龐 超 周俊杰 劉 瑋 梅振玉 張 敏 張麗君

目前，隨著醫(yī)療衛(wèi)生事業(yè)的發(fā)展，醫(yī)療技術(shù)水平不斷提高。然而，隨著各種診斷治療手段與日俱增(如器官移植、抗腫瘤藥物、廣譜抗生素、免疫抑制劑的廣泛使用，各種介入性檢查治療、靜脈內(nèi)高營(yíng)養(yǎng)及其他導(dǎo)管留置等)，與此同時(shí)，也增加了菌血癥、敗血癥等病癥的發(fā)生。菌血癥和敗血癥發(fā)病時(shí)間迅速，病死率較高。近20年來，血液感染的發(fā)生率明顯增加，Maki等[1]研究顯示，已由70年代的6%上升至目前的13%(不包括相當(dāng)一部分由厭氧菌感染所導(dǎo)致的菌血癥和敗血癥)。由于菌血癥和敗血癥是臨床上嚴(yán)重危及患者生命的疾病，病死率高達(dá)17.9%～27.8%[2-3]，而血液細(xì)菌培養(yǎng)是確立菌血癥和敗血癥診斷的重要依據(jù)，對(duì)于嚴(yán)重感染性疾病的患者能否有效的治愈，很大程度上決定于及時(shí)準(zhǔn)確的細(xì)菌培養(yǎng)報(bào)告。而過去傳統(tǒng)的手工細(xì)菌培養(yǎng)方法，時(shí)間長(zhǎng)(8 d甚至更長(zhǎng))、效率低、準(zhǔn)確性差，遠(yuǎn)不能適應(yīng)現(xiàn)代臨床醫(yī)療診治的需要，因此先進(jìn)的全自動(dòng)培養(yǎng)系統(tǒng)在醫(yī)院的使用，對(duì)之前常采用的人工細(xì)菌培養(yǎng)陽性率低、培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)及嚴(yán)重耽誤臨床冶療的現(xiàn)象得到了很大的改觀。

LABSTAR 50全自動(dòng)血液細(xì)菌培養(yǎng)儀是安徽省“十五”科技攻關(guān)項(xiàng)目，此項(xiàng)目開創(chuàng)了該類產(chǎn)品填補(bǔ)國(guó)內(nèi)空白及可替代進(jìn)口產(chǎn)品的新局面。同時(shí)，應(yīng)用了最新的科技成果，使Labstar 50的綜合性能得到了全新的提高。標(biāo)本培養(yǎng)所需時(shí)間和提高陽性率等都有了新的突破，陽性標(biāo)本在24 h即可獲得報(bào)告，陽性標(biāo)本最快發(fā)現(xiàn)時(shí)間≤6 h，極大縮短了患者的診治時(shí)間，提高病床周轉(zhuǎn)率，提高醫(yī)院的經(jīng)濟(jì)效益。

1 LABSTAR 50全自動(dòng)血液細(xì)菌培養(yǎng)儀基本原理

LABSTAR 50全自動(dòng)血液細(xì)菌培養(yǎng)儀采用連續(xù)熒光法和顯色法在臨床上快速檢測(cè)血液中細(xì)菌與真菌的全自動(dòng)血液培養(yǎng)系統(tǒng)，采用連續(xù)熒光法和顯色法在臨床上快速檢測(cè)血液中細(xì)菌與真菌的全自動(dòng)血液培養(yǎng)系統(tǒng)，其基本原理是微生物在培養(yǎng)基中消耗其中的養(yǎng)分并釋放出代謝物質(zhì)NADH、NADPH等，激發(fā)培養(yǎng)基內(nèi)含有的熒光指示劑發(fā)光，通過儀器內(nèi)的熒光探測(cè)器檢測(cè)，并經(jīng)過電腦的分析和運(yùn)算得出培養(yǎng)結(jié)果，并作出相應(yīng)的分析報(bào)告。同時(shí)瓶底顯色技術(shù)的應(yīng)用更大程度上避免了標(biāo)本的假陽性和假陰性。

2 材料與方法

2.1 材料

2.1.1 標(biāo)本來源

臨床標(biāo)本菌株由安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科提供，并經(jīng)西門子 Microscan Walkaway-40全自動(dòng)細(xì)菌鑒定儀鑒定確認(rèn)：大腸埃希氏菌、肺炎克雷伯菌、金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、模仿葡萄球菌、糞腸球菌、銅綠假單胞菌、鮑曼不動(dòng)桿菌、腦膜炎奈瑟菌、A群化膿性鏈球菌、肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌、白色念珠菌；標(biāo)準(zhǔn)菌株：ATCC25922大腸埃希氏菌、ATCC25923金黃色葡萄球菌、ATCC27853銅綠假單胞菌，購(gòu)買自衛(wèi)生部臨檢中心。

2.1.2 儀器

LABSTAR 50全自動(dòng)血液細(xì)菌培養(yǎng)儀由山東鑫科生物科技股份有限公司生產(chǎn)，配套專用培養(yǎng)瓶(成人瓶、兒童瓶、厭氧瓶)；BACTEC 9120全自動(dòng)血液細(xì)菌培養(yǎng)儀[4，9-10](美國(guó)BD公司生產(chǎn))，配套專用培養(yǎng)瓶(成人瓶、兒童瓶、厭氧瓶)用標(biāo)準(zhǔn)菌株和已知臨床菌株按不同的濃度接種培養(yǎng)瓶比較最低檢測(cè)靈敏度、最短報(bào)警時(shí)間，并對(duì)其結(jié)果進(jìn)行比較，評(píng)價(jià)LABSTAR 50全自動(dòng)血培養(yǎng)儀性能及臨床適用性。

2.2 方法

2.2.1 菌液制備

(1)每種細(xì)菌均先以無菌生理鹽水，用比濁儀調(diào)制成1.0麥?zhǔn)蠁挝坏木鷳乙?，再制成不同稀釋?5 cfu、30 cfu)的測(cè)試樣品。同時(shí)以平皿瓊脂法進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。

(2)按照血培養(yǎng)操作規(guī)范[5]、血培養(yǎng)的原則和規(guī)程[6]，將不同稀釋度的測(cè)試樣品1 ml與5 ml新鮮無菌羊血混合后加入待測(cè)血培養(yǎng)瓶。同時(shí)用無菌生理鹽水1 ml與5 ml新鮮無菌羊血混合后加入血培養(yǎng)瓶，作為陰性對(duì)照同時(shí)培養(yǎng)5 d；陽性瓶需轉(zhuǎn)種血平板和巧克力平板確認(rèn)原始菌株[7]。

2.2.2 結(jié)果判讀

檢測(cè)最低靈敏度(最低檢測(cè)細(xì)菌數(shù))≤5 cfu；陽性報(bào)警時(shí)間符合率(在3 h內(nèi))≥90%。

3 結(jié)果

3.1 檢測(cè)最低靈敏度

接種量在10～30 cfu的菌株14種，分別以標(biāo)準(zhǔn)瓶、兒童瓶、成人瓶測(cè)試，LABSTAR 50與BACTEC 9120均能陽性報(bào)警，符合率為100%。

接種量在1～5 cfu的菌株14種，分別以標(biāo)準(zhǔn)瓶、兒童瓶、成人瓶測(cè)試，共接種42瓶，其中Labstar 50標(biāo)準(zhǔn)瓶報(bào)警12例、兒童瓶報(bào)警13例、成人瓶報(bào)警13例；BACTEC 9120標(biāo)準(zhǔn)瓶報(bào)警13例、兒童瓶報(bào)警13例、成人瓶報(bào)警12例，兩者不符合2例，符合率為95.24%?？偡下蕿?7.62%(見表1)。

表1 檢測(cè)時(shí)間的符合率

3.2 檢測(cè)時(shí)間

4 討論

各種血培養(yǎng)瓶對(duì)常見于血液的細(xì)菌均能夠培養(yǎng)出并報(bào)警；未發(fā)現(xiàn)假陽性、假陰性。多數(shù)細(xì)菌種類的最低檢測(cè)靈敏度可達(dá)1～5 cfu，與相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道的菌血癥病人血液中含菌量基本一致[8]。

部分菌株接種量≤5 cfu時(shí)不生長(zhǎng)，且與BACTEC 9120對(duì)照的結(jié)果并不完全一致，分析原因：由于稀釋至10-8后，菌液相對(duì)濃度非常低，在菌液取樣為1 ml時(shí)，可能由于菌液不均勻和取樣異常而沒取到細(xì)菌(或細(xì)菌死亡)。

LABSTAR50陽性報(bào)警時(shí)間與BACTEC 9120對(duì)照，沒有顯著差異。

LABSTAR50全自動(dòng)培養(yǎng)儀在安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科經(jīng)過與BACTEC 9120全自動(dòng)血培養(yǎng)儀的性能對(duì)照試驗(yàn)表明，LABSTAR50全自動(dòng)血培養(yǎng)儀在主要性能方面上達(dá)到了進(jìn)口同類產(chǎn)品的技術(shù)指標(biāo)，實(shí)現(xiàn)了全封閉在線自動(dòng)培養(yǎng)和檢測(cè)，降低了污染率，提高了檢測(cè)陽性率，縮短了培養(yǎng)時(shí)間，具有較好的靈敏度和陽性率；培養(yǎng)瓶種類齊全(標(biāo)準(zhǔn)瓶、兒童抗生素中和瓶、成人兒童抗生素中和瓶、厭氧瓶)能夠滿足我國(guó)臨床血液細(xì)菌培養(yǎng)對(duì)自動(dòng)化快速培養(yǎng)的要求。

[1]Maki DG , Weise CE, Sarafin HW. A semiquantitative culture method for identifying intravenous-catheter related infection[J]. N Eng J Med,1977,296(23):1305-1309.

[2]Martin GS , Mannino DM, Eaton S , et al.The epidemiology of sepsis in the United States from 1979 through 2000[J]. N Engl J Med,2003,348(16):1546-1554.

[3]王瑤,徐英春,謝秀麗,等.兩種血培養(yǎng)系統(tǒng)的需氧與厭氧瓶對(duì)模擬菌血癥標(biāo)本檢測(cè)能力的對(duì)比研究[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2007,30(5):582-587.

[4]許淑珍,張淑蘭,陳力.Bactec9120血培養(yǎng)系統(tǒng)檢測(cè)細(xì)菌影響因素的探討[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,1997,20(5):272-274.

[5]徐英春,倪語星.血培養(yǎng)操作規(guī)范[M].上海:上?？萍汲霭嫔?2002.

[6]CLSI臨床檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)編譯小組.CLSI M47-A,血培養(yǎng)的原則和規(guī)程[M].北京:中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2010:10.

[7]童明慶,沈然,王輝,等.YY/T 0656-2008自動(dòng)化血液培養(yǎng)系統(tǒng)[M].北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社,2009:6.

[8]Haimi-Cohen Y, Vellozzi EM, Rubin LG. Initial concentration of Staphylococcus epidermidis in simulated pediatric blood cultures correlates with time to positive results with the automated,continuously monitored BACTEC blood culture system[J]. J Clin Microbiol,2002,40(3):898-901.

[9]席云,肖剛,吳堅(jiān),等.BACTEC 9120全自動(dòng)血培養(yǎng)系統(tǒng)應(yīng)用評(píng)價(jià)[J].國(guó)際醫(yī)藥衛(wèi)生導(dǎo)報(bào),2004,10(22):90-91.

[10]伍海英.BD BACTEC9120全自動(dòng)血培養(yǎng)儀陽性結(jié)果分析[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2010,7(2):128-129.