張培環(huán)

環(huán)孢霉素A（cyclosporine A，CsA）是一種高效免疫抑制藥，臨床上廣泛應用于預防器官移植的排斥反應和自身免疫性疾病的治療。CsA檢測方法有多種，本文通過化學發(fā)光微粒 子 免 疫 分 析 （chemicalluminescencemicro-particle immune analysis，CMIA）與熒光偏振免疫分析（fluorescence polarization immunoassay，F(xiàn)PIA）檢測 CsA血藥濃度，比較其結果的偏倚及相關性。

1 材料與方法

1.1 標本 2011-06～2011-07在筆者所在醫(yī)院復查CsA濃度的腎移植患者全血樣本40份，其中男24份，女16份；年齡18~69歲。標本采集時間：口服CsA后10~12 h，采集靜脈血4 ml，分2管，EDTA-K2抗凝。標本存放時間室溫（20~25℃）不超過2 h，當日檢測。

1.2 方法 儀器選用ARCHITECTi1000分析儀與AXSYM分析儀，均為美國雅培公司產(chǎn)品。ARCHITECT分析儀檢測原理基于化學發(fā)光微粒子免疫分析，AXSYM分析儀檢測原理基于熒光偏振免疫分析。試劑分別為雅培公司配套的試劑盒，均在有效期內(nèi)應用。以FPIA檢測結果為X軸，CMIA檢測結果為Y軸，通過Deming法進行回歸分析[1]。

表 1 CMIA和FPIA檢測結果（n=40）

2 結 果

40份標本分別用CMIA和FPIA方法檢測，結果存在偏倚,二者的平均濃度偏倚為-42.6 ng/ml，CMIA檢測結果比FPIA檢測結果普遍偏低。見表1。檢測濃度范圍20~230 ng/ml的樣本時，Y=0.88X－27.13，相關系數(shù)≥0.9（表 2），說明二者存在相關性。散點分析圖見圖1。

表 2 CMIA與FPIA檢測環(huán)孢霉血藥濃度的比較

圖 1 散點分析圖

3 討 論

CsA是用于器官移植中預防排斥反應和治療自身免疫性疾病的有效免疫抑制藥[2]。由于血CsA濃度治療窗狹窄[3]、個體差異、器官移植后時間、其它藥物的結合應用等多種因素的存在，臨床要求器官移植術后定期測定CsA血濃度，為臨床調整免疫抑制藥物的治療方案提供參考。

CsA濃度檢測方法較多，有高效液相色譜法（HPLC）、高效液相質譜聯(lián)用法（HPLC/MS）、放射免疫法（RIA）、FPIA 等。不同的檢測方法之間存在很大的偏倚，此次實驗CMIA原理采用的是兩步法，第一步是包被CsA抗體的順磁微粒與待測標本反應，第二步是添加CsA吖啶酯標記結合物，如待測標本中含CsA較高，則CsA吖啶酯標記結合物與順磁微粒的結合量少；如待測標本中含CsA較低或不含CsA，則CsA吖啶酯標記結合物與順磁微粒的結合量多，測量其產(chǎn)生的化學發(fā)光反應。FPIA采用的是競爭法，即待測標本與分析物示蹤劑競爭與CsA抗體結合，如果待測標本含CsA較高，則很多分析物示蹤劑無法與CsA抗體結合，在收到偏振垂直光激發(fā)后，這些小的熒光分子快速旋轉，向各個角度發(fā)射熒光，結果導致偏振光下降；如如待測標本中含CsA較低或不含CsA，則分析物示蹤劑與CsA抗體結合，這些結合物分子量大，旋轉較慢，以致于光向單一角度發(fā)射，結果導致偏振光增強。此兩種方法均為免疫檢測法，由于其是非特異性的，可與代謝物發(fā)生交叉反應。目前已知的環(huán)孢霉素代謝物有30多種[4]。有資料顯示，部分代謝產(chǎn)物有免疫抑制活性，兩個主要活性代謝物AM1和AM9其免疫抑制活性占母體作用的10%~20%[5]。由雅培CsA測定試劑盒特異性一節(jié)可知，ARCHITECT環(huán)孢霉素項目與CsA代謝產(chǎn)物的交叉反應率要比AxSYM低，其抗體特異性比AxSYM要高，所以ARCHITECT系統(tǒng)測試結果普遍低于AxSYM系統(tǒng)測試結果，二者的平均濃度偏倚為-42.6 ng/ml。由此可以看出，方法學的不同及與代謝產(chǎn)物發(fā)生交叉反應的非特異性是產(chǎn)生偏倚的主要原因。

由表2可以看出，檢測濃度范圍20～230 ng/ml的樣本時，相關系數(shù)≥0.9，二者之間存在相關性，但由于樣本量大小和樣本群體的差異等變量會影響檢測相關性，因此，各個實驗室得到的結果可能會與這些數(shù)據(jù)存在差異。

根據(jù)本文檢測結果，得知目前常用的此兩種儀器的檢測結果存在偏倚，這可能也給臨床醫(yī)師的治療帶來一定的困惑。有些建議應用校正系數(shù)達到二者之間的結果互換使用，但筆者認為，由于臨床狀態(tài)的復雜性，最好建立不同方法的參考范圍，建議單個患者連續(xù)使用同一種檢測方法，或者是連續(xù)在同一個實驗室檢測，醫(yī)師應根據(jù)患者情況及臨床經(jīng)驗確立單個患者的血藥濃度范圍。

[1]Passing H,Bablok W.A new biometrical procedure for testing the equality of measurements from two different analytical methods[J].J Clin Chem Clin Biochem,1983,21(11):709-20.

[2]Cohen DJ,Loert Scher R,Rubin MF,et al.Cyclosporine A:a new immuno-suppressive agent for organ transplantation[J].Ann Inter Med,1984,101（24）:6671.

[3]Julia M.Potter pharmacoeconomics of therapeutic drug monitoring in transplantation[J].Therapeutic Drug Monitoring,2000,22（4）：361.

[4]Christians U,Sewing KF.Cyclosporin metabolism in transplant patients[J].Pharmac Ther,1993,57（3）:291-345.

[5]朱有華，石炳毅．腎臟移植手冊[M]．北京：人民衛(wèi)生出版社，2010.7-243.