趙斌 賈繼芳

抗酸桿菌冷染色法的臨床應(yīng)用分析與研究

趙斌 賈繼芳

目的 探討抗酸桿菌冷染色法對結(jié)核病臨床診斷的應(yīng)用價值。方法 用直接涂片熱染法和冷染法對2008年1月～2011年12月送檢的肺結(jié)核病患者或可疑患者的痰標(biāo)本、支氣管刷片、尿液、胸腔積液、腹腔積液、關(guān)節(jié)腔積液、腦脊液等1680份標(biāo)本做同步檢測。結(jié)果 1680份送檢標(biāo)本中熱染法和冷染法的陽性率分別為9.46%（159/1680）和9.28%（156/1680）。熱染法的失敗率為0.48%（8/1680），冷染法為0%。結(jié)論 直接涂片冷染法直觀、簡便、價廉，是診斷臨床結(jié)核病的重要手段。

結(jié)核病；抗酸桿菌；冷染色法；臨床；診斷

我國作為世界上結(jié)核病疫情最嚴(yán)重的國家之一，快速準(zhǔn)確地診斷是控制結(jié)核病的重要手段。臨床結(jié)核分枝桿菌檢查方法主要有；細(xì)菌培養(yǎng)、抗體檢測、聚合酶連反應(yīng)、抗酸染色等多種。在結(jié)核病的防治工作中，細(xì)菌學(xué)檢查占有重要的地位，目前標(biāo)本直接涂片找抗酸桿菌是發(fā)現(xiàn)傳染源的主要手段，此方法操作簡便、快速、高效而被廣泛應(yīng)用于臨床，我們就本院1680份標(biāo)本分別用石炭酸復(fù)紅熱染法與冷染法進(jìn)行比較分析。

1 資料與方法

1.1 一般資料 資料來源于本院2008年1月～2011年12月送檢的肺結(jié)核病患者或可疑患者的痰標(biāo)本、支氣管刷片、尿液、胸腔積液、腹腔積液、關(guān)節(jié)腔積液、腦脊液等，共計(jì)1680份。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法 加熱染色法試劑完全按照《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》配制。冷染色法試劑選用《臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)》金永染色法試劑配方并加以改進(jìn)。

染色液：石炭酸復(fù)紅工作液新法配制：⑴配制5%石碳酸水溶液：40～50℃水浴加熱石碳酸使其溶化，取液態(tài)石碳酸4.5mL溶于80mL預(yù)加熱的蒸餾水中，再加蒸餾水至90mL。⑵向上述石炭酸溶液中加入無水乙醇10mL，在將其溶液加熱至50℃左右。⑶向上述預(yù)加熱的石碳酸乙醇溶液中加8g堿性復(fù)紅，充分振蕩使其完全溶解。

脫色復(fù)染合劑：美藍(lán)5g，加入95%乙醇160mL，溶解后加入蒸餾水250mL，混勻，邊搖邊加入硫酸9mL，加入硫酸不宜太快，以確保安全。

1.3 儀器 奧林巴斯顯微鏡（OLYMPUS CX-41）。

1.4 標(biāo)本處理

1.4.1 痰標(biāo)本從送檢盒中用棉簽挑取干酪樣，膿樣等可疑部分痰標(biāo)本進(jìn)行涂片。支氣管刷片標(biāo)本直接涂片。其他標(biāo)本經(jīng)離心（3000r）取管底沉淀直接涂片。

1.4.2 以上標(biāo)本涂片自然風(fēng)干，滴加1%稀鹽酸或5%冰醋酸溶液固定。

1.5 方法 直接涂片加熱染色法：涂片自然干燥后固定，染色方法完全參照全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》。

直接涂片冷染色法：涂片自然干燥后滴加1%稀鹽酸或5%冰醋酸溶液固定，之后加石碳酸復(fù)紅冷染15min水洗，依據(jù)室溫適當(dāng)可延長冷染時間，脫色和堿性美藍(lán)復(fù)染合為一步染5min，干后鏡檢。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

1680 份標(biāo)本中加熱染色法陰性1521份，陽性159份，陽性率9.46%，失敗8份，失敗率0.48%；冷染色法陰性1524份，陽性156份，陽性率9.28%，失敗0份，失敗率0%；兩種方法的陽性率在統(tǒng)計(jì)學(xué)上無顯著性差異（P＞0.05）。陰性率則有顯著性差異。直接涂片熱染法的操作步驟比直接涂片冷染法復(fù)雜，而且有假陽性，還有因操作失誤而導(dǎo)致玻片斷裂，實(shí)驗(yàn)失敗。

3 討論

結(jié)核病是人體感染結(jié)核桿菌而發(fā)生的一種非常常見的傳染病，也是傳染病中的頭號殺手，病死率為各種傳染病之首，是全球關(guān)注的重大公共衛(wèi)生問題之一，也是我國規(guī)定的乙類法定報告?zhèn)魅静?。隨著人們生活水平的提高、醫(yī)療技術(shù)的發(fā)展、采取群防群治、卡介苗的接種、使結(jié)核病的發(fā)病率和病死率大為降低。但近年來，結(jié)核病似乎死灰復(fù)燃，發(fā)病率有所回升。在臨床作為確診結(jié)核病診斷的方法之一就是標(biāo)本直接涂片染色鏡檢找抗酸桿菌，這也是確診肺結(jié)核最簡單最有效的手段之一，同時也是診斷肺結(jié)核的重要指標(biāo)[2]。直接涂片我們依然采用的是傳統(tǒng)的熱染色法，所說的熱染色法就是石碳酸復(fù)紅加熱法，直接涂片自然干燥后，加染液石碳酸復(fù)紅鋪滿整個玻片，在酒精燈上加熱5min，邊加熱邊繼續(xù)滴加染液，防止染液干燥，之后用鹽酸酒精脫色，堿性美藍(lán)復(fù)染，干燥后在顯微鏡下找抗酸桿菌[3]。采用此方法中，加熱的石碳酸復(fù)紅能夠加快抗酸桿菌的著色能力，有利于鏡下觀察，但加熱過程中染液外溢，產(chǎn)生大量的氣溶膠，污染環(huán)境，不利于工作人員的健康。在加熱過程中時間不好把握，容易造成染液干燥，甚至玻片斷裂，需用的染液量相對比較大，染液干燥容易使染液碴子殘留在玻片上而影響鏡檢，也導(dǎo)致了假陽性率有所增加。而采用的冷染法，石碳酸復(fù)紅的配制采用了新的配制方法，試劑配制時預(yù)加熱可促使堿性復(fù)紅更充分的溶解，減少染料渣殘留于玻片上，加大堿性復(fù)紅的濃度，能使抗酸桿菌在不加熱的條件下更好更快地著色，改變了固定方法，取消了石碳酸復(fù)紅加熱的步驟，用延長初染時間使抗酸桿菌更好的著色，依環(huán)境溫度的高低適當(dāng)延長初染時間[4]，染液用量相對于加熱法有所減少，降低了試驗(yàn)成本，將鹽酸酒精脫色和堿性美藍(lán)復(fù)染兩步合作一步，使脫色能更徹底，背景比較干凈，提高鏡檢率。

本研究通過比較這兩種方法，結(jié)果兩種方法的陽性率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。由于冷染法將三步染色法簡化為兩步法，免去了加熱的步驟減少了環(huán)境污染，節(jié)約成本，操作方法相對簡便，節(jié)省了工作人員的時間，提高工作效率，染色后背景干凈、提高鏡檢率，值得推廣。

[1] 彭志文.聚合酶鏈反應(yīng)檢測結(jié)核分枝桿菌的臨床應(yīng)用價值[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2010,7(14):1490-1491.

[2] 徐秀琴，張惠琴，徐秀霞，肺結(jié)核患者痰標(biāo)本質(zhì)量對抗酸桿菌的影響及護(hù)理對策[J].臨床肺科雜志，2010,15(2)：300.

[3] 中華人民共和國醫(yī)政司.全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程[M].3版.南京：東南大學(xué)出版社，2006：726-727.

[4] 王仙、吳翠、袁例.溫度對結(jié)核桿菌抗酸染色檢出率的影響[J].中華現(xiàn)代內(nèi)科學(xué)雜志，2006,3(3):269-270.

10.3969/j.issn.1009-4393.2012.25.076

744000 甘肅省平?jīng)鍪械诙嗣襻t(yī)院（趙斌 賈繼芳）