李佰玲

決明子為豆科植物決明或小決明的干燥成熟種子，最早記錄于《神農(nóng)本草經(jīng)》，現(xiàn)被2005年版的《中國(guó)藥典》收載。決明子歸屬肝、腎、大腸經(jīng)，其性甘、苦、咸、微寒。中藥學(xué)記載其具有清肝明目，潤(rùn)腸通便的功效。近年來(lái)研究證實(shí)決明子具有確切的降血脂的作用，其復(fù)方制劑在臨床上已得到廣泛應(yīng)用。但是決明子降血脂的有效成分尚不確切，這在一定程度上限制了對(duì)決明子制劑的研究和開發(fā)［1］。本研究旨在淺析決明子降血脂的有效成分，為決明子制劑的開發(fā)利用提供質(zhì)量控制指標(biāo)。

1 資料與方法

1.1 材料和儀器 決明子購(gòu)置于當(dāng)?shù)刂兴幍辏?jīng)鑒定為豆科植物決明的干燥成熟種子。柱層析硅膠(100～200目、200-300目)、薄層層析硅膠，均產(chǎn)自青島海洋化工集團(tuán)有限公司;AB-8大孔吸附樹脂為天津南開大學(xué)化工廠生產(chǎn);紅外光譜儀、反相薄層板(RPl8)、質(zhì)譜儀、核磁共振儀均為進(jìn)口設(shè)備。SwG-4顯微熔點(diǎn)測(cè)定儀為上海精密科學(xué)儀器有限公司生產(chǎn)(溫度計(jì)未校正)。高效液相色譜儀、UV-VIS 8500分光光度計(jì)為無(wú)錫科達(dá)儀器廠生產(chǎn)。YWG-C14H37(液相色譜固定相，10～30 μm)、sephadex LH-20采購(gòu)自天津化學(xué)試劑二廠色譜技術(shù)開發(fā)公司。高效液相色譜用甲醇為色譜純，其余所有試劑均為分析純，水為重蒸餾水。

1.2 方法 將決明子藥材研成粗粉，按系統(tǒng)溶劑提取法，制的決明子正丁醇提取物。將決明子的正丁醇提取物上AB-8大孔吸附樹脂，依次通過(guò)水、20%乙醇、80%乙醇洗脫，得到80%乙醇洗脫物［2］。然后將洗脫物分別經(jīng)過(guò)硅膠柱和氯仿-甲醇梯度洗脫，分段收集，其中氯仿-甲醇(9∶1)收集的洗脫物為組分1，氯仿-甲醇(4∶1)收集的洗脫物為組分2，氯仿-甲醇(3∶1)收集的洗脫物為組分3。組分1經(jīng)過(guò)經(jīng)硅膠柱層析(石油醚-丙酮梯度洗脫)分離得到化合物Ⅰ和化合物Ⅱ，組分2經(jīng)過(guò)Spehadex LH-20柱層析(甲醇一水梯度洗脫)分離得到化合物Ⅲ和化合物Ⅳ，組分3經(jīng)過(guò)C18柱層析(甲醇一水梯度洗脫)分離得到化合物Ⅴ和化合物Ⅵ。用薄層色譜法和高效液相色譜法對(duì)上述六種化合物進(jìn)行純度檢查，均未見雜質(zhì)，純度在95%以上。

2 結(jié)構(gòu)鑒定

分別用13C-NMR、1H-NMR、UV、IR和MS等對(duì)上述六種化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定［3］。

化合物Ⅰ經(jīng)鑒定確定為確定其為鈍葉素，即2，8-二羥基-1-甲氧基-3-甲基蒽醌。化合物Ⅱ經(jīng)鑒定，確定其為橙黃決明素，即 2，6，8-三羥基-1，7-二甲氧基-3-甲基蒽醌?；衔铫蠼?jīng)鑒定確定其為鈍葉決明素苷，即2-O-β-D-葡萄糖-8-羥基-1，6，7-三甲氧基-3-甲基蒽醌?；衔铫艚?jīng)鑒定確定其為鈍葉素苷。即2-O-β-D-吡喃葡萄糖-8-羥基-1-甲氧基-3-甲基蒽醌?；衔铫踅?jīng)鑒定，確定其為大豆苷，即7-O-β-D-吡喃葡萄糖-4-羥基異黃酮?；衔铫鼋?jīng)鑒定，確定其為cassitoroside，即2-乙?；?3-O-β-D-呋喃芹菜糖-8-O-β-D-吡喃葡萄糖-1，6-二甲氧基奈。

3 有效成分篩選

對(duì)上述六種化合物進(jìn)行藥效學(xué)研究分析，通過(guò)運(yùn)用低密度脂蛋白受體(LDLR)報(bào)告基因模型分析顯示化合物Ⅱ能明顯增強(qiáng)熒光素酶的活性，隨著化合物濃度的增強(qiáng)熒光素酶的活性也不斷升高。此項(xiàng)結(jié)果證明化合物Ⅱ能在一定程度上明顯增強(qiáng)低密度脂蛋白的基因表達(dá)，從而調(diào)節(jié)低密度脂蛋白的代謝，降低血脂的含量。因此化合物Ⅱ?yàn)闆Q明子的有效成分。

4 討論

決明子具有廣泛的藥用價(jià)值，在我國(guó)資源十分豐富。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道決明子的有效成分為蒽醌類、吡酮類和多糖。但對(duì)于其具體的有效成分尚缺乏研究，因而限制了決明子制劑的開發(fā)和利用。

本研究通過(guò)系統(tǒng)溶劑提取法提取出決明子正丁醇提取物，并經(jīng)過(guò)多層分離獲得了六種化合物，通過(guò)對(duì)六種化合物進(jìn)行有效成分鑒定證明化合物Ⅱ(橙黃決明素)，即2，6，8-三羥基-1，7-二甲氧基-3-甲基蒽醌為決明子的有效成分。其能夠顯著增強(qiáng)低密度脂蛋白的基因轉(zhuǎn)錄水平，有效降低血清中低密度脂蛋白的含量［4］。低密度脂蛋白是血清中膽固醇的一個(gè)重要存在形式，化合物Ⅱ能有效調(diào)節(jié)低密度脂蛋白的代謝，對(duì)保持膽固醇在血清中的正常濃度起著非常重要的作用。

隨著人們生活水平的不斷提高，高血脂的發(fā)病率也在逐年上升，高血脂易誘發(fā)多種疾病，人們對(duì)高血脂的危害性的認(rèn)識(shí)不斷提高，對(duì)降血脂藥物的需求也在不斷增加。決明子降血脂療效可靠，資源豐富，是一個(gè)不可多得的降血脂藥物。研究決明子的有效成分，為決明子制劑提供質(zhì)量控制指標(biāo)，對(duì)于保證決明子制劑的質(zhì)量，提高其降血脂的水平大有裨益。對(duì)決明子有效成分的研究將大大促進(jìn)決明子制劑的開發(fā)利用。

［1］愈發(fā)榮.決明子不同部位提取物的調(diào)血脂作用.中國(guó)臨床康復(fù)，2006，17(6):904-906.

［2］張加雄.決明子降血脂有效部位的化學(xué)分成.華西藥學(xué)雜志，2008，23(6):648-650.

［3］張加雄.決明子降血脂有效部位的研究.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2006，17(6):904-905.

［4］郝延軍.決明子蒽醌類化學(xué)成分研究.中草藥，2003，34:(1):18-20.