陳 文，王湘君，徐云升，湯世松

(1.瓊州學(xué)院理工學(xué)院，海南三亞572200;2.瓊州學(xué)院生物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，海南三亞572200)

0 引言

海南省五指山苦丁茶屬冬青科的兩個(gè)種，即冬青科冬青屬大葉冬青和冬青科冬青屬苦丁茶［1］.苦丁茶是一種中藥，具有清熱解毒、消炎、調(diào)節(jié)腸胃等功效，是民間一種較為高級(jí)的茶品［2］，海南五指山不少地區(qū)建立了苦丁茶基地，集種植、加工、銷售于一體，并取得了較好的經(jīng)濟(jì)效益.

氨基酸是既含氨基又含羧基的有機(jī)化合物.天然得到的氨基酸大部分是α－氨基酸，其相互間失水形成肽鍵連接形成肽及蛋白質(zhì).但β－，γ－，δ－氨基酸等［3］，在生物體內(nèi)呈游離狀態(tài)，并不存在于蛋白質(zhì)中;植物中還大量存在游離的γ－谷氨酰衍生物［6］.

筆者對(duì)五指山一些苦丁茶基地的調(diào)查發(fā)現(xiàn)，不少苦丁茶中、老茶葉遭到丟棄，不能有效地利用，造成很大的浪費(fèi).為此實(shí)驗(yàn)通過測(cè)定不同部位苦丁茶葉的游離氨基酸總平均含量，為評(píng)價(jià)苦丁茶的質(zhì)量，進(jìn)一步綜合利用苦丁茶提供一定科學(xué)依據(jù).

1 實(shí)驗(yàn)研究

1.1 海南五指山苦丁茶中游離氨基酸含量的測(cè)定

1.1.1 材料、設(shè)備與試劑

1.1.1.1 苦丁茶樣品

苦丁茶樣品:采摘五指山茶廠人工種植新鮮苦丁茶

一級(jí)品苦丁茶:一芽?jī)扇~，肥壯嬌嫩

二級(jí)品苦丁茶:靠近一芽?jī)扇~一端的茶葉

三級(jí)品苦丁茶:老葉但未脫落的茶葉

四級(jí)品苦丁茶:脫落的老葉

將采摘的苦丁茶按四個(gè)等級(jí)分類，分別用自來水，雙蒸水洗凈，風(fēng)干.所有樣品均于80°C恒溫干燥8 h，粉碎備用.

1.1.1.2 主要設(shè)備

電子調(diào)溫電熱套:天津市泰斯特儀器有限公司

電子分析天平(萬分之一):賽多利斯特科學(xué)儀器(北京)有限公司

容量瓶:10mL，100mL，1000mL

吸量管:10mL，5mL，2mL，0.5mL

TU－1901型雙光束紫外可見分光光度計(jì):北京普析通用儀器有限責(zé)任公司

HH－1數(shù)顯恒溫水浴鍋:金壇市開發(fā)區(qū)吉特實(shí)驗(yàn)儀器廠

常用的化學(xué)實(shí)驗(yàn)玻璃儀器

1.1.1.3 主要試劑

(1)谷氨酸標(biāo)準(zhǔn)品:稱取0.5g谷氨酸粉末，用蒸餾水溶解后，定容到100ml配制成標(biāo)準(zhǔn)溶液.

(2)茚三酮溶液:稱取茚三酮1g，溶于25ml蒸餾水中，加氯化亞錫40mg，溶解后搖勻、過濾，濾液置于暗處一天后加水定容至50 ml，存于暗處.

(3)PH8.0磷酸鹽緩沖液:稱取一定量磷酸鹽溶于適量蒸餾水中，用酸度計(jì)測(cè)溶液ph，然后邊測(cè)邊向溶液中加蒸餾水直到溶液ph值接近8時(shí)為止.

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 苦丁茶游離氨基酸樣品液制備

1.2.1.1 樣品處理

將不同級(jí)別新鮮苦丁茶粉碎樣品過80目篩，用0.0001g分析天平準(zhǔn)確稱取樣品粉末苦丁茶樣品25.0g置于圓底燒瓶中，加300ml蒸餾水加熱回流2次，每次45min，然后過濾，合并濾液，用蒸餾水定容至500ml，搖勻，備用.

1.2.2 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線

1.2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制:

準(zhǔn)確稱取干燥至恒重的谷氨酸標(biāo)準(zhǔn)品0.5019g，用蒸餾水溶解后轉(zhuǎn)入100 ml容量瓶中，并定容至刻度，得濃度為5.0 mg/ml標(biāo)準(zhǔn)貯備液，裝入棕色瓶中冰箱保存?zhèn)溆?準(zhǔn)確吸取上述標(biāo)準(zhǔn)液10 ml，加水定容至50 ml作為工作液(1ml含茶氨酸1.0 mg).

氨基酸定量標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作:分別吸取 0.0 ml、1.0ml、2.0 ml、3.0 ml、4.0 ml、5.0 ml氨基酸工作液于一組25ml容量瓶中，各加水4 ml，茚三酮溶液0.5 ml和PH8.0磷酸鹽緩沖液2 ml，在沸水中加熱15 min，冷卻后加水定容至25 ml，放置10 min后，用5 mm比色杯，在570 nm處，以試劑空白溶液作參比，測(cè)定吸光度(A)將測(cè)得的吸光度與對(duì)應(yīng)的茶氨酸濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)線.

1.2.3 最佳波長(zhǎng)的選擇

取標(biāo)準(zhǔn)待測(cè)液(7支比色管)在TU－1901紫外－可見分光光度計(jì)上，470－650nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行光譜掃描，取最大吸收波長(zhǎng)為檢測(cè)波長(zhǎng)，最后得到570nm處吸收最大.在570nm的最佳波長(zhǎng)處，測(cè)定吸光度A.然后以谷氨酸標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為橫坐標(biāo)，以其吸光度A為縱坐標(biāo)作標(biāo)準(zhǔn)曲線.

1.2.4 苦丁茶樣品氨基酸含量測(cè)定

分別準(zhǔn)確量取不同級(jí)別苦丁茶樣品1.0ml提取液，加入茚三酮溶液0.5ml和PH8.0磷酸鹽緩沖液2ml，在沸水中加熱15min，冷卻后加水定容到25ml，放置10min后，用1cm比色皿，以試劑空白作參比，于波長(zhǎng)570nm處測(cè)其吸光度.重復(fù)測(cè)定七次.

1.2.5 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)與實(shí)驗(yàn)結(jié)果

1.2.5.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)與標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

表1 谷氨酸標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)曲線實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)

圖1 谷氨酸標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)曲線實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)

1.2.5.2 樣品實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)與實(shí)驗(yàn)結(jié)果

計(jì)算公式:①吸光度值代入公式:

求得測(cè)量樣液濃度C

②含量計(jì)算公式:

V總為樣液總體積，m總為樣品總質(zhì)量

游離氨基酸是苦丁茶的重要成分之一，也是人體所需的重要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，因此，它與苦丁茶的飲、藥用價(jià)值密切相關(guān)，經(jīng)TU－1901紫外－可見分光光度計(jì)測(cè)定，經(jīng)數(shù)據(jù)處理和計(jì)算得出不同等級(jí)即不同部位海南五指山苦丁茶游離氨基酸總平均含量不一樣，四個(gè)等級(jí)的五指山苦丁茶中氨基酸總平均含量分別為96.95、92.04、85.64 和78.95mg/g，結(jié)果如下表所示.

表2 各等級(jí)茶葉樣品實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)與結(jié)果

實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn):一、二級(jí)苦丁茶游離氨基酸總平均含量較豐富，三、四級(jí)別相對(duì)低一些，但整體總平均含量相差不大.

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果討論與分析

實(shí)驗(yàn)采用谷氨酸作為基準(zhǔn)物質(zhì)，原料為不同部位等級(jí)的海南五指山苦丁茶，采用茚三酮比色法，通過TU－1901型紫外可見分光光度計(jì)，測(cè)定茶葉中茶游離氨基酸總平均含量，方法簡(jiǎn)單快速并具有較好的精密度與準(zhǔn)確度，基準(zhǔn)物質(zhì)谷氨酸便宜易得、對(duì)儀器條件要求不高的優(yōu)點(diǎn).作為一種對(duì)于茶葉品質(zhì)的初步鑒定、快速測(cè)定方法，有一定應(yīng)用價(jià)值.

實(shí)驗(yàn)存在以下問題，有待以后繼續(xù)研究加以改進(jìn).所采用苦丁茶樣品材料的等級(jí)級(jí)別較少并且等級(jí)級(jí)數(shù)相差不大，數(shù)據(jù)顯示相差不明顯;另因谷氨酸標(biāo)準(zhǔn)品、茚三酮溶液的穩(wěn)定性(如受環(huán)境如光照、溫度等條件影響較大)較差，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有影響，故谷氨酸標(biāo)準(zhǔn)品、茚三酮溶液用于游離氨基酸總平均含量測(cè)定時(shí)，宜現(xiàn)用現(xiàn)配并注意避光［7］.實(shí)驗(yàn)測(cè)量時(shí)采用多次平行測(cè)定，準(zhǔn)確度相對(duì)較高，仍具有參考價(jià)值.

3 結(jié)論

苦丁茶是天然保健綠色食品，有較好的藥用價(jià)值［8］.苦丁茶樣品中游離氨基酸總平均含量是:一級(jí)品＞二級(jí)品＞三級(jí)品＞四級(jí)品.就游離氨基酸總平均含量來分析，一級(jí)品與二級(jí)品差別不大，而三級(jí)品和四級(jí)品則差別較大，尤其四級(jí)品含量較低.不同部位的苦丁茶游離氨基酸總平均含量存在著一定的差別，，三級(jí)品老葉但未脫落的苦丁茶仍可利用.即未脫落的茶葉及脫落的老葉與幼嫩芽葉加工的苦丁茶相比，游離氨基酸總平均含量相對(duì)低一些，但苦丁茶樹年生長(zhǎng)量大，成葉葉片大而厚，產(chǎn)量很高，收購價(jià)格低，故仍應(yīng)對(duì)老葉加以利用.仍有較大開發(fā)利用前景.建議在采摘苦丁茶時(shí)，同時(shí)采摘未脫落的老葉，以免脫落后成分損失而失去利用價(jià)值.

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