馬小紅 徐 仙

寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心，寧夏生殖與遺傳重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室(銀川，750004)

卵巢早衰(POF)是由多種病因所致的卵巢功能過(guò)早衰竭，發(fā)生于40歲以下的婦女，發(fā)病率約1%～3%［1，2］。POF 的病因復(fù)雜，盡管?chē)?guó)內(nèi)外學(xué)者提出眾多假說(shuō)，諸如遺傳、感染、理化/代謝因素、藥物等，但均不能更好地解釋POF的病理生理變化及其臨床特征。近年來(lái)有學(xué)者提出POF并非不可逆的，殘存的卵泡功能可能再度恢復(fù)，POF的發(fā)生與自身免疫功能紊亂密切相關(guān)［3］。本研究對(duì)POF患者和正常婦女進(jìn)行對(duì)照研究，通過(guò)測(cè)定血清中白介素(IL)－1α、IL－1β、淋巴細(xì)胞亞群(CD3、CD4、CD8、CD19、CD16+56)水平，從分子水平進(jìn)一步闡明POF的自身免疫致病機(jī)制，以期尋找治療POF的有效方法。

1 資料與方法

1.1 一般資料

篩選2009年5月～2010年12月在本中心就診的POF患者30例為研究組，年齡30.45±6.12(21～38)歲;已婚24例(9例無(wú)生育要求)，未婚6例;原發(fā)不孕7例，繼發(fā)不孕8例。選擇同期月經(jīng)周期規(guī)律，尿黃體生成激素(LH)或B超監(jiān)測(cè)有正常排卵，因男性因素或者輸卵管因素不孕的婦女(需首先征得患者同意)為對(duì)照組(30例)，年齡29.21±3.58歲。研究對(duì)象3個(gè)月內(nèi)均未使用過(guò)甾體激素藥物，在進(jìn)入本研究前2個(gè)月內(nèi)無(wú)妊娠、手術(shù)史，肝腎功能均正常。

1.2 POF 患者診斷標(biāo)準(zhǔn)［4］

①青春期以后至40歲前閉經(jīng);②卵泡刺激素(FSH)＞40U/L;③雌二醇(E2)＜25pg/ml。

1.3 方法

1.3.1 儀器及試劑 505型酶標(biāo)測(cè)定儀(美國(guó)BIORAD公司)，5745型洗板機(jī)(美國(guó) BIO－RAD公司)，F(xiàn)ACSCalibur流式細(xì)胞儀(美國(guó)BD公司);IL－1α及IL－1β檢測(cè)試劑盒(美國(guó)ABI公司);淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)試劑盒(美國(guó)BD公司)。

1.3.1 標(biāo)本采集 研究組于任意日的早晨，對(duì)照組于月經(jīng)周期第3～5d，空腹12h，晨8時(shí)采集靜脈血3ml，3 000rpm/min 離心 5min，留取血清保存，集中測(cè)定血清中 IL－1α、IL－1β、淋巴細(xì)胞亞群(CD3、CD4、CD8、CD19、CD16+56)水平。

1.3.2 測(cè)定方法 各因子測(cè)定均嚴(yán)格依照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。IL－1α、IL－1β采用ELISA法測(cè)定;淋巴細(xì)胞亞群采用熒光免疫法測(cè)定。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

采用SPSS 11.5軟件對(duì)資料數(shù)據(jù)進(jìn)行χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 兩組血清中IL－1α、IL－1β 比較

研究組血清中 IL－1β水平(27.90±6.63pg/ml)低于對(duì)照組(33.73 ±8.63pg/ml，t=2.359，P ＜0.05);血清 IL－1α 水平研究組(18.15 ±5.30pg/ml)和對(duì)照組(19.25 ±3.35pg/ml)無(wú)差異(t=0.041，P ＞0.05)。

2.2 兩組血清中T淋巴細(xì)胞亞群比較

兩組全血T+B+自然殺傷細(xì)胞(NK)、CD3、CD4、CD8、CD4/CD8、CD19、CD16+56 水平均無(wú)差異(P ＞0.05)，見(jiàn)表1。

表1 研究組與對(duì)照組T淋巴細(xì)胞亞群測(cè)定值比較(pg/ml，±s)

表1 研究組與對(duì)照組T淋巴細(xì)胞亞群測(cè)定值比較(pg/ml，±s)

組別T+B+NK CD3 CD4 CD8 CD4/CD8 CD19 CD16+56研究組 99.30 ±3.16 70.50 ±7.62 34.7 ±5.52 31.5 ±7.09 1.15 ±0.30 11.90 ±3.63 16.9 ±7.33對(duì)照組 92.97 ±24.45 70.64 ±8.92 35.75 ±4.25 30.38 ±8.91 1.73 ±1.98 10.44 ±8.70 21.13 ±5.37 t 0.809 0.041 0.547 0.337 0.915 0.502 1.67

3 討論

3.1 IL－1β對(duì) POF的影響

IL－1又稱(chēng)淋巴細(xì)胞激活因子，是一種主要由血液中的單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞以及其它多種類(lèi)型細(xì)胞合成和分泌的重要細(xì)胞因子和多肽調(diào)節(jié)因子。IL－1系統(tǒng)由IL－1α、IL－1β、IL－1Ⅰ型受體、IL－1Ⅱ型受體、IL－1受體拮抗劑5種成分組成。其中，IL－1β和生殖內(nèi)分泌的關(guān)系最為密切。IL－1系統(tǒng)參與白細(xì)胞不同群體間信息傳遞，在卵泡發(fā)育、排卵和黃體功能調(diào)節(jié)等方面均具有重要作用。Karagouni等［5］用ELISA法證實(shí)了卵泡液中IL－1β的存在，并發(fā)現(xiàn)卵泡液中IL－1β的水平較血清中明顯增高。由此可見(jiàn)，IL－1β為卵巢源性。免疫組化研究亦表明在卵細(xì)胞發(fā)育的全過(guò)程中卵泡液都存在IL－1β的強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)。IL－1β有較強(qiáng)的抗促性腺激素作用，可阻斷顆粒細(xì)胞分泌孕酮(P)和形成LH受體，并通過(guò)抑制雌激素、P、雄激素和LH受體的形成，阻止卵泡閉鎖。當(dāng)體內(nèi)的IL－1β下降時(shí)，卵泡的發(fā)育及閉鎖受到影響，出現(xiàn)排卵障礙，分泌雌、孕激素下降，卵泡閉鎖加速，而卵泡閉鎖的加速是POF的發(fā)病原因之一。本研究結(jié)果顯示:對(duì)照組卵泡早期血清IL－1β 水平為 33.73 ±8.63pg/ml，與早期文獻(xiàn)報(bào)道不一致，研究組IL－1β水平低于對(duì)照組，而IL－1α水平無(wú)差異，提示IL－1β對(duì)卵泡發(fā)育具有重要調(diào)節(jié)作用，其作用過(guò)程有待進(jìn)一步探討。

有研究回顧近30年有關(guān)卵巢炎和POF的文獻(xiàn)，發(fā)現(xiàn)POF患者活化T淋巴細(xì)胞增加，該細(xì)胞表達(dá)主要組織相容性抗原－Ⅱ(MHC－Ⅱ)類(lèi)分子，產(chǎn)生IL－1β，進(jìn)而活化卵巢上皮巨噬細(xì)胞，分泌細(xì)胞因子，進(jìn)入卵泡液，參與生長(zhǎng)卵泡的閉鎖過(guò)程［6，7］。

3.2 淋巴細(xì)胞亞群在POF組織中的病理作用

近年來(lái)，眾多的研究表明細(xì)胞免疫在POF中起著至關(guān)重要的作用，而CD4+和CD8+T細(xì)胞是細(xì)胞免疫中的主要細(xì)胞。CD4+T細(xì)胞根據(jù)分泌細(xì)胞因子的不同，分為T(mén)h1(分泌IL－2，IFN－γ等)、Th2(分泌IL－6，IL－10等)兩大類(lèi)，分別參與細(xì)胞免疫和體液免疫，兩者之間為動(dòng)態(tài)平衡，如某種因素打破了這種狀態(tài)，則可能導(dǎo)致各種免疫相關(guān)的疾病。Th1細(xì)胞占優(yōu)勢(shì)，其分泌的細(xì)胞因子IL－2、IFN－γ等可誘導(dǎo)顆粒細(xì)胞及黃體細(xì)胞MHC－Ⅱ類(lèi)抗原表達(dá)誘發(fā)自身免疫應(yīng)答，使顆粒細(xì)胞和卵泡受到破壞，從而發(fā)生POF。CD8+T細(xì)胞主要指細(xì)胞毒性T細(xì)胞，其主要功能是特異性殺傷靶細(xì)胞。在POF中，卵巢功能減退閉經(jīng)時(shí)，CD8+T增加是自身免疫性卵巢炎在外周血的反映。謝梅青［8］報(bào)道:在POF患者體內(nèi)，CD8+T細(xì)胞作為一個(gè)整體，雖然其數(shù)量是增加的，但其調(diào)節(jié)功能下降，機(jī)體的自身免疫反應(yīng)亢進(jìn)。所以在POF中，CD8+T細(xì)胞亞群水平升高。其升高的程度與疾病的嚴(yán)重程度、病情變化、治療反應(yīng)及預(yù)后密切相關(guān)。

本研究結(jié)果顯示:兩組全血T+B+NK、CD3、CD4、CD8、CD4/CD8、CD19、CD16+56 水平均無(wú)差異，這與文獻(xiàn)報(bào)道不一致，其原因可能是:①研究對(duì)象的選擇及病程長(zhǎng)短的差異;②實(shí)驗(yàn)技術(shù)和測(cè)定方法等因素的影響。

總之，POF病因復(fù)雜，其發(fā)病機(jī)制與神經(jīng)內(nèi)分泌免疫網(wǎng)絡(luò)之間存在著復(fù)雜的聯(lián)系，隨著生殖醫(yī)學(xué)的飛速發(fā)展，將為其發(fā)病機(jī)理的研究開(kāi)辟新的途徑。如何早期預(yù)防POF的發(fā)生及恢復(fù)卵巢功能，提高生活質(zhì)量，是國(guó)內(nèi)外生殖內(nèi)分泌學(xué)者亟待解決的問(wèn)題。因POF患者可能存在自身免疫功能紊亂，應(yīng)用免疫抑制劑是治療方法之一，但激素類(lèi)藥物長(zhǎng)期應(yīng)用副作用較大，且不易為所有POF患者所接受。而中醫(yī)藥通過(guò)多環(huán)節(jié)發(fā)揮整體調(diào)節(jié)作用，進(jìn)而改善患者癥狀，且副作用較小。因此，中醫(yī)藥與POF的病理生理研究將是極有發(fā)展前景的領(lǐng)域之一。

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