武俊明 陸繼好

水飛薊素(Silmyarin)是指從菊科藥用植物水飛薊種子的種皮中提取所得的一種黃酮木脂素類化合物。主要的活性成分有水飛薊賓(Silybin)、異水飛薊賓(Isosilybin)、水飛薊亭(Silychristin)和水飛薊寧(Silydianin)等四種同分異構(gòu)體，水飛薊用來(lái)治療肝膽疾病已有2000多年的歷史，被稱為“天然的保肝藥”，本文采用三已知對(duì)照品進(jìn)行了雜質(zhì)檢查方法可行性的初步驗(yàn)證，采用雜質(zhì)對(duì)照品進(jìn)一步驗(yàn)證方法對(duì)已知雜質(zhì)檢測(cè)的可行性。并對(duì)雜質(zhì)對(duì)照品進(jìn)行了必要的結(jié)構(gòu)確證資料。

一、儀器和試劑

BRUKER AV500型核磁共振儀

儀器：PU－1580液相色譜儀(日本Jasco公司)

UV－1575紫外檢測(cè)器(日本Jasco公司)

N－2000雙通道色譜工作站(浙江大學(xué)智能信息工程研究所)。

樣品來(lái)源：江蘇中興制藥有限公司

樣品批號(hào)：20110501 20110502 20110503

水飛薊賓對(duì)照品批號(hào)：20070201含量：99.97%

二、已知雜質(zhì)研究

1.三個(gè)已知雜質(zhì)對(duì)照品核磁共振譜的確定

根據(jù)文獻(xiàn)，水飛薊賓有三種主要有關(guān)物質(zhì)，分別為水飛薊亭、水飛薊寧、異水飛薊賓(A+B)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，除去DMSO－d6溶劑峰(δ2.50，7重峰)、精制樣品時(shí)所用溶劑峰(δ3.29)和雜質(zhì)峰，三個(gè)物質(zhì)的氫譜歸屬結(jié)合了水飛薊賓的氫譜歸屬，各個(gè)物質(zhì)H的歸屬結(jié)果三個(gè)物質(zhì)歸屬結(jié)果和文獻(xiàn)相一致，從上可以證明三個(gè)雜質(zhì)分別為水飛薊亭、水飛薊寧和異水飛薊賓(A+B)。

2.已知雜質(zhì)檢測(cè)的專屬性試驗(yàn)

色 譜 柱：Shimpak CLC －ODS 15cm ×6.0mm，5um

流動(dòng)相：甲醇∶水∶冰醋酸=41∶59∶5

檢測(cè)波長(zhǎng)：288nm

流量：1.0ml/min

進(jìn)樣量：20μl

柱溫：30℃

分別精密稱取異水飛薊賓、水飛薊寧、水飛薊亭對(duì)照品適量，加甲醇超聲使溶解，并稀釋制成約40ug/ml的溶液，另取水飛薊賓適量加甲醇超聲使溶解，并稀釋制成1mg/ml的供試液。分別精密量取異水飛薊賓、水飛薊寧和水飛薊亭溶液各1ml，置于10ml容量瓶中，加入水飛薊賓供試液稀釋定容至刻度，搖勻，制成混合溶液，進(jìn)樣20μl。

由結(jié)果可知：按照本品的有關(guān)物質(zhì)方法均能有效地檢測(cè)出異水飛薊賓、水飛薊寧和水飛薊亭已知雜質(zhì)，兩峰之間的分離度為1.642，與前后峰的分離度分別為1.990和2.004，理論塔板數(shù)為4766。按照本品的有關(guān)物質(zhì)方法考察異水飛薊賓、水飛薊寧、水飛薊亭等雜質(zhì)的分離檢出情況良好，符合規(guī)定。

三、自制樣品和上市原料有關(guān)物質(zhì)的比較

取本品適量(約相當(dāng)于水飛薊賓25mg)，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇20ml，超聲20分鐘，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液;精密量取供試品溶液20μl，注入液相色譜儀，記錄供試品溶液色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的2倍，測(cè)定波長(zhǎng)為288nm，三批樣品、上市藥品及中檢所對(duì)照品的按面積歸一化法計(jì)算有關(guān)物質(zhì)，結(jié)果見表1。

表1 有關(guān)物質(zhì)檢查結(jié)果

未知雜質(zhì)B 0.02 0.02 0.03 0.03 0.14未知雜質(zhì)C 0.02 0.04 0.03 0.02 0.07未知雜質(zhì)D / / 0.03 / /未知雜質(zhì)E 0.18 0.17 0.12 0.23 0.23未知雜質(zhì)F / / / 0.04 /水飛薊亭 / / / / /水飛薊寧 / / / / /異水飛薊賓 0.23 0.26 0.29 0.14 0.22總雜質(zhì)0.45 0.51 0.50 0.47 0.66

結(jié)論：參照《化學(xué)藥物雜質(zhì)研究的技術(shù)指導(dǎo)原則》本品最大日劑量為420mg(≤2g)，故本品報(bào)告限0.05%，鑒定限0.10%，質(zhì)控限0.15%。其中未知雜質(zhì)E和已知雜質(zhì)異水飛薊賓大于鑒定限和質(zhì)控限，未知雜質(zhì)E含量明顯低于已上市產(chǎn)品雜質(zhì)實(shí)測(cè)值;已知雜質(zhì)異水飛薊賓是水分薊素中主要有效成分之一，見文獻(xiàn)。

四、討論

在水飛薊素中水飛薊賓含量最高，活性也最高。常鳳崗等研究了我國(guó)引種的水飛薊化學(xué)成分，得到兩個(gè)單體，并與國(guó)外的栽培品種進(jìn)行了比較鑒定為水飛薊賓和水飛薊寧。

本文對(duì)已知雜質(zhì)數(shù)量文獻(xiàn)檢索和核磁共振譜結(jié)構(gòu)確證研究，采用雜質(zhì)對(duì)照品進(jìn)一步驗(yàn)證方法對(duì)已知雜質(zhì)檢測(cè)的可行性。參照《化學(xué)藥物雜質(zhì)研究的技術(shù)指導(dǎo)原則》和上市原料藥有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行對(duì)比分析，對(duì)含量大于鑒定限和質(zhì)控限但小于上市原料的未知雜質(zhì)E進(jìn)行質(zhì)譜分析和DAT全波長(zhǎng)分析，確定為同一雜質(zhì)。

1 定天明、田頌九、張正行、谷道昭、施蘊(yùn)華、孫曾培等.水飛薊素制劑中有效成分HPLC分離測(cè)定［J］.藥物分析雜志，1999，19(3)：304－307.

2 苑輝卿等.水飛薊素近期研究，國(guó)外醫(yī)學(xué).中醫(yī)中藥分冊(cè)1996，18(1)：3－5.

3 朱鉉等.水飛薊素制劑的研究進(jìn)展，中國(guó)野生植物資源，2001，20(3)：47－49.

4 吳知行等.水飛薊賓及其水溶性衍生物和制劑含量測(cè)定方法的研究 南京藥學(xué)院學(xué)報(bào)，1981，12(2)：28－36.