王 花 吳 萍 文紹敦

(青海衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院，青海 西寧 810000)

延緩衰老和探討衰老的機(jī)制是當(dāng)前醫(yī)學(xué)研究的熱點(diǎn)，而尋找天然、有效、安全、高質(zhì)量，可長期服用，具有“食醫(yī)同源”、“醫(yī)膳同功”、延緩衰老功能的食品是如今醫(yī)藥領(lǐng)域研究方向之一。高原植物“蕪菁”，是生長在海拔3 800 m以上的一種藥食兩用特有經(jīng)濟(jì)植物，有利五臟，輕身益氣，常食通中，令人肥健，消食下氣。日常生活觀察有抗衰老作用。本文主要探討蕪菁的抗衰作用。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物 健康清潔級(jí)小鼠140只，體重(22±2)g，雌雄各半，由青海地方病病研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，生產(chǎn)許可證SCXK(青)20050001。在溫度為(22±2)℃、濕度適宜、12 h光照交替的環(huán)境中飼養(yǎng)。自由進(jìn)食標(biāo)準(zhǔn)飼料、攝水，水源為自來水。隨時(shí)添加飼料，墊料為干燥潔凈的細(xì)刨花，每天換水1次，2 d換墊料1次。

1.2 藥物與試劑 蕪菁由青海大學(xué)醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系生藥實(shí)驗(yàn)室提供;維生素E膠丸由青島雙鯨藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，國藥準(zhǔn)字H37023086;D-半乳糖由上海制藥廠生產(chǎn)，批號(hào):101016;0.9%生理鹽水由山東齊都藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，國藥準(zhǔn)字H37020764;丙二醛(MDA)，超氧化物歧化酶(SOD)檢測(cè)試劑盒，谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)試劑盒，考馬斯亮藍(lán)組織蛋白檢測(cè)試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。

1.3 實(shí)驗(yàn)樣品來源及處理 實(shí)驗(yàn)樣品為青海高原玉樹地區(qū)當(dāng)年產(chǎn)植物蕪菁干燥塊根，洗凈、晾干、搗碎，研末，依次用水、95%乙醇、石油醚進(jìn)行提取，重復(fù)回流提取2次，殘?jiān)盟?5 min，濾取水提取液與前2次提取液合并，減壓濃縮后分別將上述提取物配制成濃度為5 mg/ml的溶液，避光低溫保存。

1.4 方法

1.4.1 動(dòng)物分組 根據(jù)成組比較均數(shù)所需樣本的公式，估計(jì)樣本大約20只。將140只小鼠，雌雄各半，適應(yīng)性喂養(yǎng) 1 w后，將小鼠雌雄分別編號(hào)，應(yīng)用隨機(jī)數(shù)字表分配為7組:空白對(duì)照組(空白組)、維生素E陽性對(duì)照組(VE組)、衰老模型對(duì)照組(衰老組)、蕪菁水提組(水提組)、蕪菁乙醇提組(醇提組)、蕪菁石油醚提組(醚提組)、蕪菁水醇醚混合提組(混合組)，各組20只。

1.4.2 造模 按文獻(xiàn)〔1〕方法操作，采用 D-半乳糖皮下注射法制備小鼠亞急性衰老模型。除空白組外，其余各組小鼠每日頸背部皮下注射5%D-半乳糖生理鹽水溶液，注射容量為10 ml/kg。每天1次，連續(xù)6 w，制備亞急性衰老小鼠模型。空白組頸背部皮下注射同等容量的生理鹽水。動(dòng)物每周稱一次體重，根據(jù)體重變化調(diào)整藥量。

1.4.3 給藥 造模的同時(shí)，水提組、醇提組、醚提組、混合提組以每日400 mg/kg提取物灌胃，空白組、衰老組以同等容量生理鹽水灌胃，VE組以VE 0.5 ml/d灌胃，連續(xù)給藥42 d。每周稱體重一次，根據(jù)體重調(diào)整用藥量。

1.4.4 標(biāo)本采集與制備 末次給藥后，禁食不禁水24 h，將小鼠摘除眼球取血，取血量大約為 0.5 ml。血液肝素抗凝靜置30 min，在4℃下3 000 r/min離心10 min，常規(guī)分離血清，取上層血清備用。用于血清中SOD、MDA的測(cè)定。最后斷頭處死小鼠。于無菌條件下迅速取出肝、胸腺、脾，用冰生理鹽水沖洗后，用濾紙吸干水分，稱重，部分肝制備成10%的肝組織勻漿用于GSH-Px的測(cè)定。

1.5 血清中SOD、MDA、GSH-Px的測(cè)定 參照南京建成生物工程公司試劑盒說明書的方法步驟測(cè)定。

1.6 小鼠免疫器官重量指數(shù)之測(cè)定 各組小鼠處死前稱重，處死后分別取出胸腺、脾臟剝離干凈后于電子天平上稱重，計(jì)算各免疫器官重量的指數(shù)。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析，兩組間比較采用 LSD-t檢驗(yàn)，數(shù)據(jù)以x±s表示。

2 結(jié)果

2.1 動(dòng)物體重與外觀特征的變化 實(shí)驗(yàn)開始前，衰老組小鼠與正常小鼠體重?zé)o差別，動(dòng)物毛色白，有光澤，精神狀態(tài)良好。隨著實(shí)驗(yàn)的進(jìn)展，各組小鼠體重逐漸增加，實(shí)驗(yàn)18 d后造模小鼠均出現(xiàn)皮毛稀疏，毛色無光澤，形體消瘦，反應(yīng)遲緩，攝食量減少。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，空白組小鼠活潑好動(dòng)，毛色光澤，飲食如常，大便為正常褐色軟便。衰老組小鼠明顯出現(xiàn)皮毛稀疏，毛色無光澤，形體消瘦，反應(yīng)遲緩，攝食量減少。醚提組、醇提組和VE組小鼠外形基本無變化，活動(dòng)頻率如常，攝食尚可，大便為深褐色軟便。混合提組、水提組小鼠毛色較暗，反應(yīng)略顯遲緩，少數(shù)小鼠大便稀。上述結(jié)果表明醚提組、醇提組和VE組小鼠的一般狀況好于其他組小鼠。

2.2 免疫學(xué)指標(biāo)脾和胸腺重量指數(shù)的影響 見表1。蕪菁不同提取物組間比較，對(duì)脾指數(shù)的影響，除水提組與混合組外，各組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，醚提組、醇提組和混合組作用優(yōu)于VE;對(duì)胸腺指數(shù)的影響，醚提組和水提組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，蕪菁不同提取組作用優(yōu)于VE組。

表1 蕪菁對(duì)D-gal誘導(dǎo)的亞急性衰老小鼠脾胸腺指數(shù)的影響(x ± s，n=20)

2.3 自由基指標(biāo)的比較 對(duì)血清SOD、MDA和肝組織中GSH-Px含量的變化，見表2。蕪菁不同提取組組間比較，對(duì)血清SOD、MDA和肝組織中GSH-Px含量的影響，除水提組與混合組外，各組相互之間均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，醇提、醚提組療效優(yōu)于VE組。

表2 各組小鼠治療后血清SOD、MDA含量、肝組織GSH-Px活力變化比較(x ± s，n=20)

3 討論

高原植物“蕪菁”是一種藥食兩用特有經(jīng)濟(jì)植物。據(jù)《晶珠本草》記載:蕪菁味辛，性溫;治培根病、隆病，生赤巴?！侗静菥V目》記載:它出自西番土谷渾。根葉苦溫?zé)o毒，利五臟，輕身益氣，常食通中，令人肥健，消食下氣?，F(xiàn)代醫(yī)藥研究表明:蕪菁肉質(zhì)根中含有大量的VA、VB、VC及多種糖類、氨基酸、鈣、鐵、磷等礦物質(zhì)，具有抗缺氧、抗氧化、護(hù)肝和增強(qiáng)免疫功能的作用。楊紅等〔2〕對(duì)新疆蕪菁的初步營養(yǎng)分析表明，其含有豐富的維生素和微量元素，如 β-胡蘿卜素、Cu、Zn、Se、Fe、Mn。黃酮類物質(zhì)是蕪菁莖葉中主要成分，含2.537%以上。蕪菁又是十字花科植物，十字花科植物因富含營養(yǎng)素及多種具抗突變、抗癌活性的物質(zhì)而被營養(yǎng)學(xué)家們所推崇。人們已從十字花科類蔬菜白菜、甘藍(lán)等中提取出了具明顯抗突變、抗癌、抗氧化作用的活性物質(zhì)，如3-吲哚、萜類、單萜烯、三萜烯、親核素等〔3〕。馬龍等〔4〕研究表明新疆的蕪菁可能有抗衰老的作用。因此，本文結(jié)果表明衰老小鼠的抗氧化指標(biāo)的SOD和GSH-Px活性均有明顯降低，MDA含量明顯升高，脾和胸腺指數(shù)降低，說明衰老小鼠模型造模成功，蕪菁不同提取物和VE能提高衰老小鼠抗氧化能力，且蕪菁不同提取物具有直接或間接地降低機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)氧化程度，增強(qiáng)機(jī)體清除自由基的能力，保護(hù)細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能的作用，從而達(dá)到改善機(jī)體物質(zhì)代謝紊亂及延緩機(jī)體衰老的功效。說明蕪菁對(duì)于D-半乳糖誘發(fā)的亞急性衰老模型有明顯的延緩衰老作用，其具體機(jī)制有待我們進(jìn)一步深入研究。將為早期預(yù)防衰老，延緩衰老提供客觀的理論基礎(chǔ)和試驗(yàn)依據(jù)，為臨床開發(fā)研制新的延緩衰老中藏藥產(chǎn)品奠定初步基礎(chǔ)。

1 徐叔云，卞如鐮，陳 修.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)〔M〕.第3版.北京:人民衛(wèi)生出版社，2001:1465-7.

2 楊 紅.蕪菁莖葉中黃酮類物質(zhì)初探〔J〕.西昌高等?？茖W(xué)校學(xué)報(bào)，2003;15(2):118-9.

3 Wattenberg LW.Inhibition of carcinogenesis by minor dietary constituents〔J〕.Cancer Res，1992;52:2083.

4 馬 龍，屈衛(wèi)東，鄧淑文，等.新疆蕪菁抗衰老作用的實(shí)驗(yàn)研究〔J〕.新疆醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，1998;21(1):34-7.