邵 月 (河南省政法管理干部學院體育部，河南 鄭州 450002)

2型糖尿病(T2DM)與肥胖、缺乏運動以及遺傳高度相關，常伴有血脂異常，增加了大血管和毛細血管病變的危險。T2DM的早期癥狀是胰島素抵抗，糖耐量不良。正常濃度的胰島素不能正常發(fā)揮胰島素的相應效應，血中胰島素濃度過高會導致脂蛋白脂酶活性降低，肝酯酶的活性升高，富含甘油三酯(TG)的脂蛋白增多，總膽固醇(TC)濃度升高，繼而引發(fā)脂質代謝紊亂。脂聯(lián)素是脂肪細胞分泌的大約30 kD的蛋白，是一種脂肪細胞因子，研究表明，脂聯(lián)素的異常與肥胖、代謝綜合征、T2DM、心血管疾病和艾滋病中的脂肪代謝有關〔1，2〕。運動作為治療T2DM有效的非藥物手段被廣泛應用，但其作用機制尚不明晰。本研究以耐力運動作為干預措施，觀察血清脂聯(lián)素、TC、TG及胰島素抵抗指數(shù)的變化。

1 材料與方法

1.1 實驗動物及訓練模型

1.1.1 實驗動物 SPF級糖尿病(GK)大鼠，2月齡，雄性，共12只，體重(250±5)g，由上海中科院斯萊克實驗動物有限公司提供。用國家標準嚙齒動物高脂飼料喂養(yǎng)，自由飲食，動物自由飲用無菌反滲型(RO)純水。環(huán)境溫度20℃ ～23℃，相對濕度30% ～50%，光暗周期12 h∶12 h。

1.1.2 動物分組 隨機分為2組，即安靜組6只，耐力運動組6只。

1.1.3 訓練模型 動物在暗周期(18:00～20:00)進行訓練，采用喬山跑臺改裝后自制的動物跑臺。耐力運動組:適應性訓練1 w，隨后進行6 w正式訓練，每日訓練1次，每周6次，強度相當于60%VO2max。

1.2 取材 6 w訓練結束后24 h，兩組大鼠采用頸椎脫臼法處死后，在1 min內用注射器從心臟左心室抽取血液，迅速離心，分離血清用于各項指標測試。

1.3 主要試劑和儀器 采用南京建成生物工程研究所生產的脂聯(lián)素酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定試劑盒(美國ADL)、TG測試盒、TC測試盒、胰島素ELISA測定試劑盒(美國ADL)、高速離心機及TECAN-Infinite 200酶標儀。

1.4 檢測

1.4.1 脂聯(lián)素的檢測 采用酶聯(lián)免疫吸附測試(定量)法。取50 μl樣品加入包被了抗脂聯(lián)素抗體的微孔中，加入25 μl的酶標記溶液，(36±2)℃孵育反應60 min，洗板機清洗5次，每次靜置10～20 s，加入底物溶液呈色劑A、B各25 μl，輕微搖動微孔反應條，(36±2)℃避光孵育反應15 min，加終止液終止反應。在酶標儀上測定每個孔450 nm波長下吸光度(OD)值，計算樣品濃度。

1.4.2 TG及TC的檢測 均采用酶法。取2 μl樣品加入200 μl用酶劑和緩沖液配制的工作液中，混勻，37℃保溫5 min，以空白管調零，在酶標儀上500 nm波長10 mm光徑測定各管吸光度(OD)值，計算樣品濃度。

1.4.3 胰島素的檢測 采用ELISA法。取50 μl樣品加入包被了抗胰島素抗體的微孔中，加入25 μl的酶標記溶液，(36±2)℃孵育反應60 min，洗板機清洗5次，每次靜置10～20 s，加入底物溶液呈色劑A、B各25 μl，輕微搖動微孔反應條，(36±2)℃避光孵育反應15 min，加終止液終止反應。在酶標儀上測定每個孔450 nm波長下吸光度(OD)值，計算樣品濃度。

1.5 統(tǒng)計學分析 采用SPSS15.0軟件進行統(tǒng)計學處理，數(shù)據(jù)以±s表示，組間比較采用獨立樣本t檢驗。

2 結果

安靜組與耐力運動組比較，脂聯(lián)素含量、TG含量、TC含量無顯著性差異(均P＞0.05)。而安靜組與耐力運動組胰島素抵抗指數(shù)比較有極顯著性差異(P＜0.01)。見表1。

表1 大鼠血清脂聯(lián)素、TG、TC含量和胰島素抵抗指數(shù)比較( ± s，n=6)

表1 大鼠血清脂聯(lián)素、TG、TC含量和胰島素抵抗指數(shù)比較( ± s，n=6)

與耐力運動組比較:1)P＜0.01

胰島素抵抗指數(shù)耐力運動組 0.7931±0.5830 0.8223±0.1794 0.0741±0.0479組別 脂聯(lián)素含量(ng/ml) TG含量(mmol/L) 總膽固醇含量(mmol/L)3.5646±1.3905安靜組 1.2115±0.5576 1.8812±1.4673 0.0455±0.0270 0.7447±0.46101)

3 討論

有研究顯示，脂肪組織分泌的細胞因子脂聯(lián)素等在肥胖、T2DM以及艾滋病中的脂代謝障礙中具有重要的調節(jié)作用〔3〕。遺傳學研究顯示，脂聯(lián)素基因112位和164位密碼子突變及兩個多態(tài)性位點(45T→G，276G→T)與低脂聯(lián)素血癥和T2DM顯著相關〔4〕。進行基因剔除研究顯示雜合突變鼠(Adipo+/－)有輕度胰島素抵抗，純種突變鼠(Adipo－/－)呈中等胰島素抵抗和糖耐量降低。也有不同結論，Ronchi等對11名男性和21名女性進行了研究，結果發(fā)現(xiàn)，代謝障礙和心血管病患者與具有相同BMI的對照組相比脂聯(lián)素水平沒有減少，脂聯(lián)素的水平和心血管病危險因子的指標不相關〔5〕。研究者認為，這是因為生長激素和/或胰島素樣生長因子1的效應超過了脂聯(lián)素的分泌。也有研究得出不同的結果，Hulve〔6〕研究發(fā)現(xiàn)運動訓練不能改變脂聯(lián)素的水平，認為脂聯(lián)素不是運動改善胰島素敏感性的作用因子?？偟膩砜?，有兩種意見，一種認為耐力運動不能改變脂聯(lián)素的水平，一種認為耐力運動能夠增加脂聯(lián)素的水平。本實驗研究發(fā)現(xiàn)，實驗設計雖然在一定程度上增加了脂聯(lián)素含量，但并沒有達到顯著性水平，也許是由于本實驗的運動強度較低，適當增加運動強度可能會提高脂聯(lián)素，改善效果。

TG主要存在于乳糜微粒和極低密度脂蛋白中，在體內既可以從食物中吸收又可以在肝內合成。TG可以增加脂蛋白內膽固醇酯的變質交換，易形成小而致密的低密度脂蛋白，低密度脂蛋白易為內皮細胞攝取而產生動脈硬化，并通過纖維蛋白原激活物抑制體-1的升高使纖溶發(fā)生缺陷，引起冠心病〔7〕。本研究發(fā)現(xiàn)，耐力運動組GK大鼠與安靜對照組比較，沒有發(fā)現(xiàn)運動大鼠的TG顯著性變化，可見，TG對于本運動模型不敏感。

血清TC水平增高是導致冠心病的獨立危險因素。血清TC越高，發(fā)生動脈粥樣硬化的風險越大。在眾多的血脂異常檢測項目中，最早被重視并應用的是血清TC。一次性的急性運動對血漿TC的濃度影響不大，長期的體育鍛煉或運動往往引起血漿TC的降低，且不同運動方式、不同運動時間會影響血漿TC的濃度〔8〕。本研究發(fā)現(xiàn)，耐力運動組與對照組相比，血清TC水平雖然有降低趨勢，但仍沒有顯著性差異，說明本運動模式對血清TC水平影響不是很顯著。也許6 w的運動時間太短，或運動的強度太低，堅持長期更高強度的有氧運動對降低血清TC水平才具有更積極的意義。

一直以來，人們認為機體糖代謝紊亂是胰島素抵抗和T2DM發(fā)病機制的原發(fā)事件，近來，McGarry等〔9〕提出了脂質代謝紊亂和血漿FFA水平的長期升高是胰島素抵抗和T2DM發(fā)展中最早出現(xiàn)的事件和中心環(huán)節(jié)，在T2DM發(fā)生發(fā)展中起著主導作用，建議將T2DM改稱為“糖脂病(diabetes mellipitus)”。骨骼肌是機體利用血糖的重要組織，也是發(fā)生胰島素抵抗的外周組織之一，減輕骨骼肌胰島素抵抗已成為T2DM治療的一個新方向〔10〕。運動可有效減輕糖尿病患者胰島素抵抗，Stochmal等〔11〕對31名伴有胰島素抵抗的心肌梗死病人研究發(fā)現(xiàn)，規(guī)律的體育鍛煉降低了胰島素水平;趙惠蘭等〔12〕發(fā)現(xiàn)采取中等強度運動后非胰島素依賴型糖尿病(NIDDM)患者血糖、胰島素降低明顯。長期運動可增加胰島素受體敏感性，血漿胰島素水平降低，葡萄糖消除率增加，胰島素與其受體結合增加，改善胰島素抵抗〔13〕。本實驗研究發(fā)現(xiàn)6 w中等強度耐力訓練后GK大鼠耐力運動組胰島素抵抗指數(shù)顯著降低，說明耐力訓練極大地降低了GK大鼠的胰島素抵抗能力，同時也說明耐力運動對T2DM的防治具有重要的作用。

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