王冬芬

洛陽市澗西區(qū)疾病預(yù)防控制中心，河南洛陽 471003

果凍為一種膠凍休閑食品，其主要原料是海藻膠，它非?？煽谇疑识鄻樱绕錇樾∨笥阉嗖A。然而果凍里面添加的合成著色劑，能夠?qū)θ梭w產(chǎn)生毒害[1]，所以國家衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)中嚴(yán)格的規(guī)定了合成著色劑的添加量[2]。在我國，共有十幾種可以使用的合成著色劑，其中莧菜紅、檸檬黃、日落黃、胭脂紅以及靛藍(lán)等最為常見。在我國高效液相色譜法、示波極譜法以及薄層色譜法是常用的色素檢測方法。然而國標(biāo)GB／T5009.35—2003中關(guān)于食品中合成著色劑的檢測，利用高效液相色譜法主要在同一波長對各種色素含量進(jìn)行測定，具有靈敏度和特異性低的缺點(diǎn)，缺少相應(yīng)的處理措施。

1 材料與方法

1.1 材料

LC2000液相色譜儀（上海天美科學(xué)儀器有限公司）。試劑為已腈；乙酸銨溶液（0.02 mol／L）；水：氨水：乙醇溶液(1：2：7)；檸檬酸溶液（20%）；pH6水（pH用20%檸檬酸調(diào)）；聚酰胺粉；日落黃、檸檬黃、胭脂紅、莧菜紅、赤蘚紅、靛藍(lán)六種色素標(biāo)準(zhǔn)溶液（0.1 mg／mL）。

1.3 方法

測定方法依據(jù)GB／T5009.35—2003。其前處理方法如下：稱取5.00 g加標(biāo)樣品，溶解，pH調(diào)至6.0，然后50.0 mL容量瓶定容。

超聲萃取：分別用超聲器超聲10、20、30 min，再進(jìn)行提取。

振蕩提取：分別用振蕩機(jī)振蕩10、20、30 min，再進(jìn)行提取。

加熱提?。褐?0℃恒溫水浴鍋分別為10、20、30 min，再進(jìn)行提取。

1.4 待測樣品的處理

稱取5.00 g樣品，溶解，調(diào)pH6.0，50.0 mL容量瓶定容。在恒溫水浴鍋（70℃）水浴20 min后混勻，加檸檬酸（20%）使pH為6.0，把聚酰胺粉（1 g）用水調(diào)為粥狀，然后倒到樣品溶液，進(jìn)行攪拌，通過垂融漏斗進(jìn)行抽濾，以70℃pH6水進(jìn)行洗滌（4次），然后用5 mL的水、氨水以及乙醇混合溶液進(jìn)行解吸（4次），將解吸液收集之后，并中和（乙酸），然后蒸發(fā)接近干燥，用水溶后定容到5 mL，經(jīng)濾膜（0.22 μm）過濾，濾液保存好后備用。

2 結(jié)果分析

2.1 6種色素的標(biāo)準(zhǔn)曲線

把6種常用色素的各種濃度標(biāo)準(zhǔn)混合溶液通過高效液相色譜儀，得出標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。自下而上依次是①赤蘚紅；②日落黃；③胭脂紅；④靛藍(lán)；⑤莧菜紅；⑥檸檬黃。獲得6種常用色素的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：赤蘚紅Y=11107X-2175.8，r=0.9993；日落黃Y=12209X+3013.7，r=0.9993；胭脂紅Y=18234X+7057.1 r=0.9993；靛藍(lán)Y=24646X+10806，r=-0.9994；莧菜紅Y=23911X+769402，r=0.9996；檸檬黃Y=26053x+7395.7 r=0.9995。

2.2 三種前處理對比分析

用加熱、振蕩、超聲三種放法進(jìn)行提取，發(fā)現(xiàn)震蕩和超聲法隨著時間的延長提取效果增加。而加熱法在20 min時提取效果最好，同時這種處理方法是最佳方法。同時以檸檬黃為例作圖比較提取效果，能夠非常直觀發(fā)現(xiàn)加熱法為最好的提取方法，也就是經(jīng)70℃水浴20 min提取為最佳提取方法（圖1）。

圖1 檸檬黃提取效果的比較圖

2.3 回收試驗結(jié)果

在同一前處理好的樣品里面加入色素標(biāo)準(zhǔn)溶液，測定合成著色劑。所測結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)差范圍是2.5%～8.3%，回收率為98.4%～100.0%。

3 結(jié)論

本文研究發(fā)現(xiàn)果凍色素最佳提取方法為70℃水浴20 min。這種方法的優(yōu)點(diǎn)是便于操作、及時，回收率高。由于果凍中通常含有大約0.5%瓊脂，因此通過超聲與振蕩的方法提取該半固體的色素，很難進(jìn)行完全提取，導(dǎo)致回收率不高。因為在70℃時瓊脂就可溶解，然后再稀釋10倍后，由于瓊脂濃度較低，就不能再成半固體狀物質(zhì)，這樣非常適合進(jìn)行檢測。國家標(biāo)準(zhǔn)方法檢測波長是254 nm，由于大部分物質(zhì)對該波長存在吸收，因此會有干擾產(chǎn)生。本文首先將前處理法確定，然后將各段時間的檢測波長確定，使不同色素的特異性與靈敏度顯著提高。

總之，通過將果凍進(jìn)行前處理，利用液相色譜法C18柱，流動相為乙腈和乙酸胺，精油梯度洗脫，能夠非常高效的檢測出果凍中的合成著色劑。

[1]季順仙，繆菁，陶晶晶，等. 休閑食品中添加劑使用情況調(diào)查[J]. 浙江預(yù)防醫(yī)學(xué)，2009（1）:41-42.

[2]李乃潔，周長民，劉然，等. 合成著色劑標(biāo)準(zhǔn)樣品雜質(zhì)純化的基本方法[J].品牌與標(biāo)準(zhǔn)化，2011（24）:35.