周瑩艷 吳宏成 湯耀東 余碧蕓 王國安

寧波大學醫(yī)學院附屬李惠利醫(yī)院（寧波市醫(yī)療中心） 寧波 315000

腫瘤型M2丙酮酸激酶（Tumor M2-PK，TU M2-PK）是近年來新興的一種腫瘤標記物，在胃腸道惡性腫瘤、胰腺癌、宮頸癌等有較高的表達。文獻也有報道，TU M2-PK作為肺癌新的腫瘤標記物，并可以作為良惡性胸腔積液鑒別診斷的一個輔助指標。近年研究表明，監(jiān)測血漿TU M2-PK水平有助于肺癌的早期診斷、動態(tài)監(jiān)測、預后判斷及療效評估。本研究比較肺癌患者、良性肺疾病和健康人血漿中TU M2-PK表達水平的變化，以及肺癌不同病理類型和不同肺癌分期患者中的差異，同時聯(lián)合檢測癌胚抗原（carcino-embryonic antigen，CEA）、神經(jīng)元特異性烯醇化酶（neuron-specific enolase，NSE），以評價其對肺癌的診斷價值。

1 臨床資料

2010年3月—2010年12月經(jīng)我院臨床及病理組織學檢查確診住院肺癌患者62例，均未經(jīng)過放化療、腫瘤靶向藥物治療等相關的抗腫瘤治療。其中男39例，女23例，年齡42～87歲；病理類型：鱗癌17例，腺癌23例，小細胞肺癌7例，混合型肺癌15例。根據(jù)2009年最新由國際抗癌聯(lián)盟（UICC）修訂的第7版肺癌TNM分期標準進行分期，Ⅰ～Ⅱ期12例，Ⅲ～Ⅳ期50例。選擇同期本院住院良性肺疾?。òǚ窝?、肺結(jié)核、結(jié)核性胸腔積液、慢性阻塞性肺疾病、自發(fā)性氣胸等）患者60例，其中男38例，女22例，年齡28～79歲。選擇同期本院門診健康體檢者45名，其中男30名，女15名，年齡39～75歲。各組之間性別、年齡差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。對良性肺疾病組或體檢者組血漿TU M2-PK陽性者隨訪復查。

2 方 法

2.1 TU M2-PK檢測 采集清晨空腹靜脈血2mL，EDTA抗凝，1～2h內(nèi)離心，2000r/min離心10min，吸取血漿放置-20℃冰箱保存待測，腫瘤患者取樣前均未經(jīng)過任何抗腫瘤治療。采用美國R&D公司制備的TU M2-PK試劑盒，以ELISA雙抗體夾心法測定血漿中TU M2-PK的濃度，參照試劑盒說明，以≥15U/mL為陽性。

2.2 CEA檢測 在采集TU M2-PK血標本時，另取血2mL，分離血清后以化學發(fā)光法檢測血清中CEA值。CEA的正常參考值為0～5μg/L。

2.3 NSE檢測 在采集TU M2-PK血標本時，另取血2mL，分離血清后以化學發(fā)光法檢測血清中NSE值。血NSE判斷標準：＞17ng/mL為陽性。

2.4 統(tǒng)計學方法 應用SPSS13.0統(tǒng)計軟件，偏態(tài)分布數(shù)據(jù)用中位數(shù)（范圍）表示，組間數(shù)據(jù)比較用非參數(shù)Kruskal-Wallis檢驗，兩兩比較用q檢驗，計數(shù)資料比較用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

3 結(jié)果

3.1 各組血漿TU M2-PK、CEAT和NSE水平比較 肺癌組血漿TU M2-PK水平顯著高于良性肺疾病組及健康對照組（P＜0.05）；良性肺疾病組和健康對照組血漿TU M2-PK水平相當，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），見表1。肺癌組CEA、NSE水平顯著高于良性肺疾病組和健康對照組（P＜0.05）；良性肺疾病組CEA、NSE水平與健康對照組比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），見表1。

表1 三組TU M2-PK、CEA和NSE水平比較（±s）

表1 三組TU M2-PK、CEA和NSE水平比較（±s）

注:與肺癌組比較，△P＜0.05

組 別n/例TU M2-PK/(U/mL)CEA/(ug/L)NSE/(ng/mL)健康對照組良性肺疾病組肺癌組45 60 62 8.7（3.0～19.5）△9.8（1.3～20.1）△19.9（3.5～101.1）2.8（0.5～6.6）△2.6（0.74～7.99）△13.02（1.2～770.0）5.8（2.0-13.2）△7.9（6.0-15.0）△15.0（8.1～73.3）

3.2 肺癌組TU M2-PK和CEA水平與臨床病理分期的關系 Ⅲ～Ⅳ期肺癌患者血TU M2-PK陽性率和CEA陽性率顯著高于Ⅰ～Ⅱ期肺癌患者（P＜0.05）。但Ⅲ～Ⅳ期肺癌患者血NSE陽性率與Ⅰ～Ⅱ期比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），見表2。

表2 肺癌組TU M2-PK、CEA和NSE水平與臨床病理分期的關系 例（%）

3.3 TU M2-PK對肺癌診斷的陽性率以及與CEA、NSE聯(lián)合檢測的診斷價值 肺癌組TU M2-PK陽性40例，陽性率64.5%，其中鱗癌11例，腺癌14例，混合型肺癌12例，小細胞癌3例。肺良性疾病組TU M2-PK陽性4例，陽性率6.7%；健康對照組陽性2例，陽性率4.4%。肺癌組TU M2-PK陽性率明顯高于良性肺疾病組和健康對照組（P＜0.05）。依照標準血TU M2-PK的臨界值為15U/mL，≥15U/mL為陽性的判斷標準，依據(jù)公式：敏感性=真陽性例數(shù)/（真陽性例數(shù)+假陰性例數(shù)），特異性=真陰性例數(shù)/（真陰性例數(shù)+假陽性例數(shù)）。血TU M2-PK診斷肺癌的敏感性為64.5%（40/62），特異性為93.3%（56/60）；CEA診斷肺癌的敏感性為61.3%（38/62），特異性為93.3%（56/60）；NSE診斷肺癌的敏感性為38.7%（24/62），特異性為96.7%（58/60），聯(lián)合TU M2-PK和CEA檢測，以兩個指標中任一個指標陽性為陽性，敏感性達82.3%（51/62），特異性 88.3%（53/60）；聯(lián) 合 TU M2-PK和NSE檢測，以兩個指標中任一個指標陽性為陽性，敏感性74.2%（46/62），特異性91.7%（55/60）；而三者聯(lián)檢敏感性達 87.1%（54/62），特異性86.7%（52/60），有較高的診斷價值。

4 討論

丙酮酸激酶（pyruvate kinase，PK）是糖酵解途徑的關鍵酶，PK有兩種結(jié)構(gòu)基因，L基因和M基因；四種同工酶，分別為L型、R型、M1型、M2型，四種同工酶的分布具有組織特異性，主要表達于肺、正常腎臟的遠曲小管、胚胎和未分化或增生的組織。且四種同工酶通常以酶的活性四聚體形式存在。當腫瘤發(fā)生時往往先表現(xiàn)為PK的組織特異性同工酶（如肌肉及腦組織中的M1PK、肝及腎組織中的L2PK、紅細胞中的R2PK等）表達減少，隨之發(fā)生M2-PK同工酶的表達上調(diào)。隨著M2-PK表達上調(diào)，酶從傳統(tǒng)的四聚體型轉(zhuǎn)變成二聚體型，而這種二聚體型的M2-PK對磷酸烯醇式丙酮酸（phosphoenolpyruvate，PEP）的親和力較弱，在所有增生細胞中都普遍表達，在腫瘤細胞中呈過度表達。所以稱這種M2-PK為腫瘤M2-PK[1-2]。體液中能檢測到TU M2-PK，可能由腫瘤壞死和細胞轉(zhuǎn)化時腫瘤細胞釋放而來。有報道[3-6]，胃腸道惡性腫瘤、胰腺癌、宮頸癌等患者血TU M2-PK均明顯升高，TU M2-PK已經(jīng)被認同作為一種新的腫瘤標志物。

本研究結(jié)果表明，肺癌患者血TU M2-PK水平明顯高于良性肺疾病組及健康對照組（P＜0.05），同時按照TNM分期，Ⅲ～Ⅳ期肺癌患者血TU M2-PK水平顯著高于Ⅰ～Ⅱ期患者（P＜0.05）。這可能與腫瘤的進展，負荷增加，大量腫瘤細胞壞死或轉(zhuǎn)移過程中釋放出更多的TU M2-PK有關。Oremek等[7]也證實，隨著腫瘤期別的增高，血中TU M2-PK水平也隨之增高。TU M2-PK在非小細胞肺癌不同的病理類型方面差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），但其陽性率高于小細胞肺癌。本研究同時表明，單獨檢測TU M2-PK值的敏感性為64.5%，與傳統(tǒng)的腫瘤標志物CEA（61.3%）比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），但聯(lián)合兩者檢測，敏感性可達82.3%，故認為TU M2-PK對肺癌的診斷具有一定價值，聯(lián)合檢測可有較高的敏感性。在良性肺疾病中有6.7%的陽性率，經(jīng)過3個月隨訪目前未發(fā)現(xiàn)腫瘤證據(jù)，原因有待進一步研究。

研究表明，胸水TU M2-PK的檢測其敏感性更優(yōu)于血漿TU M2-PK檢測[8]，可作為良惡性胸腔積液的鑒別診斷之一，筆者將進一步進行后續(xù)的研究。同時還將繼續(xù)觀察TU M2-PK在肺癌患者手術、化療前后的水平，了解其在評估手術療效和化療療效的作用，并且進一步展開其在良惡性胸腔積液鑒別診斷方面的研究。

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