(新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院，烏魯木齊 830011)

據(jù)統(tǒng)計(jì)，肺癌手術(shù)切除后的復(fù)發(fā)率高達(dá)50%，但目前臨床預(yù)測(cè)復(fù)發(fā)缺乏指標(biāo)。腫瘤復(fù)發(fā)可能有宿主系統(tǒng)性應(yīng)答的環(huán)節(jié)，其發(fā)揮的關(guān)鍵作用是對(duì)腫瘤微轉(zhuǎn)移的行為維持監(jiān)測(cè)?，F(xiàn)有大量的證據(jù)表明，免疫應(yīng)答在維持疾病的免疫自穩(wěn)方面，尤其是在疾病早期發(fā)揮著重要的免疫監(jiān)視作用［1，2］。最近，許多研究者對(duì)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)的作用以及Th17細(xì)胞在以慢性炎癥為損傷機(jī)制的自身免疫疾病中的作用做了研究。當(dāng)前的研究主要集中在Treg細(xì)胞、Th17細(xì)胞與I期NSCLC患者總體生存率之間的關(guān)系上。2008～2009年，我們檢測(cè)了非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)組織中Th17細(xì)胞與CD4+CD25+Treg細(xì)胞相關(guān)產(chǎn)物 CD4、FoxP3、IL-17A的表達(dá)，分析其與NSCLC臨床病理參數(shù)的關(guān)系?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 收集新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)根治手術(shù)標(biāo)本102份，所有患者術(shù)前均未行放化療，均經(jīng)病理證實(shí)診斷。患者男76例，女26例;年齡39～77歲。同時(shí)取癌組織及癌旁組織(距癌組織3～5cm)，標(biāo)本均經(jīng)10%中性福爾馬林固定≥8h，石蠟包埋。濃縮型鼠抗人FoxP3單克隆抗體購(gòu)于香港Abcam公司，濃縮型鼠抗人IL-17A購(gòu)于武漢博士德公司，EliVision兩步法免疫組化試劑盒及濃縮型鼠抗人CD4單克隆抗體均購(gòu)于福州邁新公司。組織蠟塊均以4 μm厚度連續(xù)切片。

1.2 Th17細(xì)胞與CD4+CD25+Treg細(xì)胞相關(guān)產(chǎn)物檢測(cè) 采用EliVision兩步法。嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明操作。FoxP3、IL-17A均采用PH6.0檸檬酸鹽抗原修復(fù)液進(jìn)行抗原修復(fù);CD4取EDTA(PH9.0)抗原修復(fù)液于塑料修復(fù)盒中。FOXP3工作濃度1∶40，CD4工作濃度1∶40，IL-17A 工作濃度1∶100。切片、顯色、復(fù)染后用中性樹膠封片，由兩位病理醫(yī)師，采用雙盲法對(duì)免疫組化切片進(jìn)行觀察。結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn):CD4陽(yáng)性染色為細(xì)胞質(zhì)/膜內(nèi)有棕黃色顆粒，IL-17陽(yáng)性染色為細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有棕黃色顆粒，F(xiàn)oxP3陽(yáng)性染色為細(xì)胞核內(nèi)有棕黃色顆粒;細(xì)胞質(zhì)/膜/核內(nèi)無(wú)棕黃色顆?；虺示鶆蛞恢碌S色，與背景一致為(－)級(jí);細(xì)胞質(zhì)/膜/核內(nèi)可見(jiàn)少量淡黃色顆粒，明顯高于背景為(±)級(jí);細(xì)胞質(zhì)/膜/核內(nèi)可見(jiàn)較多深棕色顆粒為(+)級(jí);細(xì)胞質(zhì)/膜/核內(nèi)可見(jiàn)大量深棕色顆粒為(++)級(jí)。(+)和(++)為陽(yáng)性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件，分別采用χ2檢驗(yàn)及Fisher精確檢驗(yàn)，P≤0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果 見(jiàn)表1。

表1 癌組織與癌旁組織中相關(guān)指標(biāo)的表達(dá)情況

2.2 CD4、IL-17A及 FoxP3在 NSCLC中的表達(dá)見(jiàn)表2。

3 討論

理論上，Treg細(xì)胞可以通過(guò)衰減宿主的抗腫瘤T細(xì)胞下調(diào)免疫應(yīng)答，可能導(dǎo)致腫瘤生長(zhǎng)及繼發(fā)轉(zhuǎn)移。因此，原發(fā)腫瘤中Treg細(xì)胞的增加可能提示患者預(yù)后差。CD4+輔助T細(xì)胞(Th)在調(diào)控適應(yīng)性免疫應(yīng)答中發(fā)揮關(guān)鍵作用;新近發(fā)現(xiàn)的Th17細(xì)胞是一類具有很強(qiáng)促炎癥作用的新型輔助T細(xì)胞，在以慢性炎癥為損傷機(jī)制的自身免疫疾病中起重要作用;另有研究發(fā)現(xiàn)在某些實(shí)體腫瘤中Th17細(xì)胞數(shù)量增多，且與腫瘤的分期有關(guān)［3，4］;在 NSCLC 癌組織中，Th17細(xì)胞數(shù)量顯著升高，并分泌IL-17蛋白。目前關(guān)于Th17細(xì)胞與實(shí)體腫瘤關(guān)系的研究報(bào)道并不多，有研究發(fā)現(xiàn)在卵巢癌和腎癌組織中Th17細(xì)胞數(shù)量增多，甚至有報(bào)道在胃癌中Th17細(xì)胞的數(shù)量增多，且與腫瘤的分期有關(guān)［4，5］。本研究發(fā)現(xiàn)，NSCLC 癌組織中及周圍存在大量表達(dá)IL-17A蛋白的細(xì)胞，IL-17A的表達(dá)與腫瘤的病理分類、分級(jí)、分期，以及是否轉(zhuǎn)移等均無(wú)關(guān)，而與性別有關(guān)，可能與本研究女性病例較少有關(guān)。目前暫不清楚女性患者IL-17A的陽(yáng)性表達(dá)強(qiáng)度高于男性患者的原因，尚待進(jìn)一步研究。本研究結(jié)果顯示，NSCLC癌組織中及周圍存在大量CD4+T細(xì)胞，印證了初始CD4+T細(xì)胞在轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β(TGF-β)單獨(dú)誘導(dǎo)下分化為CD4+CD25+Treg，分泌 TGF-β，參與免疫調(diào)節(jié);在 TGF-β和IL-6的共同誘導(dǎo)下分化為Th17，分泌IL-6和IL-17，參與炎癥反應(yīng)和自身免疫性疾病的結(jié)論［6］，亦提示腫瘤性疾病中也同樣適用此理論。

表2 CD4、IL-17A及FoxP3與NSCLC臨床病理參數(shù)的關(guān)系

由于CD4+CD25+Treg細(xì)胞可特異性地表達(dá)FoxP3轉(zhuǎn)錄因子，F(xiàn)oxP3轉(zhuǎn)錄因子對(duì) CD4+CD25+Treg細(xì)胞的發(fā)育和行使功能起著重要作用，可作為其特異性標(biāo)志［7］。有研究表明，肺鱗癌和肺腺癌患者的外周血中的CD4+CD25+Treg細(xì)胞比例均明顯高于非腫瘤患者;故有學(xué)者認(rèn)為CD4+CD25+Treg有利于腫瘤免疫耐受的形成，可降低免疫系統(tǒng)對(duì)肺癌細(xì)胞的免疫應(yīng)答，促進(jìn)肺癌的發(fā)生和發(fā)展。本研究亦發(fā)現(xiàn)肺腺癌患者的FoxP3 mRNA表達(dá)高于肺鱗癌患者［8］;肺鱗狀細(xì)胞癌、肺腺癌以及腺鱗癌組織FoxP3的表達(dá)無(wú)顯著差異，因此暫不能認(rèn)為FoxP3在各個(gè)肺非小細(xì)胞癌的病理類型中的表達(dá)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。本研究發(fā)現(xiàn)，高分化NSCLC與低分化NSCLC之間Foxp3的表達(dá)強(qiáng)度有顯著性差異，可能與高分化NSCLC的標(biāo)本量少有關(guān)，也可能與低分化NSCLC的Foxp3表達(dá)強(qiáng)度降低有關(guān)，還需要進(jìn)一步證實(shí)。

本研究結(jié)果證實(shí)，CD4、FoxP3以及IL-17A等在肺癌組織中的表達(dá)均明顯高于癌旁組織，說(shuō)明癌組織中有更多的CD4+CD25+Treg細(xì)胞以及Th17細(xì)胞浸潤(rùn)，CD4+CD25+Treg細(xì)胞以及Th17細(xì)胞更容易被趨化到腫瘤組織并在腫瘤局部聚集，發(fā)揮其抑制效應(yīng)。

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