彭 敏，譚 潔

(1.湖南省湘西土家族苗族自治州藥品檢驗所，湖南 吉首 416000;2.南華大學(xué)藥學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院，湖南 衡陽 421000)

刺五加為五加科植物刺五加的干燥根及根莖或莖，具有益氣健脾、補腎安神的功效，常用于脾腎陽虛、體虛乏力、失眠多夢等癥的治療[1]。刺五加根中含有綠原酸、紫丁香苷、異嗪皮啶葡萄糖苷和去羥梔子苷[2]，其中紫丁香苷為主要成分之一。筆者采用高效液相色譜(HPLC)法，以紫丁香苷作為測定指標(biāo)建立了五加參顆粒的含量測定方法，以期為進一步完善其質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

1200型高效液相色譜儀(美國 Agilent公司);G1315B，G1315C XL型檢測器;XS205DU型電子天平(瑞士梅特勒－托利多公司);MJ－600型超聲波清洗儀(無錫市美潔超聲設(shè)備有限公司)。紫丁香苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為111574－200201，供含量測定用，含量為 95.6%);五加參顆粒(批號分別為 090401，090402，090601，090602，090603，規(guī)格為12.25 g/塊，哈藥集團中藥二廠);甲醇為色譜純，其余試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Agilent C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:乙腈－0.3%甲酸溶液(體積比12∶88);檢測波長:265 nm;流速:1.0 mL/min;柱溫:30℃;進樣量:10 μL。理論板數(shù)按紫丁香苷峰計算應(yīng)不低于4 000。

2.2 溶液制備

稱取五氧化二磷減壓干燥器中干燥12 h以上的紫丁香苷對照品約10 mg(實稱10.26 mg)，精密稱定，置50 mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻[2]，即得每1 mL含0.205 2 mg的對照品貯備液。精密吸取對照品貯備液1 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得每1 mL含0.020 5 mg的對照品溶液。取樣品1包內(nèi)容物，研細(xì)，取約5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲處理30 min，放冷至室溫，再稱定質(zhì)量，用甲醇補足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。按處方取缺刺五加的陰性樣品5 g，按供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

專屬性試驗:分別精密吸取2.2項下3種溶液各10 μL，按上述色譜條件進樣，記錄色譜圖，見圖1?？梢?，在對照品溶液色譜主峰處，供試品溶液具有相同保留時間的色譜峰，陰性對照品溶液則無此峰，說明樣品中其他成分對紫丁香苷的測定無干擾。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察:精密量取對照品貯備液(0.205 2 g/L)0.5，1.5，2.5，3.5，4.5，5.5 mL，分別置 25 mL 量瓶中，加甲醇定容，搖勻。分別吸取上述溶液10μL，注入液相色譜儀，測定峰面積積分值。以進樣量 (μg)為橫坐標(biāo)、峰面積積分值 Y為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性回歸方程 Y=0.000 000 476 X+0.001 086 384 5，r=0.999 9(n=6)。結(jié)果表明，紫丁香苷進樣量在0.041 04～0.451 4 μg范圍內(nèi)與峰面積積分值具有良好的線性關(guān)系。

精密度試驗:精密吸取對照品溶液10 μL，連續(xù)進樣5次。結(jié)果紫丁香苷峰面積的 RSD為0.4%(n=5)，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗:取同一供試品溶液，分別于 0，1，3，6，10 h時進樣，測定峰面積。結(jié)果紫丁香苷峰面積的 RSD為0.6%(n=5)，表明供試品溶液在配制后10 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

重現(xiàn)性試驗:按擬訂的含量測定方法，取同一批樣品6份，依法測定。結(jié)果紫丁香苷的平均含量為0.300 6 mg/g，RSD為1.1%(n=6)，表明方法重現(xiàn)性較好。

加樣回收試驗:取已知含量的樣品6份，分別加入紫丁香苷對照品，按供試品溶液制備方法制備溶液并測定含量，計算回收率。結(jié)果見表1。

表1 紫丁香苷加樣回收試驗結(jié)果(n=6)

2.4 樣品含量測定

按擬訂的含量測定方法測定5批樣品，以外標(biāo)法計算含量。結(jié)果批號為 090401，090402，090601，090602，090603 的樣品中紫丁香苷的含量分別為 0.300 2，0.305 7，0.308 5，0.304 7，0.297 9 mg/g(n=2)。

3 討論

在供試品溶液的制備過程中，對加熱回流法、超聲提取法，提取溶劑70%乙醇、乙醚、甲醇分別進行了比較，結(jié)果以甲醇超聲提取30 min的效果最理想。對流動相組成及比例進行了反復(fù)試驗，結(jié)果以乙腈－0.3%甲酸溶液(體積比12∶88)為流動相，分離效果較好。本方法操作簡便，結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，可用于五加參顆粒的質(zhì)量控制。

[1]WS3－B－2474－97，中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑(第十三冊)[S].

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:801.