黃 飛 郭艷紅 王靜輝

阿片類藥物依賴已被證明是一種慢性復發(fā)性腦?。?，2］。目前認為，該病是遺傳和環(huán)境因素共同作用的異質(zhì)性綜合征［3，4］。分子生物學研究均發(fā)現(xiàn)，某些神經(jīng)遞質(zhì)或受體基因多態(tài)性與物質(zhì)依賴易感性相關，且相關“候選基因”涉及多個系統(tǒng)，如多巴胺系統(tǒng)，5－羥色胺系統(tǒng)和乙酰膽堿系統(tǒng)等［5］。多巴胺系統(tǒng)是公認最重要的部分。國外研究顯示，多巴胺D2受體基因TaqIA 多態(tài)性中，A1等位基因與酒精濫用相關［6］。多藥濫用嚴重程度分級相關研究亦顯示，重度多藥濫用組A1 等位基因分布率顯著高于輕度多藥濫用組［7］。

那么，該基因多態(tài)性是否影響接受美沙酮維持治療海洛因依賴者的心理狀態(tài)呢?本研究通過對昆明地區(qū)A 門診接受美沙酮維持治療并攜帶DRD2 TaqIA 不同基因型的海洛因依賴者間SCL－90 各因子分的比較，旨在探討DRD2 基因TaqIA 多態(tài)性可能對海洛因依賴者美沙酮維持治療效果的影響?，F(xiàn)報道于后。

1 對象和方法

1.1 研究對象

1.1.1 美沙酮維持治療者 來自昆明市美沙酮維持治療A 門診接受美沙酮維持治療滿一年的漢族海洛因依賴患者共81例，其中男性49例，女性32例。按是否攜帶DRD2 A1 等位基因，將患者分為A1+與A1－兩組，兩組間平均年齡，男女比例(χ2=2.992，P=0.224)及平均美沙酮維持劑量(t=0.568，P=0.571)均無統(tǒng)計學意義。

1.1.2 入組標準 治療前符合DSM－IV 和CCMD－3 物質(zhì)依賴診斷標準并且接受美沙酮維持治療滿一年;父母、祖父母及外祖父母均為云南籍漢族;自愿參加研究并知情同意;與入組的其他研究對象無血緣關系。

1.1.3 排除標準 有其他嚴重軀體疾病(心血管，肝腎，代謝等各個系統(tǒng))和精神疾病;酒精依賴或鎮(zhèn)靜催眠藥依賴;妊娠和哺乳期婦女。

1.2 研究方法 首先填寫家庭情況問卷:包括一級和二級親屬的年齡，職業(yè)，教育程度，物質(zhì)濫用史及精神疾病史等項目;藥物濫用調(diào)查表:包括濫用或依賴藥物名稱，首次嘗試海洛因年齡、成癮時間、每天使用量、次數(shù)和方式等。藥物包括阿片類藥物、安眠鎮(zhèn)定藥，興奮劑和致幻劑、溶劑等;對患者實施SCL－90 測試。然后進行基因型檢測:抽取5ml 靜脈血，EDTA 抗凝，使用苯酚—氯仿法提取血液樣本的基因組DNA，經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測。引物由大連寶生物工程有限公司合成提供。PCR 擴增引物正義:5'－CCGTCGACGGCTGGCCAAGTTGTCTA－3';反義:5'－CCGTCGACCCTTCCTGAGTGTCATCA－3'。PCR 總 反 應 體 積 為50μl，TaKaRa Taq(5U/μl)0.25μl，10 ×PCR Buffer(Mg2+Free)5μl，MgCI2(25mM)3μl，dNTP Mixture(各2.5mM)4μl，模板DNA 2.5ng，引物1(20μM)1μl，引物2(20μM)1μl，添加滅菌蒸餾水到50μl。PCR 反應條件:首先95℃預變性4min，接著進行35個循環(huán)(94℃變性45s，56℃退火30s，72℃延伸1min)，最后延伸72℃5min。瓊脂糖電泳檢測擴增的目的DNA 片段。取PCR 產(chǎn)物18μl 加入5μlTaqI 限制性內(nèi)切酶(10μ/μl)，4μl Buffer 和17.5μl 滅菌水，總反應體積為40μl，65℃水浴消化4小時。2%瓊脂糖凝膠電泳:PAC1000 型穩(wěn)壓電泳儀100V 電泳45分鐘，紫外線檢測儀檢測電泳圖像，根據(jù)圖譜進行基因多態(tài)性分型。

1.3 統(tǒng)計方法 采用SPSS11.5 統(tǒng)計軟件包進行數(shù)據(jù)管理和統(tǒng)計分析;Hardy－Weinberg 平衡定律進行吻合度檢驗;本研究用t 檢驗進行兩組間均數(shù)比較。所有統(tǒng)計學檢驗的檢驗水準為0.05。

2 結(jié) 果

2.1 DRD2 基因TaqIA 多態(tài)性位點的擴增與酶切

2.1.1 應用聚合酶鏈式反應－限制性片段長度多態(tài)性(PCR－RFLP)技術對DRD2 基因TaqIA 多態(tài)性位點進行擴增所得產(chǎn)物。

2.1.2 DRD2 TaqIA等位基因可被酶內(nèi)切為180bp和130bp兩個片段。如兩條等位基因均可被酶切，該基因型為A2/A2;如兩條等位基因均不能被酶切(310bp)，則基因型為A1/A1;如一條等位基因可被酶切，另一條等位基因不可被酶切，該基因型為A1/A2。

圖2 DRD2 基因TaqIA 多態(tài)性位點擴增酶切產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳圖譜

2.2 統(tǒng)計結(jié)果

2.2.1 Hardy－Weinberg 平衡檢驗 采用χ2檢驗對患者多巴胺D2受體基因TaqIA 位點的各基因型分布進行Hardy－Weinberg 遺傳平衡吻合度檢驗。結(jié)果顯示，多巴胺D2受體基因TaqIA 位點各基因型分布均符合Hardy－Weinberg 遺傳平衡法則(P＞0.05)。表明兩組被試者來自大的群體，個體間隨機分配，不存在明顯自然選擇、遷移等對遺傳平衡的影響。

2.2.2 A1+與A1－組間SCL－90 各因子分比較(見附表)。

附表 A1 +與A1 －組間SCL－90 各因子分比較

以是否含A1 等位基因把患者分為A1+組(A1/A1，A1/A2)與A1－組(A2/A2)。然后比較兩組間的SCL－90 各個因子分。結(jié)果顯示，A1+組與A1－組間SCL－90 各個因子分差異無顯著性(P＞0.05)。

3 討 論

國外有研究顯示，攜帶D2受體基因TaqIA 多態(tài)性中A1 等位基因的人群，其大腦尾狀核中D2受體的數(shù)量比不攜帶該等位基因者減少近30%［8］。另一項酒精濫用者成癮程度相關性Meta分析研究顯示，重度酒精濫用者中A1 等位基因分布率明顯高于輕度酒精濫用者［9～18］。故推測由于DRD2 受體基因TaqIA 多態(tài)性中A1 等位基因的存在可能導致了腦內(nèi)相關區(qū)域DRD2 受體數(shù)量與密度降低。當攜帶有該“缺陷”基因的人使用精神活性物質(zhì)時，可能更容易誘發(fā)體會到欣快感形成依賴并難以戒斷，同時這類人群更容易發(fā)生心理問題，在外界環(huán)境刺激下復飲或復吸。

本文顯示，在排除年齡、性別和美沙酮劑量等影響因素后未發(fā)現(xiàn)A1+組與A1－組間的SCL－90各個因子分差異。分析可能與研究人群及地域有關。由于種族和地域的差異均會造成基因多態(tài)性的差異［19］，因此，推測該差異可能與A1 等位基因的危害作用在昆明地區(qū)漢族海洛因依賴者中并不顯著有關。此外該差異又有可能與所選擇的臨床相有關。由于海洛因依賴具有復雜的異質(zhì)性，其內(nèi)部不同的心理或行為性狀可能涉及不同基因的介導，也許多個微小基因的累加效應最終影響了某一性狀。因此，選擇限制狹義的內(nèi)源表型可能比用SCL－90 中具有一般性特點的各因子表型更有意義［20］。據(jù)此推測，多巴胺D2受體基因TaqIA多態(tài)性可能與海洛因成癮者的某一具體的心理或行為性狀有關，而不一定與SCL－90 中帶有一般性特點的各因子相關。所以在將來的研究中，我們將選擇某因子中具體的心理或行為性狀作為表型進一步深入探討。

1 郝偉.精神病學［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，2002:78～81.

2 Kreek MJ，Bart G，Lilly C，et al.Pharmacogenetics and human molecular genetics of opiate and cocaine addictions and their treatments［J］.Pharmacol Rev，2005，57(1):1～26.

3 Merikangas KR，Stolar M，Stevens DE，et al.Familial transmission of substance use disorders［J］.Arch Gen Psychiatry，1998，55(11):973～979.

4 Tsuang MT，Lyons MJ，Eisen SA，et al.Genetic influences on DSM－III－R drug abuse and dependence:a study of 3，372 twin pairs［J］.Am J Med Genet.1996，67(5):473～477.

5 Hardie TL.The genetics of substance abuse［J］.AACN Clin Issues，2002，13(4):511～522.

6 Blum K，Noble EP，Sheridan PJ，et al.Allelic association of human dopamine D2receptor gene in alcoholism［J］.JAMA，1990，263:2055～2060.

7 Comings DE，Muhleman D，Ahn C，et al.The dopamine D2receptor gene:A genetic risk factor in substance abuse［J］.Drug Alcohol Depend，1994，34:175～180.

8 Noble EP，Blum K，Ritchie T，et al.Allelic association of the D2dopamine receptor gene with receptor－binding characteristics in alcoholism［J］.Arch Gen Psychiatry，1991，48:648～654.

9 Blum K，Noble EP，Sheridan PJ，et al.Association of the A1 allele of the human D2dopamine receptor gene with severe alcoholism［J］.Alcohol，1991，8:409～416.

10 Hietala J，Pohjalainen T，Heikkila－Kallio U，et al.Allelic association between D2but not D1dopamine receptor gene and alcoholism in Finland.Psychiat Genet，1997，7:19～25.

11 Lawford BR，Young RM，Rowell JA，et al.Association of the D2dopamine receptor A1 allele with alcoholism:medical severity of alcoholism and type of controls［J］.Biol Psychiatry，1997，41:386～393.

12 Noble EP，Syndulko K，F(xiàn)itch RJ，et al.TaqIA alleles in medically ill alcoholic and nonalcoholic patients［J］.Alcohol，1994，29:729～744.

13 Parsian A，Todd RD，Devor EJ，et al.Alcoholism and alleles of the human D2receptor locus:studies of association and linkage［J］.Arch Gen Psychiatry，1991，48:655～663.

14 Bolos AM，Dean M，Lucase－Derse S，et al.Population and pedigree studies reveal a lack of association between the dopamine D2receptor gene and alcoholism［J］.JAMA，1990，264:3156～3160.

15 Cook BL，Wang ZW，Crowe RR，et al.Alcoholism and the D2receptor gene［J］.Alcohol Clin Exp Res，1992，16:806～809.

16 Geijer T，Neiman J，Rydberg U，et al.Dopamine D2receptor gene polymorphisms in Scandinavian chronic alcoholics［J］.Eur Arch Psychiatry Clin Neursci，1994，244:26～32.

17 Gelernter J，0'Malley S，Risch N，et al.No association between an allele of the D2dopamine receptor gene(DRD2)and alcoholism［J］.JAMA，1991，266:1801～1807.

18 Turner E，Ewing J，Shilling P，et al.Lack of association between an PFLP near the D2dopamine receptor gene and severe alcoholism［J］.Biol Psychiatry，1992，31:285～290.

19 Wong AH，Buckle CE，Van Tol HHM.Polymorphisms in dopamine receptors:what do they tell us?［J］.European Journal of Pharmacology，2000，27(2－3):183～203.

20 Hutchison KE，McGeary J，Smolen A，et al.The DRD4 VNTR polymorphism moderates craving after alcohol consumption［J］.Health Psychol，2002，21(2):139～146.