司提供)?？崭共裳?%EDTA抗凝試管，立即4 000 r/min離心5 min，取上清備用。其余操作步驟，遵照試劑盒說明書進行。

1.3 統(tǒng)計學方法所有結(jié)果均采用均數(shù)±標準差(x-±SEM)表示，應用SAS(Version 6.04)軟件分析數(shù)據(jù)，行t檢驗分析差異性，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

患者共80例，按照DN分期0～3期各20例，非糖尿病的正常對照組為20例。其年齡、性別比以及尿白蛋白定量、血清肌酐水平見表1。CD146與P-選擇素的測定結(jié)果，見表2。

表1 一般資料比較

表1 一般資料比較

注：與DN0組和DN1組分別比較，*P＜0.05。

分組血清肌酐(μmol/L) 76±4 64±4 72±5 83±6*245±24*例數(shù)年齡(歲)性別(男/女)對照組DN0 DN1 DN2 DN3 20 20 20 20 20 59.2±2.9 61.5±2.5 64.7±2.0 66.3±1.6 67.4±2.2 10/10 13/7 7/13 12/8 14/6尿白蛋白定量(mg/24 h) 21±2 19±2 134±20 2799±440*4269±354*

表2 血清CD146與P-選擇素的表達

表2 血清CD146與P-選擇素的表達

注：與對照組比較，*P＜0.05，**P＞0.05。

分組對照組DN0 DN1 DN2 DN3例數(shù)20 20 20 20 20 CD146(ng/ml) 243.5±14.7 319.6±15.9*415.3±29.0*486.6±34.3*515.9±36.9*P-選擇素(ng/ml) 45.3±2.7 57.9±3.1*66.8±3.4*79.6±4.6*81.5±5.1**

3 討論

人CD146是近年發(fā)現(xiàn)的免疫球蛋白超家族粘附分子[1]，表達在黑色素瘤細胞、血管內(nèi)皮細胞、平滑肌細胞、濾泡樹突網(wǎng)狀細胞以及活化T細胞。其中CD146在內(nèi)皮細胞以及T細胞的表達與免疫炎癥性疾病的關系最為密切，與內(nèi)皮細胞損傷有關[2-3]。Neidhart等[4]發(fā)現(xiàn)類風關患者關節(jié)滑液中CD146水平與病情活動呈正相關。在一些脊柱關節(jié)病與Crohn's病研究中，也有類似發(fā)現(xiàn)[5-6]。另有證據(jù)表明牛皮蘚患者存在CD146的高表達[7]。CD146已被認為是ANCA相關的系統(tǒng)性血管炎等疾病的病情活動標志之一[8]。P-選擇素是粘附分子選擇素家族的主要成員，是血小板活化的標志，亦與內(nèi)皮細胞損傷有關。

糖尿病發(fā)病日益成為終末期腎病的主要原因[9-10]，其機制復雜，近年免疫、炎癥學說倍受關注[11]，認為內(nèi)皮功能紊亂與糖尿病發(fā)生、發(fā)展及其并發(fā)癥密切相關。作為炎癥標志之一，P-選擇素也參與了DN的發(fā)病[12-14]。本研究發(fā)現(xiàn)糖尿病患者的血漿P-選擇素水平高于正常對照組，而隨著DN進展，其水平越來越高。CD146在糖尿病血液中的表達水平明顯高于正常人，DN的患者CD146水平隨著蛋白尿增加與DN進展而相應增加。這提示P-選擇素與CD146可能與DN的腎損傷有關。

作為一個新發(fā)現(xiàn)的細胞粘附分子，CD146可反映血管內(nèi)皮功能障礙，與糖尿病、腎臟疾病的關系研究也尚少[15-16]，鑒于其配體的研究較少，其生理與病理作用研究也受到一定限制，CD146在DN的意義還有待于深入研究。

[1]Zeng Q,Li W.CD146,an epithelial-mesenchymal transition inducer,is associated with triple-negative breast cancer[J].Proc Natl Acad Sci USA,2012,109(4):1127-1132.

[2]Pires FR,Shih IeM,da Cruz Perez DE,et al.Mel-CAM(CD146)expression in parotid mucoepidermoid carcinoma[J].Oral Oncol, 2003,39(3):277-281.

[3]Bardin N,Anfosso F,Masse JM,et al.Identification of CD146 as a component of the endothelial junction involved in the control of cell-cell cohesion[J].Blood,2001,98(13):3677-3684.

[4]Neidhart M,Wehrli R,Bruhlmann P,et al.Synovial fluid CD146 (MUC18),a marker for synovial membrane angiogenesis in rheumatoid arthritis[J].Arthritis Rheum,1999,42(4):622-630.

[5]Middleton J,Americh L,Gayon R,et al.A comparative study of endothelial cell markers expressed in chronically inflamed human tissues:MECA-79,Duffy antigen receptor for chemokines,von Willebrand factor,CD31,CD34,CD105 and CD146[J].J Pathol,2005, 206(3):260-268.

[6]Kruithof E,Baeten D,De Rycke L,et al.Synovial histopathology of psoriatic arthritis,both oligo-and polyarticular,resembles spondyloarthropathy more than it does rheumatoid arthritis[J].Arthritis Res Ther,2005,7(3):R569-580.

[7]Schon M,Kahne T,Gollnick H,et al.Expression of gp130 in tumors and inflammatory disorders of the skin:formal proof of its identity as CD146(MUC18,Mel-CAM)[J].J Invest Dermatol, 2005,125(2):353-363.

[8]Woywodt A,Streiber F,de Groot K,et al.Circulating endothelial cells as markers for ANCA-associated small-vessel vasculitis[J]. Lancet,2003,361(9353):206-210.

[9]Wang F,Cheng D,Wang N,et al.Continuous glucose monitoring in the patients with diabetic nephropathy[J].JSJU,2011,16(4): 508-512.

[10]王鋒,高許萍,汪年松.尿液α1-微球蛋白測定對糖尿病腎病小管間質(zhì)病變的診斷價值[J].海南醫(yī)學,2011,11(22):114-115.

[11]Tarnow I,Michelson AD,Barnard MR,et al.Nephropathy in type 1 diabetes is associated with increased circulating activated platelets and platelet hyperreactivity[J].Platelets,2009,20(7):513-519.

[12]Wang F,Wang NS,Yan CG.The significance of platelet activation in rheumatoid arthritis[J].Clin Rheumatol,2007,26(5):768-771.

[13]Goldberg RB.Cytokine and cytokine-like inflammation markers,endothelial dysfunction,and imbalanced coagulation in development of diabetes and its complications[J].J Clin Endocrinol Metab, 2009,94(9):3171-3182.

[14]Liu Y,Burdon KP,Langefeld CD,et al.P-selectin gene haplotype associations with albuminuria in the Diabetes Heart Study[J].Kidney Int,2005,68(2):741-746.

[15]Saito T,Saito O,Kawano T,Tamemoto H,et al.Elevation of serum adiponectin and CD146 levels in diabetic nephropathy[J].Diabetes Res Clin Pract,2007,78(1):85-92.

[16]Wang N,Fan Y,Ni P,et al.High glucose effect on the role of CD146 in human proximal tubular epithelial cellsin vitro[J].J Nephrol,2008,21(6):931-940.

Clinical significance of combined detection of plasma CD146 and P-selectin in patients with type 2 diabetic nephrophathy.

WANG Feng,WANG Nian-song,GAO Xu-ping,FAN Ying.Department of Nephrology,the Six People'sHospital Affiliated to Shanghai Jiaotong University,Shanghai 200233,CHINA

ObjectiveTo investigate the clinical significance of CD146 and P-selectin in peripheral blood in patients with type 2 diabetic nephrophathy.MethodsA total of 80 patients with type 2 diabetes nephrophathy were randomized into the diabetes group(DN0 group),micro-albuminuria group(DN1 group),Macro-albuminuria uria group(DN2 group)and renal insufficiency group(DN3 group),with 20 cases in each group.Twenty healthy individuals were enrolled as the control group(Non-DM group).ELISA was used to detect the expression of CD146 and P-selectin.ResultsThe levels of CD146 and P-selectin in DN0 group was significantly higher than those in Non-DM group[(319.6±15.9)ng/ml and(57.9±3.1)ng/ml vs(243.5±14.7)ng/ml and(45.3±2.7)ng/ml,respectively],P＜0.05.In DN1 group,DN2 group and DN3 group,the levels of CD146 and P-selectin was significantly higher than those in DN0 group(P＜0.05).The levels of CD146 in the three groups were(415.3±29.0)ng/ml,(486.6±34.3)ng/ml and(515.9±36.9)ng/ml,respectively,and the levels of P-selectin were(66.8±3.4)ng/ml,(79.6±4.6)ng/ml and (81.5±5.1)ng/ml,respectively.ConclusionExpression of CD146 and P-selectin in patients with type 2 diabetic nephrophathy is elevated with the progression of diabetic nephropathy.

Diabetic Nephropathy;CD146;P-selectin

10.3969/j.issn.1003-6350.2012.11.043

R587.2

A

1003—6350（2012）11—102—03

2012-01-09)

國家自然科學基金(編號：81100528)；上海市衛(wèi)生局基金項目(編號：2008Y04)；上海交通大學附屬第六人民醫(yī)院青年骨干培養(yǎng)計劃(編號：1402)，院級課題項目(編號：1086)

王鋒(1977—)，山東籍，副主任醫(yī)師，博士。

*通訊作者：高許萍。E-mail：gaoxuping6204@126.com