張 琨，張釗冠，單紅麗，黃 晶＊

（1.吉林大學(xué)08級(jí)白求恩班，吉林 長(zhǎng)春 130021；2.吉林大學(xué)白求恩第一醫(yī)院 檢驗(yàn)科）

146例ITP患者抗核抗體檢測(cè)回顧性分析

張 琨1，張釗冠2，單紅麗2，黃 晶2＊

（1.吉林大學(xué)08級(jí)白求恩班，吉林 長(zhǎng)春 130021；2.吉林大學(xué)白求恩第一醫(yī)院 檢驗(yàn)科）

＊通訊作者

免疫性血小板減少癥（immune thrombocytopenia，ITP）是以血小板顯著減少，骨髓巨核細(xì)胞發(fā)育成熟障礙，臨床表現(xiàn)以皮膚黏膜或內(nèi)臟出血為特點(diǎn)的自身免疫性疾病。其發(fā)病機(jī)制尚不十分清楚，部分患者存在抗血小板抗體，部分患者抗核抗體陽(yáng)性［1］。本文選擇146例ITP患者為研究對(duì)象，旨在探討免疫性血小板減少性紫癜抗核抗體陽(yáng)性分布情況，從而評(píng)價(jià)ANA對(duì)ITP的臨床價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 對(duì)象2009年1月至2011年7月就診于吉林大學(xué)白求恩第一醫(yī)院門診及住院部的ITP患者146例，臨床診斷符合《血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)》［2］。其中男48例（32.9%），女98例（67.1%），年齡1-76歲，平均年齡30歲，我院體檢健康者20例為對(duì)照組。男12人，女8人，平均年齡40歲。

1.2 方法采被檢者靜脈血3毫升，分離血清測(cè)定抗核抗體。ANA檢測(cè)使用IIF，試劑盒購(gòu)自德國(guó)歐蒙實(shí)驗(yàn)診斷公司，每個(gè)反應(yīng)區(qū)包括2種抗原基質(zhì)：HEp-2細(xì)胞和鼠肝組織冰凍切片。在第一次溫育時(shí)，已稀釋的血清（按試劑盒要求進(jìn)行1∶100稀釋）標(biāo)本與固定在載片反應(yīng)區(qū)上生物薄片中細(xì)胞反應(yīng)，如果標(biāo)本陽(yáng)性，特異性抗體與相應(yīng)抗原結(jié)合。在第二次溫育時(shí)，結(jié)合的抗體與熒光素標(biāo)記的羊抗人IgG抗體反應(yīng)，在熒光顯微鏡下觀察特異性的熒光模式，ANA滴度＞1∶100為陽(yáng)性。具體操作詳見(jiàn)試劑盒操作說(shuō)明書(shū)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。同一年齡組男性與女性患者陽(yáng)性率的比較以及ITP患者與對(duì)照組間ANA陽(yáng)性率的比較，采用四格表資料的χ2檢驗(yàn)，不同年齡組的比較，采用多個(gè)樣本率的χ2檢驗(yàn)。以P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 146例ITP患者的抗核抗體陽(yáng)性率

見(jiàn)表1。陽(yáng)性率為68.5%，明顯高于對(duì)照組的5.0%，兩組之間χ2檢驗(yàn)結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）。其中男性陽(yáng)性率54.2%（26／48），女性陽(yáng)性率75.5%（74／98），男女之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。（χ2＝6.801，P＜0.05）

表1 患者組與健康對(duì)照組ANA陽(yáng)性率（%）

2.2 ANA（＋）在不同年齡性別組中的分布

按ANA（＋）在不同年齡性別組中的分布將患者分成3組，1-14歲組、15-60歲組、＞60歲年齡組，其ANA陽(yáng)性率為：60%、69%、100%，各年齡組之間進(jìn)行多組獨(dú)立樣本率的χ2檢驗(yàn)，結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝6.520P＜0.05）。三個(gè)年齡組中，男女陽(yáng)性率分別為：≤14年齡組男43.5%，女76.0%（χ2＝5.298P＜0.05）；15-60年齡組男60.9%，女71.9%（χ2＝0.957P＞0.05）；＞60歲年齡組男、女均為100%，見(jiàn)表2。

2.3 不同年齡組ANA（＋）ITP患者自身抗體免疫熒光模式分析

ANA（＋）患者在不同年齡組中自身抗體免疫熒光模式的分布詳見(jiàn)表3。需要指出的是在所有年齡組中，均以核顆粒型構(gòu)成比最高。另外在≤14歲年齡組以及15-60年齡組中細(xì)胞漿型（包括G／Cyto混合型在內(nèi)）免疫熒光模式占有了一定數(shù)量的比例，值得引起注意。

2.4 ITP患者組ANA滴度及分布

ITP（＋）患者滴度分布情況見(jiàn)表4。表中滴度總數(shù)所代表的統(tǒng)計(jì)量是將混合熒光模式的人重復(fù)計(jì)算而得；陽(yáng)性人數(shù)統(tǒng)計(jì)量代表患者任意熒光模式的滴度高于1∶100時(shí)算作1人統(tǒng)計(jì)而得。所有年齡組的滴度分布趨勢(shì)都非常相似，即隨著滴度升高而人數(shù)減少。

表2 146例ITP患者不用性別、不同年齡組ANA陽(yáng)性率（%）

表3 不同年齡組ITP患者自身抗體免疫熒光模式構(gòu)成

表4 ITP患者組ANA滴度分布（例（%））

2.5 ANA（＋）與 ANA（-）ITP患者治療前后 PLT的變化

101例病例資料齊全的ITP患者，治療前后PLT變化見(jiàn)表5。所有患者治療后可見(jiàn)PLT計(jì)數(shù)明顯增高，且基本恢復(fù)到參考值范圍，但只有15-60歲年齡組治療前ANA（＋）與ANA（-）之間PLT計(jì)數(shù)有差異，值得參考。

表5 治療前后ITP患者PLT計(jì)數(shù)（±s，×109／L）

表5 治療前后ITP患者PLT計(jì)數(shù)（±s，×109／L）

注：各組內(nèi)治療前后比較均為P＜0.05；ANA陽(yáng)性與陰性之間比較＊P＜0.05

ANA ＜14歲（n＝42）15-60歲（n＝50） ≥61歲（n＝9）治療前 治療后（＋） 40.39±49.32 194.65±138.61 17.00±23.18＊治療前 治療后 治療前 治療后98.51±115.12 7.57±8.78 111.14±79.59（－） 45.28±47.88 213.00±198.25 57.43±165.55 97.00±120.75— —

3 討論

免疫性血小板減少性紫癜的發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，目前認(rèn)為主要是由于人體自身免疫耐受被打破，體液免疫和細(xì)胞免疫紊亂產(chǎn)生抗自身血小板抗體或激活T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的血小板破壞增加和（或）生成障礙［3，4］。另外，還有學(xué)者認(rèn)為病毒感染早期引起的血小板減少性紫癜是骨髓抑制的結(jié)果，臨床表現(xiàn)有自身免疫性疾病的特點(diǎn)，部分病例存在抗血小板抗體，亦有患者抗核抗體陽(yáng)性。

本文對(duì)146例明確診斷為ITP的患者進(jìn)行ANA檢測(cè)，其陽(yáng)性率高達(dá)69%，對(duì)照組20例僅1例陽(yáng)性，差異顯著，與文獻(xiàn)報(bào)道相似［5］。ANA的總陽(yáng)性率女性高于男性，1-14歲組ANA陽(yáng)性率女性高于男性的結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其他兩組ANA陽(yáng)性率無(wú)差異，不同年齡組間ANA陽(yáng)性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，直接證明了自身免疫參與了ITP的發(fā)病機(jī)制，并且隨著性別，年齡的變化而變化，尤其是在女性ITP患者。1-14組患兒大多數(shù)有感染病史，這一現(xiàn)象支持ITP急性期感染機(jī)制。

對(duì)于ITP而言，血小板表面IgG的產(chǎn)生是產(chǎn)生臨床癥狀的直接原因，雖然抗核抗體的產(chǎn)生與病情聯(lián)系不緊密，但是不同核型與不同疾病相關(guān)，有的特異性還較強(qiáng)［6］。ANA滴度變化與臨床癥狀有一致性關(guān)系，但先于疾病的活動(dòng)而升高，后于癥狀緩解而下降［7］。滴度高低與病情嚴(yán)重程度相關(guān)。分析146例ITP患者核型53%的ANA陽(yáng)性為核顆粒型，在不同年齡組ANA熒光模式分布無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但均以 核 顆 粒 型 為 主 （1-14 歲 組 66%、15-60 歲 組48%，＞61歲組36%）。100例ANA滴度以1∶100和1∶320占85%，1∶3200的只有5例患者，這五位女性患者均為腫瘤病人，說(shuō)明ANA滴度以低中度為主，高滴度的ITP患者可能合并其他疾病。

ITP的特點(diǎn)是外周血小板顯著減少和骨髓巨核細(xì)胞發(fā)育成熟障礙，所以PLT計(jì)數(shù)成為備受重視的臨床觀察指標(biāo)。本文為確定ANA（＋）與ANA（－）的患者治療前后PLT變化有無(wú)差異而進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果顯示15-60年齡組治療前ANA（＋）與ANA（－）之間的PLT計(jì)數(shù)總體均數(shù)有差異，這一結(jié)果說(shuō)明成年ITP患者若ANA檢測(cè)為陽(yáng)性，其PLT減少更為明顯，說(shuō)明ANA（＋）者病情較ANA（－）者更為嚴(yán)重，應(yīng)該的到重視。其余各年齡組內(nèi)ANA（＋）與ANA（－）之間對(duì)比均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這與有關(guān)報(bào)道結(jié)論相反［1］。筆者認(rèn)為這種現(xiàn)象可以從一個(gè)側(cè)面說(shuō)明PA-IgG和抗核抗體之間不存在交叉抗原，也就是說(shuō)ANA的檢測(cè)結(jié)果不能成為ITP的輔助診斷指標(biāo)，而只是與ITP發(fā)病相伴隨的一種現(xiàn)象，與有關(guān)文獻(xiàn)一致［8］。但是治療前后之間對(duì)比發(fā)現(xiàn)1－14歲幼年組治療后PLT計(jì)數(shù)恢復(fù)到正常值，而15－60成年組治療后PLT略低于正常值。提示兒童對(duì)于治療更為敏感，PLT的恢復(fù)情況優(yōu)于成年組。老年組人數(shù)過(guò)少，有待擴(kuò)充樣量，以待后續(xù)研究。

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1007－4287（2012）11－2130－03

吉林省教育廳資助項(xiàng)目（2009-592）

2011－11－30）