郭桂玲
(上海賽金生物醫(yī)藥有限公司 上海 201203)
中藥復方制劑交通心腎膠囊由黃連,肉桂,益智,枸杞等13味中藥材組成,具有交通心腎,補腎益精,精主安神的功效。用于心腎不交,肝腎陰虛所致的心悸不寧,虛煩不寐,多夢易醒,眩暈耳鳴,腰膝酸軟,遇事善忘,五心煩熱,神疲乏力,尿頻等癥。方中黃連為君藥,其主要成分為鹽酸小檗堿。目前其含量測定采用的是薄層色譜掃描法,但其樣品處理時間較長,測定方法繁瑣,重復性較差。采用HPLC法測定中成藥中的鹽酸小檗堿含量有較多文獻報道[1-6],為此,本文應用HPLC法[7]對交通心腎膠囊中鹽酸小檗堿含量測定進行研究,以探索更加快捷,簡便的質量控制方法。
日本島津公司LC-10 AVP高效液相色譜儀;德國賽多利斯BP211 D型電子分析天平;鹽酸小檗堿對照品,批號:110713-200208(中國藥品生物制品檢定所);交通心腎膠囊,規(guī)格:0.36 g/粒(上?!痢了帢I(yè)股份有限公司);甲醇、乙腈均為一級色譜純,其他試劑為分析純。
ODS C18色譜柱(150 mm×4.6 mm,5 μm);流動相為乙腈-水(3∶4,1.0 L中含磷酸二氫鉀3.4 g和十二烷基硫酸鈉1.7 g);檢測波長為345 nm;流速1.0 ml/min;柱溫:30 ℃;理論塔板數按鹽酸小檗堿峰計算應不低于3 000。
精密稱取鹽酸小檗堿對照品適量,加甲醇制成0.05 mg/ml的對照品溶液。
取交通心腎膠囊內容物適量,混勻,精密稱取0.36 g,置100 ml量瓶中,加入鹽酸-甲醇(1∶100)約95 ml,60 ℃水浴加熱15 min,取出,超聲處理30 min,放冷,加甲醇至刻度,搖勻,用0.45 μm濾膜過濾,即得。
精密吸取鹽酸小檗堿對照品溶液4,8,12,16,20μl依次進樣,按上述色譜條件測定,以進樣量(X)對峰面積(Y)進行回歸,求得回歸方程為Y=4.2389 X+0.0146,r=0.999 8,表明鹽酸小檗堿在0.2~1.0 μg之間的線性關系良好(圖1)。
取缺黃連的群藥按其質量標準制備陰性對照品,依樣品測定項下的方法測定,結果在鹽酸小檗堿對照品(圖2)吸收峰位置處無干擾(圖3)。
圖1 鹽酸小檗堿線性關系圖
圖2 鹽酸小檗堿對照品色譜圖
圖3 陰性空白樣品色譜圖
圖4 交通心腎膠囊供試品色譜圖
精密吸取對照品溶液10 μl重復進樣5次,鹽酸小檗堿對照品面積平均值為2 040 518,RSD為0.30%(表1)。
取供試品溶液常溫放置,分別在0,0.5,1,3,6 h測定,結果平均峰面積為1 991 844,RSD為0.33%(表2)。
取同一樣品,精密稱取6份,按供試品溶液制備方法處理并測定,結果鹽酸小檗堿的平均含量為12.29 mg/g,RSD為2.39%(表3)。
精密稱取已知含量的交通心腎膠囊樣品適量,加入鹽酸小檗堿對照品溶液(0.466 mg/ml)3 ml,按供試品溶液制備方法處理并測定,計算回收率(表4)。
表1 鹽酸小檗堿精密度試驗測定結果
表2 交通心腎供試品溶液穩(wěn)定性試驗測定結果
表3 交通心腎中鹽酸小檗堿重復性試驗測定結果
表4 鹽酸小檗堿加樣回收率測定結果
原標準的供試品溶液制備方法(TLC法)取交通心腎膠囊內容物適量,混勻,精密稱取0.36 g,置100 ml量瓶中,加入鹽酸-甲醇(1∶100)約95 ml,60 ℃水浴加熱15 min,取出,超聲處理30 min,室溫放置過夜,加甲醇至刻度,搖勻,用0.45 μm濾膜過濾,即得。
修改后的供試品制備方法,超聲處理后無需室溫放置過夜,直接進行下一步的樣品處理即可。
精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10 μl,分別注入液相色譜儀,按上述色譜條件測定5批樣品鹽酸小檗堿含量(表5)。
表5 交通心腎膠囊中鹽酸小檗堿含量測定結果(n=5)
用新建立的HPLC方法與原標準TLC檢測方法 3批交通心腎膠囊中鹽酸小檗堿的含量分別進行測定,結果見表6。
表6 交通心腎膠囊中鹽酸小檗堿含量測定比較結果(n=3)
本品原來所用TLC含量測定方法,在操作過程中受相對濕度、溶劑蒸汽、溫度、展距等客觀影響以及點樣位置及點樣體積等人為因素的影響,其自動化程度及重復性方面相對不高。通過HPLC法對交通心腎膠囊中鹽酸小檗堿含量測定的研究,對其線性、精密度、穩(wěn)定性、重復性進行考察,結果顯示,HPLC法快速、簡捷,有效的節(jié)約了操作時間,人為因素減少,自動化程度高,與原方法所測定數據相比較,具有較好的重復性,可以代替原方法用于該制劑的質量控制。
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