李江濤 趙和泰 張效北 韓笑元 李偉 覃雪燕 李丁 何龍

(解放軍第303醫(yī)院干細(xì)胞中心 南寧 530021)

重癥乙型肝炎占慢性乙型肝炎的80%以上,并發(fā)癥較多,其主要的生理性改變是肝細(xì)胞的大量壞死及機(jī)體免疫功能改變。近年來,臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療肝病已成為國內(nèi)外干細(xì)胞研究的熱點(diǎn),間充質(zhì)干細(xì)胞是具有高度自我更新能力和多向分化潛能的干細(xì)胞,能夠分化為肝細(xì)胞樣細(xì)胞[1],在治療肝病方面發(fā)揮著重要的作用。我院2010年6月至2011年5月采用間充質(zhì)干細(xì)胞治療慢性重癥乙型肝炎45例,效果滿意,現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

60例均為我院收治的慢性重癥乙型肝炎的患者,均符合2000年《病毒性肝炎防治方案》中的診斷標(biāo)準(zhǔn),排除合并感染的患者,均為入選標(biāo)準(zhǔn):(1)乙肝表面抗原(HBsAg)陽性,e抗體陽性≥6個(gè)月;(2)HBV DNA水平≥105copies/mL;(3)出現(xiàn)丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和總膽紅素(TB)升高;(4)未接受過核苷類似物或干擾素抗病毒治療。

1.2 治療方法

研究組患者均臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞,采集新生兒臍帶,將臍帶剪碎至約1mm×1mm×1mm,首先經(jīng)0.1%膠原酶37℃消化30min后,在經(jīng)0.125%的胰酶37℃消化30min,用100目及200目分別進(jìn)行濾網(wǎng)過濾,去除未消化的組織。然后進(jìn)行培養(yǎng)、接代,獲得(1.0～5.6)×107的間充質(zhì)干細(xì)胞,置于4℃下進(jìn)行保存,備用。保存時(shí)間不能超過60h。進(jìn)行移植治療前注射小劑量地塞米松預(yù)防過敏反應(yīng)。根據(jù)輸入途徑?jīng)Q定細(xì)胞數(shù)量,前臂靜脈8×107個(gè)／次,肝動(dòng)脈4×107個(gè)/次。干細(xì)胞移植過程行全環(huán)境保護(hù),無環(huán)鳥苷靜脈應(yīng)用預(yù)防病毒感染。術(shù)后當(dāng)日起續(xù)使用促肝細(xì)胞生長素3d,促進(jìn)干細(xì)胞在肝臟內(nèi)分化為肝細(xì)胞。

1.3 評價(jià)指標(biāo)

比較2組患者的血清總膽紅素(TB)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(γ-GT)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、凝血酶原時(shí)間(PT)、血液生化指標(biāo)采用儀器為日立7170A全自動(dòng)生化分析儀測定,試劑盒均由南京建成生物工程研究所提供,操作步驟按試劑盒說明進(jìn)行。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

表1 治療前后各指標(biāo)的變化(±s)

表1 治療前后各指標(biāo)的變化(±s)

注:2組相比,*P<0.05

時(shí)間 A ST(IU／L) A LT(IU／L) TB(μm ol／L) PT(s) γ-G T(IU／L)對照組 65.4±55.7 69.3±32.9 51.3±13.7 22.7±2.1 338.4±55.7研究組 40.6±4.2 39.8±6.2 31.4±2.3 (10.2±1.2)* (712.3±101.5)*

2 結(jié)果

研究組患者的手術(shù)成功率為100%,術(shù)后未見嚴(yán)重不良反應(yīng)及并發(fā)癥發(fā)生,隨訪4～12個(gè)月,患者的臨床癥狀均得到好轉(zhuǎn),研究組患者的AST、ALT、TB、PT明顯低于對照組,γ-GT明顯高于對照組,P<0.05,見表1。

3 討論

研究發(fā)現(xiàn),間充質(zhì)干細(xì)胞具有向多種細(xì)胞(包括肌腱、韌帶、肝細(xì)胞、心肌細(xì)胞和骨髓基質(zhì)等)分化發(fā)育的潛能,并和人體免疫系統(tǒng)相互作用,發(fā)揮重要的免疫調(diào)節(jié)作用。特別是骨髓來源的間充質(zhì)干細(xì)胞已經(jīng)被用于終末期肝病的治療,并被證實(shí)安全、可靠,在一定程度上可顯著提高肝功能。UC-MSC治療ACLF能明顯減輕肝臟炎癥,改善肝臟功能,減輕腹水,促進(jìn)肝細(xì)胞再生,降低死亡率,其治療的適應(yīng)癥為早、中期的患者,而對晚期患者無明顯治療作用。本研究為肝衰竭患者的治療提供了新的有效的治療手段,具有重要的臨床意義。

γ-GT較治療前顯著上升,P<0.05。這表明間充質(zhì)干細(xì)胞移植到受損的肝臟中可分化為成熟的肝細(xì)胞,從而促進(jìn)肝功能的恢復(fù),且臍帶來源廣泛,便于取材、保存,對供者無不利影響。綜上所述,間充質(zhì)干細(xì)胞治療肝病可顯著改善患者的肝功能,緩解臨床癥狀。本臨床試驗(yàn)證實(shí):人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療肝硬化患者安全性好,能升高白蛋白,減少腹水,并能明顯改善肝硬化患者的預(yù)后。本研究治療病例相對較多(以往研究<10例,本研究45例),并有明確的對照組(15例,而以往研究無對照組),采用了更精確的預(yù)后指標(biāo)(MELD和MELD-Na。以往研究多采用Child-Pugh評分,主觀性強(qiáng)),所以本研究具有很好的代表性。

[1]任紅英,趙欽軍,劉擁軍,等.臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞體外誘導(dǎo)分化為肝細(xì)胞樣細(xì)胞的研究[J].山東醫(yī)藥,2008,48(30):24～26.

[2]徐若男,施明,王福生.人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的特征及其臨床應(yīng)用前景[J].中國免疫學(xué)雜志,2010,26(1):82～84.