梁 帥 ，王路宏 ，李 巖

(1.吉林省四平市食品藥品檢驗(yàn)所，吉林 四平 136000; 2.吉林省腦科醫(yī)院，吉林 四平 136000)

復(fù)光顆粒為吉林省四平市第二榮復(fù)軍人醫(yī)院的中藥制劑，由白芍、當(dāng)歸、茯苓、白術(shù)、柴胡、熟地、山藥、生地等15味中藥材組方，具有滋腎、養(yǎng)肝、散風(fēng)明目的功效，主治視物昏渺、蒙昧不清、視功能減退、青盲、內(nèi)障、視網(wǎng)膜炎、玻璃體混濁、視神經(jīng)萎縮等眼病，是該院臨床應(yīng)用多年的協(xié)定處方。為更好地控制其內(nèi)在質(zhì)量，確保臨床療效穩(wěn)定可靠，本試驗(yàn)中采用高效液相色譜法測(cè)定了本品白芍中主要有效成分之一芍藥苷的含量，為控制其質(zhì)量提供科學(xué)依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

島津2010AHT全自動(dòng)高效液相色譜儀，紫外檢測(cè)器，Class－vp工作站。芍藥苷對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢驗(yàn)所)，批號(hào)為110736－200629，供含量測(cè)定用;批號(hào)為110736－200934，含量為95.7%;批號(hào)為110736 －200629，含量為 98.1%;批號(hào)為 110736 －201035，含量為96.5%);復(fù)光顆粒(吉林省四平市第二榮復(fù)軍人醫(yī)院提供);甲醇為色譜純，水為純化水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱:Zorbax－SB C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm)，Apollo C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm)，Shim －Pack VP －ODS C18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:甲醇 －0.05 mol/L 磷酸二氫鉀溶液(35∶65);檢測(cè)波長(zhǎng):230 nm;進(jìn)樣量:10 μL。理論板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2000，芍藥苷峰與相鄰峰之間的分離度大于1.5，分離度良好。高效液相色譜圖見圖1。

2.2 溶液制備

取芍藥苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含40 μg的溶液，即得對(duì)照品溶液。取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，研細(xì)，取約 2.0 g，精密稱定，置 50 mL量瓶中，加0.1 mol/L鹽酸溶液2 mL潤(rùn)濕，加水35 mL，搖勻，超聲處理20 min，放冷，加水至刻度，搖勻，離心，取上清液，即得供試品溶液。取不含白芍的陰性樣品，同法制得陰性對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察:精密稱取芍藥苷對(duì)照品10.42 mg(批號(hào)為110736－200629)，置 50 mL量瓶中，加甲醇溶解至刻度，制成每 1 mL 含 208.40 μg的溶液，作為對(duì)照品溶液Ⅰ;精密吸取 5 mL，置25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，制成每 1 mL 含 41.68 μg 的溶液，作為對(duì)照品溶液Ⅱ;分別取對(duì)照品溶液Ⅱ(2，5，10 μL)和對(duì)照品溶液Ⅰ(4，8，10，20 μL)注入液相色譜儀，記錄峰面積值，以對(duì)照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。計(jì)算得回歸方程 Y=1477.1 X－7577.6，r2=1(n=7)。結(jié)果表明，芍藥苷進(jìn)樣量在 0.075 ～40 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系，符合外標(biāo)法定量測(cè)定的要求。

精密度試驗(yàn):取批號(hào)為20110119的樣品，按含量測(cè)定正文方法制備供試品溶液，吸取10 μL，注入液相色譜儀，重復(fù)6次，測(cè)定其色譜峰面積值。結(jié)果的 RSD=0.08%(n=6)，表明方法具良好的精密度。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一供試品溶液，按擬定的色譜條件于0，2，5，12，24 h 時(shí)進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果峰面積的 RSD=0.81%(n=5)，表明24 h內(nèi)供試品溶液中芍藥苷的含量基本穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn):取樣品(批號(hào)為050105)6份，每份約0.4 g，精密稱定，照2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，獨(dú)立試驗(yàn)。結(jié)果含量的RSD=0.6%(n=6)，表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn):精密稱取已知含量的樣品(批號(hào)為20110119，含量為1.1254 mg/g)6份，分別精密加入0.2028 g/L的對(duì)照品溶液5 mL，依法測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

圖1 高效液相色譜圖

表1 芍藥苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.4 樣品含量測(cè)定

依法測(cè)定5批樣品，結(jié)果見表2?？梢姡?批樣品含量測(cè)定結(jié)果差異較大。根據(jù)2010年版《中國(guó)藥典(一部)》白芍藥材的含量測(cè)定限度按干燥品計(jì)算不低于1.6%和該處方中白芍的量，得出本品每袋含芍藥苷全部轉(zhuǎn)移時(shí)最低不得少于15.36 mg/袋，提取過(guò)程轉(zhuǎn)移率按50%計(jì)算，制成顆粒時(shí)轉(zhuǎn)移率為80%計(jì)算，結(jié)果為6.14 mg/袋，比較切合實(shí)際。樣品中的3批白芍藥材平均含量為2.9%，5批樣品含量測(cè)定結(jié)果的最低值為8.38 mg/袋，考慮藥材由于產(chǎn)地及采收時(shí)間的不同導(dǎo)致質(zhì)量存在較大的差異，因此，暫訂本品每袋含芍藥苷(C23H28O11)總量不得少于4.0 mg。

表2 5批樣品中芍藥苷含量測(cè)定結(jié)果(n=5)

3 討論

采用高效液相色譜法，選用芍藥苷為指標(biāo)性成分，對(duì)復(fù)光顆粒中白芍的有效成分之一芍藥苷進(jìn)行含量測(cè)定，并分別對(duì)精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性和回收率進(jìn)行了考察。試驗(yàn)結(jié)果表明，所建立的方法穩(wěn)定、準(zhǔn)確、可行，能有效控制復(fù)光顆粒的內(nèi)在質(zhì)量，確保臨床療效。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:96.