曾 超，宋玉蘭，姚運(yùn)紅

(1.廣東醫(yī)學(xué)院病理學(xué)教研室，廣東 東莞 523808；2.廣東藥學(xué)院附屬第一醫(yī)院病理科，廣東 廣州 510080)

乙酰肝素酶-2在結(jié)腸癌中的表達(dá)及其臨床意義

曾 超1，宋玉蘭2，姚運(yùn)紅1

(1.廣東醫(yī)學(xué)院病理學(xué)教研室，廣東 東莞 523808；2.廣東藥學(xué)院附屬第一醫(yī)院病理科，廣東 廣州 510080)

目的研究乙酰肝素酶-2(Hpa-2)在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)及其與各臨床病理因素的相關(guān)性。方法采用免疫組化檢測(cè)結(jié)腸癌組織和癌旁正常結(jié)腸組織中Hpa-2蛋白表達(dá)情況。結(jié)果結(jié)腸癌組織中Hpa-2蛋白表達(dá)陽(yáng)性率高于癌旁組織，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)腸癌臨床分期越高，陽(yáng)性表達(dá)率越高；分化程度越高，陽(yáng)性表達(dá)率越低；Hpa-2表達(dá)在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(P均＜0.05)。結(jié)論Hpa-2在結(jié)腸癌的進(jìn)展中起著重要作用，可作為判斷大腸癌惡性程度的指標(biāo)。

結(jié)腸癌；乙酰肝素酶-2；免疫組化

乙酰肝素酶(Hpa)是一種內(nèi)源性β-葡萄糖醛酸酯酶，識(shí)別并且切割硫酸乙酰肝素蛋白多糖的側(cè)鏈，硫酸乙酰肝素被切割和降解為10個(gè)左右糖單位大小的短鏈。因此，Hpa不僅可以破壞細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜，降低細(xì)胞間質(zhì)屏障功能，還可以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞侵入基質(zhì)和血管壁，從而在腫瘤轉(zhuǎn)移過(guò)程中起重要作用[1]。Hpa是目前發(fā)現(xiàn)的唯一的作用于細(xì)胞外基質(zhì)多聚糖成分的酶，可以認(rèn)為它是引起腫瘤轉(zhuǎn)移關(guān)鍵酶，同時(shí)也是一個(gè)抗腫瘤轉(zhuǎn)移的新靶點(diǎn)。人類Hpa有Hpa-l、Hpa-2兩個(gè)亞型，目前人們的研究熱點(diǎn)都集中在Hpa-l，已經(jīng)證實(shí)Hpa-l高表達(dá)與多種惡性腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[2-5]，而對(duì)HPa-2的研究報(bào)道較少?？紤]到人類Hpa-l和Hpa-2的氨基酸序列約有35%的一致性，因此，Hpa-2可能在惡性腫瘤的進(jìn)展過(guò)程中起重要作用。本實(shí)驗(yàn)旨在探討Hpa-2的表達(dá)與結(jié)腸癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系，闡明Hpa-2在結(jié)腸癌進(jìn)展過(guò)程中的作用，以期尋找結(jié)腸癌診斷及治療的新靶點(diǎn)。

1 資料與方法

1.1 病例資料 收集廣東藥學(xué)院附屬第一醫(yī)院2002年2月至2004年2月的手術(shù)存檔石蠟標(biāo)本40例，男性26例，女性14例；年齡48～76歲，中位年齡62歲。所有病例都經(jīng)病理醫(yī)生證實(shí)為腺癌，其中低分化及未分化腺癌10例，高分化及中分化腺癌30例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移19例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移21例；癌組織侵及黏膜及黏膜下層的18例，侵及肌層和漿膜層的22例；TNM分期標(biāo)準(zhǔn)分為Ⅰ/Ⅱ期21例，Ⅲ/Ⅳ期19例。患者術(shù)前均未行任何治療。

1.2 主要試劑 免疫組化染色試劑盒購(gòu)自邁新生物公司，實(shí)驗(yàn)采用S-P免疫組化法，兔抗人多克隆抗體Hpa-2購(gòu)自Santa Cruz(sc-30123)。實(shí)驗(yàn)步驟按試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。

1.3 免疫組化染色結(jié)果判定 Hpa-2表達(dá)陽(yáng)性染色定位于腫瘤細(xì)胞胞漿。以陽(yáng)性細(xì)胞比例和細(xì)胞染色強(qiáng)度的乘積判定腫瘤細(xì)胞中Hpa-2評(píng)分。腫瘤細(xì)胞染色強(qiáng)度評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：無(wú)著色，0分；淡黃色，1分；棕黃色，2分；棕褐色，3分；陽(yáng)性細(xì)胞比例評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＜6%，6%～24%，25%～49%，50%～74%及≥75%的病例，分別判定評(píng)分為0、1、2、3、4。用強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)的評(píng)分的乘積進(jìn)行最終評(píng)分：＜2分為陰性表達(dá)，≥2分為陽(yáng)性表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，對(duì)所獲得數(shù)據(jù)進(jìn)行卡方檢驗(yàn)和Fisher確切概率法檢測(cè)，P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 結(jié)腸癌組織與癌旁正常結(jié)腸黏膜組織中Hpa-2的表達(dá)情況檢測(cè) 免疫組化分析結(jié)果表明：癌旁正常結(jié)腸黏膜中Hpa-2蛋白陽(yáng)性表達(dá)率為37.50%(15/40)，在結(jié)腸癌組織中Hpa-2蛋白陽(yáng)性表達(dá)率為72.50%(29/40)，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。Hpa-2在癌旁結(jié)腸黏膜組織中表達(dá)陽(yáng)性率低(圖1)，Hpa-2在不同分化程度的結(jié)腸癌組織中均有陽(yáng)性表達(dá)，其表達(dá)主要定位于腫瘤細(xì)胞胞漿中(圖2～圖4)，陽(yáng)性染色腫瘤細(xì)胞呈彌漫性分布于腫瘤間質(zhì)之中。

圖1 Hpa-2在癌旁正常結(jié)腸黏膜組織中陰性表達(dá)(200×)；圖2 Hpa-2在高分化結(jié)腸癌組織中的表達(dá)(200×)；圖3 Hpa-2在中分化結(jié)腸癌組織中的表達(dá)(200×)；圖4 Hpa-2在低分化結(jié)腸癌組織中的表達(dá)(200×)

2.2 Hpa-2的表達(dá)與結(jié)腸癌各臨床病理因素之間的關(guān)系 Hpa-2表達(dá)與結(jié)腸癌臨床病理因素之間的關(guān)系詳見(jiàn)表1。統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明，Hpa-2表達(dá)與腫瘤細(xì)胞浸潤(rùn)深度、TNM分期和腫瘤有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P＜0.05)，而與患者的性別、年齡、腫瘤分化程度等臨床病理因素之間無(wú)明顯相關(guān)性(P＞0.05)。

表1 結(jié)腸癌組織中Hpa-2蛋白表達(dá)與各臨床病理因素的關(guān)系（例）

3 討論

結(jié)腸癌是消化系統(tǒng)最為常見(jiàn)的惡性腫瘤之一。研究表明，隨著人民生活水平質(zhì)量的不斷提高，飲食結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，結(jié)腸癌發(fā)病率和病死率也呈逐年上升趨勢(shì)。與大多數(shù)其他惡性腫瘤一樣，侵襲和轉(zhuǎn)移是結(jié)腸癌的重要生物學(xué)特征，也是嚴(yán)重影響患者預(yù)后的主要因素。研究發(fā)現(xiàn)，Hpa-1在腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用，Hpa-1可以破壞、改變基底膜和細(xì)胞外基質(zhì)的結(jié)構(gòu)，從而突破侵襲和轉(zhuǎn)移的屏障，加速腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移；Hpa-1還可通過(guò)調(diào)控VEGF的表達(dá)，誘導(dǎo)腫瘤血管生成。值得注意的是，作為Hpa家族的另一重要成員[6]，與Hpa-1具有高度同源性的Hpa-2在結(jié)腸癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的作用尚未見(jiàn)報(bào)道。

本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)Hpa-2蛋白高表達(dá)于在結(jié)腸癌癌細(xì)胞胞漿中，且其陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于癌旁正常結(jié)腸黏膜組織，提示Hpa-2蛋白表達(dá)在結(jié)腸癌的發(fā)生中發(fā)揮著重要作用。Hpa-2蛋白在黏膜及黏膜下層中陽(yáng)性表達(dá)率顯著低于在肌層和漿膜層中的表達(dá)，提示Hpa-2可能在促進(jìn)癌細(xì)胞的浸潤(rùn)和侵襲能力等方面起著重要作用。Hpa-2蛋白在Ⅲ/Ⅳ期中的表達(dá)明顯高于Ⅰ/Ⅱ，表明Hpa-2與結(jié)腸癌的臨床進(jìn)展具有顯著相關(guān)性。Hpa-2蛋白在高-中與低-未不同分化程度結(jié)腸癌組織中的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，揭示Hpa蛋白表達(dá)可能與結(jié)腸癌分化程度無(wú)關(guān)。Hpa-2蛋白表達(dá)在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，提示Hpa-2與結(jié)腸癌組織的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。

總之，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，Hpa-2蛋白在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)不僅可以促進(jìn)結(jié)腸癌的進(jìn)展，而且嚴(yán)重影響患者的預(yù)后。本研究為結(jié)腸癌的基因治療提供了新的分子靶點(diǎn)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)，但Hpa-2促進(jìn)結(jié)腸癌侵襲轉(zhuǎn)移的具體分子機(jī)制需進(jìn)一步深入研究。

[1]Watanabe M,Aoki Y,Kase H,et a1.Heparanase expression and angiogenesis in endometrialesncer[J].Gynecol Obstet Invest,2003,56 (2):77-82.

[2]Maxhimer JB,Quiros RM,Stewart R,et a1.Heparanase-1 expression is associated with the metastatic potentialof breastcancer[J]. Surgery,2002,132(2):326-333．

[3]Fairbanksm MB,Mildner AM,Leone JW,et a1.Processing of the human heparanase precursor and evidence that the active enzyme is aheterodimer[J].J Biol Chem,1999,274(42):29587-29590.

[4]Friedmann Y,Vlodavsky I,Aingmo HT,et a1.Expression of heparanase in normol dysplastic and neoplastichuman colon mucosa and stroma Evidenceforitsroleinclonictumoirgenesis[J].Am J Pathol, 2000,157(4):1167-1175.

[5]Kin AM,Xu X,Hollinger EF,et a1.Human heparanase gene expression in adenocarcinoma[J].J Gastrointest Surg,2002,6(2):167-172. [6]Mekeie E,Tyson K,Stamps A,et al.Cloing and expression Profiling of HPa-2 a novel mammalian heParanase family member[J]. Biochem Biophys Res Commun,2000,276(30):1170-1177.

Expression of Heparanase-2 in colorectal carcinoma and its clinical significance.

ZENG Chao1,SONG Yu-lan2, YAO Yun-hong1.
1.Department of Pathology,Guangdong Medical College,Guangzhou 523808,Guangdong,CHINA;2. Department of Pathology,the First Affiliated Hospital of Guangdong Pharmaceutical University,Guangzhou 510080, Guangdong,CHINA

ObjectiveTo explore the expression of Heparanase-2(Hpa-2)protein in colorectal carcinoma and its relation to clinicopathologic features.MethodsThe Hpa-2 protein levels were detected in 40 patients of colorectal carcinoma by immunohistochemistry.ResultsThe positive expression rates of Hpa-2 in colorectal carcinoma were significantly higher than those in adjacent normal tissues(P＜0.05).The positive expression of Hpa-2 was associated with TNM stage and lymphnode metastasis.ConclusionHpa-2 may play a role in the carcinogenesis of colorectla carcinoma.

Colorectal carcinoma;Hpa-2;Immunohistochemistry

R735.3+5

A

1003—6350（2012）20—003—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2012.20.002

2012-03-27)

曾 超(1979—)，男，湖南省邵東縣人，講師，博士，研究方向：結(jié)腸癌病因和發(fā)病機(jī)制。