馮 濤 徐秀芝 楊 勇 祝鴻雁 范玉偉 王連堃

黑龍江省醫(yī)院南崗分院神經(jīng)二科，黑龍江哈爾濱 150000

C反應(yīng)蛋白(CRP)被發(fā)現(xiàn)是一項(xiàng)較敏感的反應(yīng)機(jī)體炎癥狀態(tài)的指標(biāo)，近年來有學(xué)者證明CRP有對(duì)未來發(fā)生腦梗死的預(yù)言能力[1，2]，但在遺傳標(biāo)記方面目前還沒有信息支持這一結(jié)果。本研究應(yīng)PCR-RFLP方法檢測(cè)125例腦梗死患者和130例健康對(duì)照者CRP-717A/G基因多態(tài)性，探討中國東北地區(qū)腦梗死患者CRP-717A/G基因多態(tài)性與CRP及腦梗死其他危險(xiǎn)因素的相關(guān)性。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

我們選取發(fā)病3 d內(nèi)的腦梗死患者125例，診斷符合2008年歐洲卒中指南制定的缺血性腦血管病診斷標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)腦CT或MRI檢查證實(shí)，其中男76例，女49例，平均年齡（67.60±9.42）歲。對(duì)照組為健康體檢者130例，三個(gè)月內(nèi)沒有感染，男73例，女57例，平均年齡（67.5±8.26）歲。

1.2 方法

1.2.1 一般資料 年齡、性別、血壓，于清晨空腹靜脈血檢測(cè)血常規(guī)、血脂、血糖、凝血常規(guī)及C反應(yīng)蛋白，測(cè)頸動(dòng)脈內(nèi)膜中層厚度，腦梗死病灶大小，神經(jīng)功能評(píng)分。

1.2.2 DNA提取 采外周靜脈血2～3 mL，ACD抗凝，用血液基因組DNA純化試劑盒提取DNA。

1.2.3 PCR 擴(kuò)增 taq酶，dNTP，引物序列（均由上海捷瑞公司合成），上游引物：5′-GACTCCTGCCTGAAGCTTTACATA-3′，下游引物：5′-ATACATGTGCCATGCTGGTGTG-3′，擴(kuò)增片段大小為376bp。PCR 擴(kuò)增體系（共12.5μL）：模板DNA 50～100 ng，4×dNTP各2.5 mmol，PCR引物各5μmol，rTaq 0.5 U。PCR 擴(kuò)增條件：95℃預(yù)變性4 min，95℃變性30 s，58℃退火40 s，72℃延伸30 s，共30個(gè)循環(huán)，最后72℃延伸7 min。

1.2.4 酶切 按內(nèi)切酶Bsh1236 I說明書要求酶切PCR產(chǎn)物并采用電泳分型。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

兩組間基因型、等位基因頻率比較應(yīng)用χ2檢驗(yàn)方法，P＜0.05為差異有顯著意義。應(yīng)用SAS9.13統(tǒng)計(jì)軟件，對(duì)計(jì)量資料的各基因型間的比較則應(yīng)用單因素方差分析。

2 結(jié)果

①通過邏輯回歸分析，對(duì)腦梗死作用由大到小分別是：C反應(yīng)蛋白(OR=8.4820），膽固醇(OR=4.5349)，血糖（OR=3.5510），纖維蛋白原(OR=1.8955)，年齡(OR=1.3260），收縮壓(OR=1.1350）。②C反應(yīng)蛋白啟動(dòng)子區(qū)-717A/G位點(diǎn)與腦梗死關(guān)系。腦梗死組及對(duì)照組的CRP-717A> G 基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡，兩組間等位基因頻率及各基因型頻率分布無顯著差異（P=0.21），結(jié)果見表1。

表1 腦梗死組與對(duì)照組-717A/G基因型頻率、等位基因頻率比較

3 討論

由于我們研究的樣本量比較少，可能會(huì)存在統(tǒng)計(jì)學(xué)上的偏差，但肯定CRP是一項(xiàng)與腦血管病有直接關(guān)系的敏感指標(biāo)，我們將擴(kuò)大樣本量繼續(xù)深入研究探討腦梗死患者C反應(yīng)蛋白多態(tài)性與C反應(yīng)蛋白及相關(guān)危險(xiǎn)因素的關(guān)系。

[1]Biasucci LM，Liuzzo G，Grillo RL，et al. Maseri A (1999)Elevated levels of C-reactive protein at discharge in atientswith unstable angina predict recurrent instability[J].Circulation，1999:855-860.

[2]Ferreiros ER，Boissonnet CP，Pizarro R，et al. Bazzino OO (1999)Independent prognostic value of elevated C-reactive protein in unstable angina[J].Circulation1999，100:1958-1963.

[3]Gussekloo J，SchaapMC，F(xiàn)rolichM，et al.C-reactive protein is a strong butnonspecific risk factor of fatal stroke in elderly persons[J].ArteriosclerThromb Vasc Bio，2000，20：1047-1051.