李慧娥 內(nèi)蒙古自治區(qū)呼和浩特市第一醫(yī)院消化內(nèi)科 呼和浩特 010020

冷雪芹 內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院消化內(nèi)科

宋光明 內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)職業(yè)技術(shù)學(xué)院

食管癌是我國最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)生發(fā)展與一些癌基因及其產(chǎn)物的表達(dá)密切相關(guān)[1]。抑癌基因是正常的細(xì)胞基因，它們具有維持細(xì)胞正常生長、誘導(dǎo)細(xì)胞程序化死亡（凋亡）等功能。這些基因的突變可導(dǎo)致細(xì)胞的增殖凋亡失控，增加細(xì)胞癌變的可能性[2]。p33/ING1基因是近年來克隆出的抑癌基因，其低表達(dá)與人類一些惡性腫瘤的發(fā)生、進(jìn)展有關(guān)[3]。PTEN基因是1997年在染色體10q23上克隆出的腫瘤抑制基因[4]。在細(xì)胞周期調(diào)控、細(xì)胞骨架重組、信號傳導(dǎo)和腫瘤細(xì)胞浸潤中起重要作用[5]。p33/ING1、PTEN基因的失活將失對細(xì)胞生長的負(fù)調(diào)節(jié)作用，這可能是導(dǎo)致腫瘤發(fā)生發(fā)展的機(jī)制之一。

1 材料與方法

1.1 材 料 食管鱗癌標(biāo)本58例，取自內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院一附院2006年8月—2008年8月手術(shù)切除的標(biāo)本，有完整的臨床資料。其中男41例，女17例，年齡≥60歲33例，＜60歲25例。經(jīng)病理證實，58例均為食管鱗狀細(xì)胞癌，其中淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移20例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移38例。浸潤深度：淺層19例，腫瘤浸潤深度在黏膜層、黏膜下層或淺肌層；深層39例，腫瘤浸潤深度在深肌層或外膜層。43例癌旁黏膜呈輕—中—重度不典型增生改變。組織學(xué)分類：鱗狀細(xì)胞癌高分化20例，中分化19例，低分化19例。所有患者術(shù)前均未接受化療、放療及其它治療。

1.2 方 法 取正常食管黏膜、癌旁食管黏膜及癌組織各1份，并將其充分固定于10%中性福爾馬林溶液中，脫水、透明、石蠟包埋，以4μm厚連續(xù)切片5張，1張經(jīng)HE染色，3張進(jìn)行免疫組化染色，另1張備用。采用免疫組織化學(xué)技術(shù)聯(lián)合檢測凋亡促進(jìn)因子P33/ING1、PTEN基因分別在食管鱗癌組織、癌旁不典型增生組織及其相應(yīng)的正常食管黏膜組織中的表達(dá)情況。鼠抗人P33 ING1（CAb9）單克隆抗體購自Santa Cruz Biotechnology。鼠抗人PTEN/MMAC1免疫組化單克隆抗體、SP檢測試劑盒、DAB顯色試劑盒均購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。免疫組化程序嚴(yán)格按照嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作，用己知的PTEN陽性表達(dá)的癌組織作陽性對照，用PBS代替I抗作陰性對照。

1.3 結(jié)果判定 參照Bresalier等[6]半定量法判斷食管癌組織PTEN表達(dá)情況。在光學(xué)顯微鏡下每張切片隨機(jī)選取切片平展、細(xì)胞形態(tài)和組織結(jié)構(gòu)清晰的視野，選取5個視野（×40），每個視野計數(shù)100個細(xì)胞，計算各個視野中的陽性細(xì)胞的平均百分率作為該切片陽性細(xì)胞的百分率，陽性細(xì)胞陰性計0分，陽性細(xì)胞＜30%計1分，陽性細(xì)胞30%～70%計2分，陽性細(xì)胞＞70%計3分；同時染色強(qiáng)度亦進(jìn)行打分，以多數(shù)呈現(xiàn)的染色特征為計分標(biāo)準(zhǔn)：無色0分，淡黃色1分，棕黃色2分，棕褐色3分；最后以陽性細(xì)胞百分率計分和染色強(qiáng)度計分相加所得的總分進(jìn)行結(jié)果判定：0分為陰性，1～6分為陽性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。計數(shù)資料采用χ2檢驗，相關(guān)性檢驗用Spearman相關(guān)分析，顯著性水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 三種食管組織P33/ING1及PTEN表達(dá)情況 見表1、圖1～6（見封三）。

表1 三種食管組織p33/ING1及PTEN表達(dá)情況 例

2.2 食管鱗癌組織PTEN、p33/ING1表達(dá)相關(guān)性 35

例PTEN陽性表達(dá)的食管癌標(biāo)本中有19例p33/ING1呈陽性表達(dá)，23例PTEN陰性標(biāo)本中僅有5例p33/ING1呈陽性表達(dá)，即PTEN蛋白陽性表達(dá)的食管癌標(biāo)本中p33/ING1蛋白陽性表達(dá)率也高，PTEN蛋白陰性表達(dá)的食管癌標(biāo)本中p33/ING1蛋白陽性表達(dá)率也低。PTEN與p33/ING1呈現(xiàn)顯著正相關(guān)（r=0.985，P＜0.05）。

3 討論

INGI基因是Garkavtsev等[3]采用cDNA消減雜交方法，并結(jié)合體內(nèi)選擇技術(shù)成功地克隆出的一種抑癌基因。p33/ING1對p53功能的發(fā)揮起明顯抑制作用[7]。Helbing[8]等發(fā)現(xiàn)降低內(nèi)源性p33/ING1含量可使細(xì)胞獲得抗死亡能力，阻止凋亡，促使腫瘤形成，而增加p33/ING1含量可增加細(xì)胞凋亡的敏感性，證實p33/ING1有促細(xì)胞凋亡的作用。Tokunage等[9]發(fā)現(xiàn)癌組織中p33/ING1mRNA表達(dá)明顯低于正常組織。Oki等[10]檢測了20例胃癌及相應(yīng)正常組織，結(jié)果顯示15例胃癌組織中p33/ING1mRNA表達(dá)水平明顯下降。本研究中絕大部分正常上皮細(xì)胞為陽性表達(dá)，而癌組織中大部分為陰性表達(dá)，p33/ING1陽性表達(dá)率從正常上皮到不典型增生至癌組織逐漸降低，其中正常黏膜與不典型增生組p33/ING1陽性率比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。癌組織p33/ING1陽性表達(dá)率顯著低于正常黏膜中的陽性表達(dá)率（P＜0.01）。本實驗結(jié)果表明，p33/ING1蛋白的改變在食管黏膜的增殖細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)換中起重要作用，其機(jī)制可能與抑制細(xì)胞生長、遷移、鋪展和局部黏附、促進(jìn)血管形成，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡等因素有關(guān)，癌組織有較多的細(xì)胞逃逸p33/ING1蛋白的控制而自主生長，p33/ING1通過下調(diào)表達(dá)減弱了對癌細(xì)胞的生長抑制和凋亡控制，從而參與食管癌的發(fā)生發(fā)展。因此，檢測p33/ING1具有重要的實用價值，可以作為食管癌有效的生物學(xué)標(biāo)志和預(yù)后預(yù)測指標(biāo)。

PTEN在惡性腫瘤主要通過基因的突變、缺失或甲基化而失活，PTENmRNA或蛋白表達(dá)減低，甚至不表達(dá)。目前發(fā)現(xiàn) PTEN在前列腺癌、乳腺癌、肺癌等[11]多種腫瘤細(xì)胞株中有表達(dá)缺失和突變。本研究發(fā)現(xiàn)食管浸潤癌組織中PTEN陽性表達(dá)率60.34%，顯著低于正常食管黏膜組織和癌旁不典型增生組織的陽性表達(dá)率（P＜0.05）。本組結(jié)果顯示，PTEN廣泛表達(dá)于上皮細(xì)胞，而食管癌又是主要來源于食管鱗狀上皮的癌癥，PTEN在食管癌變過程中有表達(dá)缺失現(xiàn)象，使細(xì)胞在增殖過程中喪失負(fù)調(diào)控作用而過度增殖，以致細(xì)胞發(fā)生癌變。說明PTEN基因失活導(dǎo)致細(xì)胞異常增生癌變，且其腫瘤惡性程度較高，易出現(xiàn)浸潤和轉(zhuǎn)移。

本組結(jié)果顯示，p33/ING1和PTEN陽性表達(dá)從正常食管黏膜組織到癌旁不典型增生組織再到食管鱗癌組織呈逐漸降低之勢。p33/ING1和PTEN在食管鱗癌中的陽性表達(dá)率分別為41.37%和60.34%，當(dāng)腫瘤出現(xiàn)轉(zhuǎn)移時，PTEN陽性表達(dá)率顯著降低，p33/ING1陽性表達(dá)率也顯著降低，二者呈正相關(guān)（P＜0.05）。腫瘤惡性程度越高，腫瘤轉(zhuǎn)移的可能性也越高，同時，PTEN蛋白的陽性表達(dá)率顯著降低，這可能與PTEN的陽性表達(dá)更為敏感有關(guān)。PTEN、p33/ING1基因的失活將失去對細(xì)胞生長的負(fù)調(diào)節(jié)作用，這可能是導(dǎo)致腫瘤發(fā)生發(fā)展的機(jī)制之一。

p33/ING1和PTEN在食管鱗癌組織中表達(dá)的關(guān)系，提示多因素參與了食管鱗癌的發(fā)生發(fā)展和浸潤轉(zhuǎn)移，p33/ING1和PTEN在食管鱗癌的分化和轉(zhuǎn)移中可能起了協(xié)同作用，綜合檢測意義較大，一方面可以提示腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的原因，判斷預(yù)后；另一方面可以根據(jù)其表達(dá)的意義選擇化療方案。

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