謝 波 舒 彥 梁 臻 陳建和 程一寧 張心男

浙江省立同德醫(yī)院泌尿外科 杭州 310000

因膀胱黏膜損傷導(dǎo)致的頑固性膀胱刺激癥臨床上并非少見，其中化療藥物所導(dǎo)致的膀胱黏膜損傷，引起一些并發(fā)癥，明顯降低了患者依從性[1]。美洲大蠊屬昆蟲綱，蜚蠊目，蜚蠊科，俗稱蟑螂[2]。美洲大蠊提取物對(duì)于惡性血液病口腔潰瘍、胃十二指腸潰瘍、潰瘍性結(jié)腸炎、皮膚皸裂、糖尿病皮膚潰瘍、頑固性鼻出血、鼻中隔糜爛均有良好療效，并得到廣泛應(yīng)用，但與膀胱黏膜損傷的相關(guān)研究較少[3-5]。本研究旨在觀察美洲大蠊提取物對(duì)膀胱黏膜損傷后上皮愈合的影響，從而為臨床應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料 清潔級(jí)健康雄性Wistar大鼠30只，購(gòu)于浙江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，體質(zhì)量200～250g。美洲大蠊提取物（商品名：康復(fù)新）購(gòu)于四川好醫(yī)生攀西藥業(yè)有限責(zé)任公司。熱休克蛋白60、70兔抗鼠多克隆抗體，購(gòu)于武漢博士德生物工程有限公司。免疫組織化學(xué)超敏SP試劑盒購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。

1.2 動(dòng)物分組 應(yīng)用隨機(jī)數(shù)字表法將30只大鼠隨機(jī)分成對(duì)照組、模型組和治療組，每組10只。

1.3 動(dòng)物處理 用2%戊巴比妥鈉腹腔內(nèi)注射法麻醉大鼠（30mg/kg），把3F導(dǎo)管經(jīng)尿道插入大鼠膀胱，妥當(dāng)固定后連接好1mL注射器，抽空膀胱尿液；各組大鼠均用生理鹽水0.25mL沖洗膀胱3次，并抽空膀胱；對(duì)照組再注入生理鹽水0.25mL，模型組和治療組各注入0.1moL/L鹽酸0.25mL，保留2min后抽空；各組再用生理鹽水0.25mL沖洗膀胱3次后并抽空；對(duì)照組和模型組各注入0.25mL生理鹽水，治療組注入0.25mL康復(fù)新液，均保留30min后拔管。

1.4 標(biāo)本制作及結(jié)果判定 灌注72h后處死全部大鼠，取下新鮮膀胱標(biāo)本，10%福爾馬林固定，用于石蠟切片的制備。組織切片HE染色光鏡下觀察膀胱黏膜的形態(tài)變化和炎性細(xì)胞浸潤(rùn)情況，免疫組化法染色制片后顯微鏡下觀察。采用高壓鍋法修復(fù)抗原，SP法免疫組化染色，DAB顯色，蘇木精襯染，以胞質(zhì)、胞核出現(xiàn)棕黃色為陽(yáng)性，以細(xì)胞無(wú)棕黃色或與背景一致的淺棕色為陰性，在400倍光鏡下觀察，隨機(jī)挑選10個(gè)視野，計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞和總細(xì)胞數(shù)，并計(jì)算出陽(yáng)性細(xì)胞率。1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 使 用SPSS11.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)據(jù)用（±s）表示，多組比較采用方差分析，兩組間比較采用LSD法。

表1 各組大鼠膀胱組織熱休克蛋白60、70表達(dá)（±s）

表1 各組大鼠膀胱組織熱休克蛋白60、70表達(dá)（±s）

注：與對(duì)照組比較，△P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.01

組 別n/只熱休克蛋白60熱休克蛋白70對(duì)照組模型組治療組10 10 10 0.235±0.045 0.412±0.051△0.268±0.046*0.258±0.051 0.509±0.062△0.293±0.054*

2 結(jié)果

2.1 大體病理改變 對(duì)照組無(wú)明顯改變。模型組膀胱黏膜上皮有廣泛的壞死脫落，可見明顯潰瘍?cè)?，中間被覆白苔，周圍黏膜水腫隆起，上皮可見廣泛的出血點(diǎn)。治療組膀胱黏膜上皮缺損少見，有少量散在小點(diǎn)狀潰瘍，潰瘍表淺，周邊黏膜無(wú)明顯水腫。

2.2 顯微鏡下病理改變 對(duì)照組無(wú)明顯病理改變。模型組可見黏膜嚴(yán)重充血、出血、上皮細(xì)胞壞死，大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，黏膜下各層有炎性水腫。治療組為散在小點(diǎn)狀出血，少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，受損膀胱黏膜表面有一層薄膜覆蓋。

2.3 大鼠膀胱組織熱休克蛋白60、70表達(dá)情況 模型組大鼠膀胱組織熱休克蛋白60、70表達(dá)量較對(duì)照組顯著增高（P＜0.01），治療組大鼠膀胱組織熱休克蛋白60、70表達(dá)量較模型組顯著降低（P＜0.01），見表1。

3 討論

膀胱黏膜損傷是化學(xué)性膀胱炎、放射性膀胱炎、腺性膀胱炎、慢性細(xì)菌性難治性膀胱炎和間質(zhì)性膀胱炎等多種膀胱炎癥的病理基礎(chǔ)，可引起尿急、尿頻和膀胱充盈后恥骨上方或會(huì)陰部持續(xù)疼痛等癥狀，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量和身心健康[1]。膀胱黏膜表面葡萄糖氨基聚糖的缺陷是導(dǎo)致膀胱黏膜損傷的病理基礎(chǔ)。葡萄糖氨基聚糖缺陷導(dǎo)致膀胱黏膜通透性增高，減弱了膀胱壁對(duì)化學(xué)物質(zhì)的抵御力及修復(fù)能力，導(dǎo)致尿液中有毒有害物質(zhì)進(jìn)入到膀胱壁內(nèi)，引發(fā)膀胱壁損害[6-7]?，F(xiàn)針對(duì)膀胱黏膜葡萄糖氨基聚糖的治療僅起到保護(hù)黏膜覆蓋物，不能促進(jìn)膀胱上皮修復(fù)，故長(zhǎng)期療效不確定，易反復(fù)。目前認(rèn)為修復(fù)膀胱上皮，保護(hù)黏膜完整性才是療效能夠持久的根本原因，但仍缺乏療效明確的上皮修復(fù)藥。

近年來(lái)，醫(yī)學(xué)昆蟲的藥用價(jià)值逐漸被認(rèn)知。美洲大蠊作為藥用的最早記載見于《神農(nóng)本草經(jīng)》，以蜚蠊名列為中品，“味咸，寒，生川澤，治血瘀癥堅(jiān)、寒熱，破積聚，喉咽痹，內(nèi)寒無(wú)子”。歷代本草典籍如《新修本草》、《本草綱目》亦有記載[2]。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，美洲大蠊提取物含有多元醇類、表皮生長(zhǎng)因子、黏氨酸、黏糖氨酸及多種氨基酸等活性物質(zhì)，具有抗炎、消腫、促進(jìn)細(xì)胞增殖和新生肉芽組織增長(zhǎng)，加速病損組織修復(fù)，加快壞死組織脫落，提高機(jī)體免疫功能等作用。

熱休克蛋白又稱應(yīng)激蛋白，是細(xì)胞受各種應(yīng)激原刺激后誘導(dǎo)產(chǎn)生的一組蛋白，具有維持細(xì)胞蛋白穩(wěn)定、促進(jìn)細(xì)胞生存等功能，其中熱休克蛋白60、70分布廣泛，在應(yīng)激后產(chǎn)生最為顯著[8-9]。本研究借助熱休克蛋白60、70在炎癥中的表達(dá)情況來(lái)反映美洲大蠊提取物對(duì)受損膀胱黏膜炎癥減輕的作用。本研究證實(shí)，美洲大蠊提取物不僅可以從大體上減少膀胱黏膜缺損，減輕炎癥浸潤(rùn)，也可減少膀胱黏膜熱休克蛋白60、70表達(dá)。因此，美洲大蠊提取物可修復(fù)損傷的膀胱黏膜，加強(qiáng)膀胱壁的屏障作用，阻止炎癥反應(yīng)。

[1]Parsons CL.The role of the urinary epithelium in the pathogenesis of interstitial cystitis/prostatitis/urethritis[J].Urolo-gy，2007，69（4 Suppl）:9-16.

[2]焦春香，劉光明，周萍.天然藥物康復(fù)新的研究進(jìn)展[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2008，19（11）:2623-2624.

[3]高黎黎，王魯平，李光輝.康復(fù)新的臨床新用途[J].中國(guó)誤診學(xué)雜志，2006，6（7）:1390-1393.

[4]丁娟英，高金星，李德芳.康復(fù)新液加維生素E膠丸治療復(fù)發(fā)性口腔潰瘍療效觀察[J].浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志，2010，20（8）:497-498.

[5]段陽(yáng)日.康復(fù)新液聯(lián)合奧美拉唑治療消化性潰瘍96例[J].浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志，2011，21（9）:619-620.

[6]Soler R，Bruschini H，Truzzi JC，et al.Urinary glycosaminoglycans excretion and the effect of dimethyl sulfoxide in an experimental model of non-bacterial cystitis[J].Int Braz J Urol，2008，34（4）:503-511.

[7]Soler R，Bruschini H，Martins JR，et al.Urinary glycosaminoglycans as biomarker for urothelial injury:is it possible to discriminate damage from recovery[J].Urology，2008，72（4）:937-942.

[8]Multhoff G.Heat shock protein 70（Hsp70）:membrane location，export and immunological relevance[J].Methods，2007，43（3）:229-237.

[9]Grundtman C，Kreutmayer SB，Almanzar G，et al.Heat shock protein 60 and immune inflammatory responses in atherosclerosis[J].Arterioscler Thromb Vasc Biol，2011，31（5）:960-968.