張 克

河南省中醫(yī)藥研究院附屬醫(yī)院，河南鄭州 450004

HPLC法測定合胃口服液中橙皮苷含量

張 克

河南省中醫(yī)藥研究院附屬醫(yī)院，河南鄭州 450004

目的：建立合胃口服液中橙皮苷含量測定方法。方法：采用高效液相色譜法（HPLC）測定本品中橙皮苷的含量。ODS 柱（250 mm×4.6 mm×5 μm），甲醇-2%乙酸水溶液（39:61）為流動(dòng)相，流速為 1 ml/min，檢測波長為 283 nm。結(jié)果：橙皮苷在 0.134 4～1.680 0 μg含量呈線性關(guān)系，r=0.999 8；加樣回收率為 98.44%，RSD=1.21%（n=6）結(jié)論本法靈敏、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可作為合胃口服液的質(zhì)量控制指標(biāo)之一。

橙皮苷；高效液相色譜法；合胃口服液；質(zhì)量控制

合胃口服液是本院消化科常用制劑，由陳皮、藿香、砂仁、厚樸、雞內(nèi)金等組成，功能：理氣合胃、消積導(dǎo)滯。陳皮為君藥，具有行氣、止嘔、燥濕、化痰作用，橙皮苷為其主要有效成分[1]，筆者以《中國藥典》2010版藥典一部[2]陳皮項(xiàng)下橙皮苷的含量測定方法為基礎(chǔ)，建立以橙皮苷成分的合胃口服液質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。本法可作為合胃口服液內(nèi)在質(zhì)量控制的定量指標(biāo)。

1 儀器與試劑

Waters 2695高效液相色譜儀。Waters 2696二極管陣列檢測器，Empower色譜工作站（美國 Waters）。Hypersil ODS 柱（250 mm×4.6 mm×5 μm）

橙皮苷（中國藥品生物制品檢驗(yàn)所，批號：0721-200010），甲醇（批號100821，天津四友精細(xì)化學(xué)品有限公司），水為重蒸餾水，其他所用試劑均為分析純。合胃口服液由本院制劑室生產(chǎn)，生產(chǎn)批號依次為 101103、101104、101105。

2 方法與結(jié)果

2.1 對照品溶液的制備

精密稱取橙皮苷對照品8.40 mg，置25 ml容量瓶中加甲醇適量，超聲溶解，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。精密吸取2 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇2 ml混勻，加水稀釋至刻度，搖勻，即得。每1毫升中含橙皮苷67.20 μg。

2.2 樣品制備

2.2.1 供試樣品制備 精密量取合胃口服液10 ml，加三氯甲烷提取2次（15 ml、10 ml），棄去三氯甲烷溶液，上層水液小心移置50 ml量瓶中，加甲醇振搖，并加至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.2 陰性樣品制備 按處方比例稱取除陳皮以外的各味藥材，按合胃口服液制備方法制得無陳皮的陰性口服液，按供試樣品制備方法，制得無陳皮陰性樣品。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密吸取橙皮苷對照品溶液（濃度為0.067 2 μg/ml）2、5、10、15、20、25 μl，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得到橙皮苷的標(biāo)準(zhǔn)曲線為：y=2.185×103x-6.576×104，r=0.999 8，橙皮苷在 0.134 4～1.680 0 μg 線性關(guān)系良好。

2.4 精密度試驗(yàn)

精密吸取上述對照品溶液10 μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，測定橙皮苷的峰面積，RSD=1.3%。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn)

取合胃口服液共6份，按“2.3”項(xiàng)下方法分別制備供試品溶液，進(jìn)樣測定，測定橙皮苷的峰面積，RSD=1.9%，表明本方法重復(fù)性良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品溶液，分別于 0、2、4、8、12 h 進(jìn)樣，測定橙皮苷的峰面積，RSD=1.7%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。見圖1。

2.7 加樣回收率試驗(yàn)

取已知含量的樣品，加入橙皮苷對照品溶液，并測定其中橙皮苷的含量，結(jié)果見表1。

圖1 樣品、陰性對照和對照品溶液的HPLC色譜圖

表1 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

2.8 樣品含量測定

取合胃口服液，按上述方法操作測定其中的橙皮苷的含量，結(jié)果顯示，三批樣品（批號 101103、101104、101105）的含量依次為 0.473、0.487、0.455 mg/ml。

根據(jù)以上測定結(jié)果，并考慮到原料的產(chǎn)地來源不同等因素，暫定本品每1毫升中含陳皮以橙皮苷（C28H34O15）計(jì)，不得少于 0.40 mg。

3 結(jié)果與討論

合胃口服液樣品制備：本研究曾采用樣品直接加甲醇[3-4]或超聲[5]；或加氨試液使堿化[6-8]，以乙醚脫脂，再使溶液酸化后，以乙酸乙酯提取及通過大孔樹脂柱（1.5 cm×12.0 cm），先以水100 ml洗滌，棄去，再以50%甲醇水溶液100 ml洗脫，水浴蒸干的方法制備樣品，最后確定先以氯仿提取，除去部分脂溶性雜質(zhì)，可以降低雜質(zhì)峰的數(shù)量和大小，減少了雜質(zhì)峰的干擾，提高了測定的精密度和準(zhǔn)確度。

總之，用本方法測定合胃口服液的有效成分橙皮苷含量，分離效果良好，重現(xiàn)性好，專屬性強(qiáng)，可以作為合胃口服液的質(zhì)量控制方法。

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HPLC determination of content of hesperidin in combined stomach oral liquid

ZHANG Ke

Affiliated Hospital of Henan Institute of Traditional Chinese Medicine,Zhengzhou 450004，China

Objective:To establish the determination method for determining the content of hesperidin in combined stomach oral liquid.Methods:The high-performance liquid chromatography(HPLC)method was used to determine the content of hesperidin in the studied product.The Octadecylsilyl(ODS)column was 250 mm×4.6 mm×5 μm;the methanol-2%acetic acid solution(39∶61)presented mobile phase;the flow rate was 1 ml/min;the detection wavelength was 283 nm.Results:Hesperidin showed a linear relationship in the content of 0.134 4 to 1.680 0 μg,r=0.999 8.The sample recovery rate was 98.44%,RSD=1.21%(n=6).Conclusion:This method is sensitive,accurate and reproducible,and therefore can be used as one of the quality control indicators of combined stomach oral liquid.

Hesperidin;HPLC;Combined stomach oral liquid;Quality control

R286.0

A

1674-4721（2012）01（a）-040-02

張克（1974-），男，職稱：主管藥師；工作單位：河南省中醫(yī)藥研究院附屬醫(yī)院。

2011-06-07）