彭 芳,張功亮,王 建,郭廣秀,黃金長,肖軍蘭,鐘 斌

(1、贛州市人民醫(yī)院病理科，江西 贛州 341000;2、贛南醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院藥劑科，江西 贛州 341000)

乳腺癌成為危害女性健康的主要惡性腫瘤之一,最近幾年有年輕化趨勢,其發(fā)病率在逐步上升[1、2]。乳腺癌的發(fā)生是一個(gè)復(fù)雜的多步驟、有多種生物學(xué)指標(biāo)參與的過程。BRCA-1 基因?yàn)槿祟惾橄侔┮赘谢?，BRCA-1 基因編碼的蛋白在細(xì)胞周期調(diào)控、DNA 損傷修復(fù)、基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)、細(xì)胞凋亡和泛素化等方面起著重要的生物學(xué)功能，是重要的腫瘤抑制基因[3，4]。TopoII 基因是一個(gè)與惡性腫瘤預(yù)后有密切關(guān)系的基因，其在多種腫瘤中均有改變[5，6]。TopoII 編碼的蛋白是控制DNA的拓?fù)錉顟B(tài)的一類酶蛋白，存在于細(xì)胞核內(nèi)，其作用的機(jī)制為催化DNA 鏈的斷裂和結(jié)合，它是一些化療藥物的特定靶點(diǎn)，這些藥物結(jié)合TopoII-DNA的復(fù)合物，抑制了DNA的重新連接，導(dǎo)致斷裂的雙鏈DNA的無法重新連接，從而誘導(dǎo)癌細(xì)胞的凋亡[5,6]。

本實(shí)驗(yàn)采用免疫組化法檢測BRCA-1和TopoII 在乳腺癌和乳腺正常組織中的表達(dá)，并對其與乳腺癌臨床病理指標(biāo)之間的關(guān)系進(jìn)行分析，來評估BRCA-1和TopoII 在乳腺癌發(fā)生、發(fā)展過程中所起的作用。

1 材料與方法

1.1 一般資料 選取我院2010年1月至2012年6月行手術(shù)切除的經(jīng)病理確診的未做過任何治療的乳腺癌標(biāo)本共92例，組織學(xué)類型為浸潤性導(dǎo)管癌。患者均為女性，年齡32～71歲，中位年齡46歲。所有標(biāo)本經(jīng)4%中性甲醛固定，石蠟包埋，常規(guī)制備3μm 厚切片。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法 BRCA-1和TopoII 抗體購自福建邁新公司，采用免疫組織化學(xué)Envision 法，常規(guī)脫蠟，水化，檸檬酸高溫抗原修復(fù)，3%H2O2溶液孵育，二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色，蘇木素復(fù)染細(xì)胞核，脫水，透明，封片觀察結(jié)果。

1.3 結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn) BRCA-1 陽性表達(dá)于細(xì)胞核或細(xì)胞漿，TopoII 陽性表達(dá)于細(xì)胞核。兩者判定標(biāo)準(zhǔn)均為：腫瘤細(xì)胞核陽性細(xì)胞數(shù)的比例<10%為陰性，陽性細(xì)胞數(shù)10%～25%為(+)，～75%為(++)，>75%為(+++)，結(jié)果判定采用顯微鏡下雙盲對照法觀察。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 13.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)和Spearman等級(jí)相關(guān)分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 BRCA-1 在乳腺癌中的表達(dá) BRCA-1 在92例乳腺癌患者組織中陽性表達(dá)21例，陽性表達(dá)率為23%(其中9%表達(dá)“+++”，9%表達(dá)“++”，5%表達(dá)“+”)，癌旁正常乳腺組織陽性表達(dá)率為65.1%。癌組織中BRCA-1表達(dá)較癌旁正常乳腺組織明顯降低(P＜0.05)(見圖1、2和表1)。

2.2 TopoII 在乳腺癌中的表達(dá) TopoII 在92例乳腺癌組織中陽性表達(dá)80例，陽性表達(dá)率為87%(其中36%表達(dá)“+++”，41%表達(dá)“++”，10%表達(dá)“+”)，癌旁正常乳腺組織表達(dá)陽性率為8.1%。癌組織中TopoII表達(dá)率較癌旁正常乳腺組織明顯升高(P＜0.05)(見圖1、3和表1)。

2.3 乳腺癌組織BRCA-1和TopoII的陽性表達(dá)相關(guān)性 癌組織中BRCA-1和TopoII表達(dá)無明顯相關(guān)升高(P＞0.05)。

2.4 乳腺癌組織BRCA-1和TopoII的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系 BRCA-1和TopoII 在乳腺癌中的表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系見表l。乳腺癌中BRCA-1的陽性表達(dá)與腫瘤的大小、組織學(xué)分級(jí)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率呈負(fù)相關(guān)。TopoII 陽性表達(dá)率與腫瘤的大小、組織學(xué)分級(jí)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率呈正相關(guān)。

3 討論

表1 乳腺癌組織與正常乳腺組織中BRCA-1和TopoII表達(dá)與臨床特征關(guān)系

圖1 乳腺浸潤性導(dǎo)管癌(HE 染色×400)

圖2 BRCA-1 陽性表達(dá)于細(xì)胞核或細(xì)胞漿(免疫組織化學(xué)Envision 法×200)

圖3 TopoII 陽性表達(dá)于細(xì)胞核(免疫組織化學(xué)Envision 法×400)

大部分乳腺癌呈散發(fā)性，約5%～10%的乳腺癌具有遺傳易感性，表現(xiàn)為家族聚集性[1]。有研究表明[3、4]30%～40%的家族性乳腺癌是BRCA-1 基因突變引起，BRCA-1 基因定位于人17q21,編碼1863個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)。BRCA-1 在調(diào)節(jié)細(xì)胞周期進(jìn)程、DNA 損傷修復(fù)、細(xì)胞生長與凋亡及轉(zhuǎn)錄活化與抑制等多種生物學(xué)途徑都起重要作用。DNA 損傷后，首先由DNA 損傷傳感器進(jìn)行探測并發(fā)出損傷信號(hào)。此后在BRCA-1的招募下，多個(gè)修復(fù)蛋白形成復(fù)合體，共同定位到損傷部位并進(jìn)行修復(fù)[3，4]。BRCA-1 基因突變或BRCA-1表達(dá)降低均可能導(dǎo)致細(xì)胞功能失控和惡性進(jìn)展[3，4]。本研究結(jié)果顯示,BRCA-1 在乳腺癌組織中陽性表達(dá)率為23%比癌旁正常乳腺組織中陽性率65.1%明顯降低,這與其它研究者的研究結(jié)果[1，4]相符，推測可能是組織中BRCA-1 基因表達(dá)降低抑制組織中受損基因的修復(fù)而導(dǎo)致其癌變，提示BRCA-1 基因表達(dá)降低可能與乳腺癌的發(fā)生有關(guān)系。并且本研究結(jié)果提示乳腺癌中BRCA-1的陽性表達(dá)與腫瘤的大小、組織學(xué)分級(jí)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率呈負(fù)相關(guān)。提示BRCA-1 蛋白表達(dá)的降低與乳腺癌的浸潤性生物學(xué)行為，如腫瘤大小、分級(jí)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等不良預(yù)后有關(guān)。推測隨著進(jìn)一步研究的深入,BRCA-1 蛋白的檢測將有可能作為評估乳腺癌生物學(xué)行為和預(yù)后的新因素。

TopoII 又稱促旋酶，TopoII 是一種能催化DNA雙鏈拓?fù)洚悩?gòu)體相互變換的基本核酶,有兩種同工酶TopoIIα和TopoIIβ，在DNA 復(fù)制、轉(zhuǎn)錄和染色體分離中起重要作用，是腫瘤化療的重要靶酶。細(xì)胞內(nèi)TopoII 水平直接影響TopoII 抑制劑的抗腫瘤活性，它的表達(dá)下調(diào)會(huì)降低化療藥物的敏感性[6、7]。TopoII 在細(xì)胞增殖期表達(dá)增高，其表現(xiàn)呈周期性變化。有研究證實(shí)，細(xì)胞S期、G2期TopoII表達(dá)明顯升高，有絲分裂后期(G1、G0期)降低[7]。由于腫瘤細(xì)胞增殖活躍，故可推測TopoII與腫瘤的發(fā)生有關(guān)。研究中還發(fā)現(xiàn)，TopoII的表達(dá)越高，腫瘤的惡性生物學(xué)行為越明顯，患者的預(yù)后越差[6]。本研究結(jié)果顯示，TopoII 在乳腺癌組織中的表達(dá)陽性表達(dá)率為87%高于正常組織8.1%，而且隨著細(xì)胞核異形性的明顯增加，其染色程度越強(qiáng)烈，說明TopoII的表達(dá)與惡性進(jìn)展和增殖活性的病理分級(jí)一致。因此，TopoII 能夠較為客觀地反映乳腺癌的增殖活性，可作為對病理學(xué)分級(jí)補(bǔ)充的較客觀的指標(biāo)相符。

臨床上在乳腺癌診斷中應(yīng)用的免疫標(biāo)志很多，乳腺癌組織中檢測BRCA-1和TopoII 有望作為評估乳腺癌生物學(xué)行為和預(yù)后的新因素。

[1]Cree IA,Kurbacher CM,Lamont A,et al.A prospective randomized controlled trial of tumour chemosensitivity assay directed chemotherapy versus physician's choice in patients with recurrent platinum-resistant ovarian cancer [J].Anticancer Drugs,2007,18(9):1093-1101.

[2]Harris LN,Broadwater G,Abu-Khalaf M,et al.Topoisomerase II amplification does not predict benefit from dose -intense cyclophosphamide,doxorubicin,and fluorouracil therapy in HER2-amplified early breast cancer:results of CALGB 8541/150013[J].J Clin Oncol,2009,27(21):3430-3436.

[3]胡 震，沈鎮(zhèn)宙.邵志敏.BRCA-1和BRCA-2 基因突變相關(guān)性乳腺癌的普查和預(yù)防[J].實(shí)用臨床醫(yī)藥雜志，2003，7(2)：121.

[4]李 輝.BRCA-1、BRCA2 突變與乳腺癌關(guān)系[J].中外健康文摘,2008,5(6)：28-29.

[5]Orlando L,Del Curto B,Gandini S,et al.Topoisomerase IIalpha gene status and prediction of pathological complete remission after anthracycline-based neoadjuvant chemotherapy in endocrine nonresponsive Her2/neu-positive breast cancer [J].Breast,2008,17(5):506-511.

[6]李占文,楊華鋒,胡云鏘,等.P-gp、GST-π、TopoⅡ在乳腺癌中的表達(dá)及其意義[J].浙江醫(yī)學(xué),2007,29(9):919-921.

[7]張 靜,寧殿賓,趙玉哲,等.乳腺癌原發(fā)灶及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中Pgp、GST-π、TopoⅡ的表達(dá)及臨床意義[J].腫瘤防治研究,2008,35(3):181-183.