王 璐

(河南省洛陽市食品藥品檢驗(yàn)所，河南 洛陽 471003)

復(fù)方替硝唑氯己定含漱液的處方組成為替硝唑(0.5 g/L)和醋酸氯己定(0.2 g/L)、硼酸、糖精鈉等，以水作為溶劑，為抗菌消炎藥。醋酸氯己定為陽離子表面活性劑，抗菌譜廣，對(duì)多數(shù)革蘭陽性及陰性細(xì)菌都有殺滅作用。本試驗(yàn)中建立了高效液相色譜法，測(cè)定復(fù)方替硝唑氯己定含漱液中醋酸氯己定含量，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

美國Agilent 1260型高效液相色譜儀。醋酸氯己定對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)為100183－199902);復(fù)方替硝唑氯己定含漱液(批號(hào)分別為110102，110301，110506，由河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院制劑室提供);甲醇為色譜純，其余試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱:Agilent Zorbax Eclipse XDB－C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:三乙胺緩沖液(0.05 mol/L，用磷酸調(diào) pH 至3.5)－乙腈 － 甲醇(42 ∶13 ∶45);流速:1.0 mL/min;檢測(cè)波長:259 nm;進(jìn)樣量:10 μL。在此色譜條件下，醋酸氯己定與其對(duì)照品峰保留時(shí)間一致，無其他干擾，見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.2 溶液制備

精密稱取醋酸氯己定對(duì)照品25.9 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品貯備液。取對(duì)照品貯備液8.0 mL，置100 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液。精密量取樣品溶液10 mL(約相當(dāng)于醋酸氯己定2 mg)，置50 mL的量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。取不含醋酸氯己定的樣品溶液，照供試品溶液的制備方法制成陰性對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察:精密吸取對(duì)照品貯備液 0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0，3.5，4.0 mL，分別置 25 mL 量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，量取10 μL，在2.1色譜條件下測(cè)定，以峰面積 A與質(zhì)量濃度 C繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程 A=29.44 X+4.828，r=0.9999(n=8)。結(jié)果表明，醋酸氯己定質(zhì)量濃度線性范圍為10.36 ～ 82.88 μg/mL。

精密度試驗(yàn):取2.2項(xiàng)下同一對(duì)照品溶液10 μL，注入液相色譜儀，重復(fù)進(jìn)樣5次。結(jié)果平均峰面積為1215，RSD=0.38%(n=5)，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一供試品溶液，置無色容量瓶中，在自然光下，分別于 0，2，6，10，12，24 h 時(shí)測(cè)定，記錄主峰面積。結(jié)果平均峰面積為1218，RSD=0.55%(n=5)，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

重復(fù)性試驗(yàn):取同一批樣品5份，按2.4項(xiàng)下樣品測(cè)定方法操作。結(jié)果醋酸氯己定平均含量為0.2022 g/L，RSD=0.72%(n=5)，表明分析方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn):精密量取已知含量(醋酸氯己定質(zhì)量濃度為0.2046 g/L)的樣品2.0 mL，分別精密加入對(duì)照品貯備液(醋酸氯己定質(zhì)量濃度為 0.518 g/L)0.6，0.8，1.0 mL，置 25 mL 的量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，按2.4項(xiàng)下樣品測(cè)定方法測(cè)定。結(jié)果見表1。

表1 醋酸氯己定加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.4 樣品含量測(cè)定

按2.2項(xiàng)下制備對(duì)照品溶液和供試品溶液，在2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算其含量。結(jié)果批號(hào)為110102，110301，110506的樣品中醋酸氯己定含量分別為0.2046，0.2022，0.1987 g/L。

3 討論

取醋酸氯己定對(duì)照品(10 μg/L)溶液，在220～360 nm波長內(nèi)掃描，結(jié)果在259 nm波長處有最大吸收峰，且吸收光譜曲線較平滑，參考文獻(xiàn)[2]，選擇259 nm作為測(cè)定波長。

筆者曾選用三乙胺緩沖液(0.05 mol/L用磷酸調(diào)pH至2.5)－乙腈－甲醇流動(dòng)相的比例為(45∶10∶45)，但醋酸氯己定峰拖尾，且pH過低恐對(duì)硅膠相連的化學(xué)鍵合相有影響，最終確定流動(dòng)相三乙胺緩沖液(0.05 mol/L用磷酸調(diào)pH至3.5)－乙腈－甲醇比例為(42 ∶13 ∶45)，效果理想。

醋酸氯己定定量分析的研究有容量法[1]、紫外分光光度法[2－3]、高效液相色譜法[4－5]，本樣品為復(fù)方制劑，由于其他成分的干擾故不能用紫外分光光度法、容量法，而高效液相色譜法具有分離性能好，靈敏度高等特點(diǎn)。因此，用高效液相色譜法測(cè)定醋酸氯己定的含量，樣品不經(jīng)過處理直接測(cè)定，操作簡便，精密度高，可用于復(fù)方替硝唑氯己定含漱液中醋酸氯己定的含量測(cè)定。

[1]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典(二部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:1131.

[2]費(fèi)克軍，朱曉萍.復(fù)方替硝唑含漱液的含量測(cè)定[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2003，20(10):39.

[3]邊 疆，楊立延，陳奕樺.雙波長線性回歸測(cè)定醋酸氯己定和甲硝唑的含量[J].中華預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2000，34(1):75.

[4]田兆紅，龐小蓮.HPLC法測(cè)定醋酸氯己定栓的含量[J].華夏醫(yī)學(xué)，21(2):219.

[5]董 煜，董 莉.HPLC法測(cè)定甲硝唑氯己定洗劑和復(fù)方氯己定含漱液中甲硝唑和葡萄糖氯己定含量[J].中國藥學(xué)雜志，2003，38(7):532.