江 澄 林勝友 浙江省中醫(yī)院 杭州 310000

中醫(yī)藥調(diào)節(jié)免疫及抗炎作用已通過大量實驗證明，而這些作用的發(fā)揮，部分是通過影響某些信號傳遞過程及其生物學(xué)效應(yīng)，進而輔助機體增強自身免疫力或者抑制某些炎癥反應(yīng)來實現(xiàn)的。近幾年，大量的研究表明，此過程可能與調(diào)控TLRS及其信號通路有關(guān)。同時也有實驗證明，TLRS與腫瘤之間又有著密切的關(guān)系，本文就中醫(yī)藥調(diào)控TLRS與腫瘤治療相關(guān)性作一探討。

1 Toll樣受體及其信號通路

Toll樣受體是廣泛存在于昆蟲、脊椎動物、植物中序列高度保守而古老的家族，與果蠅Toll蛋白同源的人類Toll樣蛋白基因及其編碼的TLRS于1997年[1]被首次發(fā)現(xiàn)。TLRS是一種重要的模式識別受體（pattern recognition receptors，PRRS），參與病原相關(guān)分子模式（microorganism-associated molecular patterns，PMAPS）。它主要識別病原微生物進化中的保守分子，主要包括脂多糖（LPS）、肽聚糖、酵母多糖以及病原體核酸等，使人們意識到天然免疫并不是簡單地發(fā)揮非特異性吞噬、清除作用，它也可以通過引起細胞因子的釋放，上調(diào)共刺激分子的表達，為適應(yīng)性免疫的啟動提供活化信號[2]。隨著研究的不斷深入，發(fā)現(xiàn)TLRS既能促進免疫細胞膜表面表達相關(guān)的免疫分子及免疫細胞的成熟和功能化，也能在抗病毒感染，調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答及其家族的協(xié)同作用影響免疫應(yīng)答等方面起重要的作用。

TLRS家族成員均屬I型跨膜受體蛋白，結(jié)構(gòu)分為胞外區(qū)、跨膜部分和胞質(zhì)區(qū)。胞外區(qū)包括18～31個富含亮氨酸的重復(fù)序列和半胱氨酸結(jié)構(gòu)。胞質(zhì)區(qū)大約為200個氨基酸大小，與IL-1受體的胞質(zhì)區(qū)相似，因而被稱為Toll/IL-1受體同源區(qū)（Toll/IL－1 receptor homologous region，TIR），其中包括 3個保守盒，這是TLRS向下游傳遞信號的核心元件。胞內(nèi)段的髓樣分化因子88（MyD88），作為一種重要的轉(zhuǎn)接蛋白參與TLRS介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)[3]。其他的下游信號分子還包括：B轉(zhuǎn)化生長因子激活的蛋白激酶（TAK1）、IL-1相關(guān)蛋白激酶（IRAKs）、細胞核因子kB（NF-kB）、TAK1結(jié)合蛋白1和2（TAB1 和TAB2）、腫瘤壞死因子受體活化因子6（TRAF6）以及AP-1等。

目前，TLRS信號通路以TLR4的信號傳導(dǎo)途徑研究相對成熟，根據(jù)信號傳導(dǎo)是否依賴MyD88依賴性信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，分為依賴MyD88的信號傳導(dǎo)通路和非依賴MyD88的途徑[4]。

2 TLRS與腫瘤

過去十年中，癌癥研究取得了巨大的進展，同時，癌癥原來所定義的基本特征（持續(xù)增長信號，逃避增長抑制，抗細胞死亡，無限的復(fù)制能力，誘導(dǎo)血管生成和組織浸潤轉(zhuǎn)移）最近被重新審視和更新，逃避免疫殺傷逐漸上升為一個新興的癌癥標(biāo)志，對這一概念適用性的認可，將越來越影響人類治療腫瘤新方法的發(fā)展[5]。腫瘤利用多種機制，幫助它們達到有利于其自身生存的免疫平衡。它們分泌免疫細胞因子（TGF-β、IL-10等）、抗凋亡分子的表達，或者下調(diào)腫瘤抗原和MHC-Ⅰ的表達[6]。

研究發(fā)現(xiàn)，TLRS在小鼠和人類的多種腫瘤細胞株上表達，且并不局限于單一的TLRS，即使是同一種腫瘤，也視TLRS分型的不同而不同，TLRS是起抑制作用還是促進作用，需要進一步的研究探討[7]。

有研究表明，TLRS有促進腫瘤發(fā)展的作用，它激活后引起的下游信號傳導(dǎo)并導(dǎo)致腫瘤發(fā)生、進展、轉(zhuǎn)移，從而認為腫瘤細胞表面的TLRS被配體激活，刺激腫瘤細胞分泌過量細胞因子，這些炎癥介質(zhì)可刺激腫瘤細胞生長、血管和淋巴管生成，而且可通過調(diào)節(jié)金屬蛋白酶和整合素增強腫瘤細胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。如體內(nèi)和體外的研究都顯示LPS能刺激腫瘤生長和轉(zhuǎn)移[8]；Huang等[9]實驗證明，巨塊腫瘤微環(huán)境中的單核細胞李斯特菌（listeria monocytogenes，LM）通過TLR2信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路促進腫瘤細胞生長。又如TLR2活化可以促進調(diào)節(jié)性T細胞（regulatory T cells，Tregs）發(fā)育，上調(diào)轉(zhuǎn)錄因子FoxP3表達，增加抑制性細胞因子IL-10產(chǎn)生，引起抑制性免疫反應(yīng)，導(dǎo)致腫瘤免疫耐受，從而抑制宿主產(chǎn)生抗腫瘤作用[10]。Tang等[11]認為TLR4激活ERK1/2、p38及NF-kB信號引發(fā)大量炎癥因子如IL-6、基質(zhì)酶及尿激酶纖溶酶促進腸癌的發(fā)展。

另一方面，也有研究表明腫瘤細胞TLR3的表達可以誘導(dǎo)腫瘤細胞的凋亡[12]。有報道證實，使用免疫佐劑加強對腫瘤細胞的識別，誘導(dǎo)機體產(chǎn)生有效抗體，激活殺傷細胞；TLRS信號通路激活后主要通過MyD88-IRAK-TRAF6-NF-kB途徑影響免疫相關(guān)基因的表達，產(chǎn)生IFN、化學(xué)因子、促炎性細胞因子以及增強抗原提呈的樹突狀細胞（dendritic cells，DCs），進而調(diào)節(jié)Th1和Th2增殖與分化，在獲得性免疫的過程中發(fā)揮抗腫瘤作用[13]。

3 中醫(yī)藥調(diào)控TLRS及其信號通路

中醫(yī)認為，疾?。ò[瘤）的過程是正邪互相斗爭的過程，治療疾病的目的就是要扶助正氣，戰(zhàn)勝病邪。從現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的觀點來看，扶正和祛邪的基本作用在于改善或恢復(fù)免疫功能，增強機體抗病性的生理反應(yīng)，抑制或者消除致病因子對機體的有害影響，加速毒物的排泄，促進患病組織的修復(fù)和功能的改善。已經(jīng)有大量實驗證明，中醫(yī)藥能夠輔助機體增強自身免疫力，抑制炎癥的發(fā)生。在研究探索的過程中發(fā)現(xiàn)，此過程在某些方面與參與調(diào)節(jié)的TLRS及其信號通路有關(guān)。

3.1 單味藥作用 近年研究證明，單味藥對TLRS及其信號通路有干預(yù)和調(diào)控作用。研究發(fā)現(xiàn)豬苓多糖能夠協(xié)同卡介苗啟動非特異性免疫反應(yīng)，其機制和激活途徑可能是通過TLR4與CD14一起將胞外信號轉(zhuǎn)導(dǎo)至胞內(nèi)，從而使NF-kB迅速從胞漿移位到胞核，調(diào)節(jié)相應(yīng)的靶基因表達所致[14]。李金等[15]體外分離、培養(yǎng)健康成人外周血單個核細胞，以云芝糖肽加以干預(yù)，應(yīng)用Toll樣蛋白受體信號轉(zhuǎn)導(dǎo)基因芯片檢測云芝糖肽對此信號傳導(dǎo)通路中相關(guān)基因的影響，經(jīng)篩選發(fā)現(xiàn)上調(diào)≥2倍的基因有22個，占18.8%（如γ-干擾素，干擾素-γ-誘導(dǎo)蛋白-10等）。實驗表明刺五加多糖通過TLR激活B細胞和巨噬細胞[16]。張代娟等[17]研究發(fā)現(xiàn)中藥禿毛冬青葉中有效成分青心酮在RAW264.7巨噬細胞炎癥反應(yīng)可上調(diào)TLR4 mRNA及蛋白表達，減少TNF-α分泌，從而能有效抑制炎癥反應(yīng)。黃芪甲苷和大黃素可抑制干擾素-γ（IFN-γ）誘導(dǎo)的TLR4 mRNA表達，大黃能顯著降低IFN-γ+脂多糖（LPS）所誘導(dǎo)的HT-29細胞的IL-8的產(chǎn)生，故推測大黃素抗炎細胞分子機制可能與此有關(guān)[18]。黃芪多糖（APS）是黃芪中最重要的決定其作用的有效成分，通過實驗發(fā)現(xiàn)，APS可作為TLR4、NF-kB活化抑制劑，調(diào)控細胞內(nèi)的TLR4、NF-kB表達，使細胞內(nèi)信號傳導(dǎo)通路活性降低，從而減輕炎癥反應(yīng)，免疫紊亂的作用，從而推測這可能是APS起活血化瘀作用的分子藥理作用機制之一[19]。

3.2 中藥復(fù)方作用 對于中藥復(fù)方的研究，由于其成分的復(fù)雜性使得研究結(jié)果不確定性大大增加，研究的數(shù)量明顯偏少。研究發(fā)現(xiàn)，益氣養(yǎng)陰、涼血活血等功效的復(fù)蘇飲可明顯上調(diào)外周血單核細胞TLR4、TLR2 mRNA表達，增強機體抗感染能力[20]。趙保勝等[21]研究證實，參蘇飲含藥血清對POLY I：C刺激的TLR3及其下游通路的MyD88和TRAM有抑制作用，對LPS刺激的TLR4的病理性升高無抑制作用，但對TLR4下游通路TRAM和TRIF mRNA的表達有明顯的抑制作用。以上綜合作用引起炎癥因子TNF-α和IFN-β的降低，提示參蘇飲清熱解毒的藥效學(xué)作用可能與抑制TLR3、MyD88、TRAM等細胞因子的表達有關(guān)。黃連解毒湯能阻斷TLR4高表達，阻斷TLR4胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的髓樣分化因子88（MyD88）依賴和非依賴兩條途徑，具有TLR4mRNA拮抗劑樣作用。桑菊飲含藥血清一定劑量（7.7g/（kg/U）可明顯上調(diào)TLR4、TLR7的mRNA表達，對其余TLRS的亞型表達沒有明顯影響[22]。姜華等[23]證實益氣活血復(fù)方可阻斷TLR4高表達，同時阻斷TLR4胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的MyS88依賴性途徑，抑制下游NF-kB以及各種相關(guān)基因表達，從而減少內(nèi)皮細胞的損失以及各種炎癥反應(yīng)的發(fā)生。涼膈散對內(nèi)毒素誘導(dǎo)大鼠急性肺損傷模型的TLR4的表達起減弱作用，提示涼膈散可能通過抑制該信號通路，調(diào)節(jié)細胞因子表達，進而調(diào)控某些蛋白及炎性介質(zhì)，從而減輕肺損傷[24]。

4 結(jié)語與展望

目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，一些腫瘤細胞表面的TLRS被配體激活，可促使腫瘤細胞釋放大量炎癥因子，進而促進腫瘤的生長；而腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移同人體的免疫功能也存在著密切聯(lián)系。中醫(yī)藥既可以通過干預(yù)TLR抑制炎癥，又可通過調(diào)控MyD88-IRAKTRAF6-NF-kB這條途徑來增強機體免疫力進而發(fā)揮抗腫瘤作用。中醫(yī)藥、TLRS二者間的密切關(guān)系以及對腫瘤所具有的雙向調(diào)節(jié)作用，可以進行探索：一方面要更透徹的研究TLRS及其信號通路、中醫(yī)藥和腫瘤三者之間的關(guān)系，另一方面，可以將中醫(yī)藥在調(diào)控TLRS及其信號通路的作用運用到抗腫瘤治療過程中，為中醫(yī)藥干預(yù)腫瘤和治療腫瘤提供依據(jù)，并在中醫(yī)理論的指導(dǎo)下，為治療惡性腫瘤開辟一個新的途徑。

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