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        卵巢早衰患者血清白介素-1、淋巴細(xì)胞亞群的水平及臨床意義

        2012-06-08 06:15:30馬小紅
        關(guān)鍵詞:亞群卵泡淋巴細(xì)胞

        馬小紅 徐 仙

        寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心,寧夏生殖與遺傳重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室(銀川,750004)

        卵巢早衰(POF)是由多種病因所致的卵巢功能過早衰竭,發(fā)生于40歲以下的婦女,發(fā)病率約1%~3%[1,2]。POF 的病因復(fù)雜,盡管國內(nèi)外學(xué)者提出眾多假說,諸如遺傳、感染、理化/代謝因素、藥物等,但均不能更好地解釋POF的病理生理變化及其臨床特征。近年來有學(xué)者提出POF并非不可逆的,殘存的卵泡功能可能再度恢復(fù),POF的發(fā)生與自身免疫功能紊亂密切相關(guān)[3]。本研究對POF患者和正常婦女進(jìn)行對照研究,通過測定血清中白介素(IL)-1α、IL-1β、淋巴細(xì)胞亞群(CD3、CD4、CD8、CD19、CD16+56)水平,從分子水平進(jìn)一步闡明POF的自身免疫致病機(jī)制,以期尋找治療POF的有效方法。

        1 資料與方法

        1.1 一般資料

        篩選2009年5月~2010年12月在本中心就診的POF患者30例為研究組,年齡30.45±6.12(21~38)歲;已婚24例(9例無生育要求),未婚6例;原發(fā)不孕7例,繼發(fā)不孕8例。選擇同期月經(jīng)周期規(guī)律,尿黃體生成激素(LH)或B超監(jiān)測有正常排卵,因男性因素或者輸卵管因素不孕的婦女(需首先征得患者同意)為對照組(30例),年齡29.21±3.58歲。研究對象3個(gè)月內(nèi)均未使用過甾體激素藥物,在進(jìn)入本研究前2個(gè)月內(nèi)無妊娠、手術(shù)史,肝腎功能均正常。

        1.2 POF 患者診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]

        ①青春期以后至40歲前閉經(jīng);②卵泡刺激素(FSH)>40U/L;③雌二醇(E2)<25pg/ml。

        1.3 方法

        1.3.1 儀器及試劑 505型酶標(biāo)測定儀(美國BIORAD公司),5745型洗板機(jī)(美國 BIO-RAD公司),F(xiàn)ACSCalibur流式細(xì)胞儀(美國BD公司);IL-1α及IL-1β檢測試劑盒(美國ABI公司);淋巴細(xì)胞亞群檢測試劑盒(美國BD公司)。

        1.3.1 標(biāo)本采集 研究組于任意日的早晨,對照組于月經(jīng)周期第3~5d,空腹12h,晨8時(shí)采集靜脈血3ml,3 000rpm/min 離心 5min,留取血清保存,集中測定血清中 IL-1α、IL-1β、淋巴細(xì)胞亞群(CD3、CD4、CD8、CD19、CD16+56)水平。

        1.3.2 測定方法 各因子測定均嚴(yán)格依照試劑盒說明書進(jìn)行。IL-1α、IL-1β采用ELISA法測定;淋巴細(xì)胞亞群采用熒光免疫法測定。

        1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

        采用SPSS 11.5軟件對資料數(shù)據(jù)進(jìn)行χ2檢驗(yàn)。

        2 結(jié)果

        2.1 兩組血清中IL-1α、IL-1β 比較

        研究組血清中 IL-1β水平(27.90±6.63pg/ml)低于對照組(33.73 ±8.63pg/ml,t=2.359,P <0.05);血清 IL-1α 水平研究組(18.15 ±5.30pg/ml)和對照組(19.25 ±3.35pg/ml)無差異(t=0.041,P >0.05)。

        2.2 兩組血清中T淋巴細(xì)胞亞群比較

        兩組全血T+B+自然殺傷細(xì)胞(NK)、CD3、CD4、CD8、CD4/CD8、CD19、CD16+56 水平均無差異(P >0.05),見表1。

        表1 研究組與對照組T淋巴細(xì)胞亞群測定值比較(pg/ml,±s)

        表1 研究組與對照組T淋巴細(xì)胞亞群測定值比較(pg/ml,±s)

        組別T+B+NK CD3 CD4 CD8 CD4/CD8 CD19 CD16+56研究組 99.30 ±3.16 70.50 ±7.62 34.7 ±5.52 31.5 ±7.09 1.15 ±0.30 11.90 ±3.63 16.9 ±7.33對照組 92.97 ±24.45 70.64 ±8.92 35.75 ±4.25 30.38 ±8.91 1.73 ±1.98 10.44 ±8.70 21.13 ±5.37 t 0.809 0.041 0.547 0.337 0.915 0.502 1.67

        3 討論

        3.1 IL-1β對 POF的影響

        IL-1又稱淋巴細(xì)胞激活因子,是一種主要由血液中的單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞以及其它多種類型細(xì)胞合成和分泌的重要細(xì)胞因子和多肽調(diào)節(jié)因子。IL-1系統(tǒng)由IL-1α、IL-1β、IL-1Ⅰ型受體、IL-1Ⅱ型受體、IL-1受體拮抗劑5種成分組成。其中,IL-1β和生殖內(nèi)分泌的關(guān)系最為密切。IL-1系統(tǒng)參與白細(xì)胞不同群體間信息傳遞,在卵泡發(fā)育、排卵和黃體功能調(diào)節(jié)等方面均具有重要作用。Karagouni等[5]用ELISA法證實(shí)了卵泡液中IL-1β的存在,并發(fā)現(xiàn)卵泡液中IL-1β的水平較血清中明顯增高。由此可見,IL-1β為卵巢源性。免疫組化研究亦表明在卵細(xì)胞發(fā)育的全過程中卵泡液都存在IL-1β的強(qiáng)陽性表達(dá)。IL-1β有較強(qiáng)的抗促性腺激素作用,可阻斷顆粒細(xì)胞分泌孕酮(P)和形成LH受體,并通過抑制雌激素、P、雄激素和LH受體的形成,阻止卵泡閉鎖。當(dāng)體內(nèi)的IL-1β下降時(shí),卵泡的發(fā)育及閉鎖受到影響,出現(xiàn)排卵障礙,分泌雌、孕激素下降,卵泡閉鎖加速,而卵泡閉鎖的加速是POF的發(fā)病原因之一。本研究結(jié)果顯示:對照組卵泡早期血清IL-1β 水平為 33.73 ±8.63pg/ml,與早期文獻(xiàn)報(bào)道不一致,研究組IL-1β水平低于對照組,而IL-1α水平無差異,提示IL-1β對卵泡發(fā)育具有重要調(diào)節(jié)作用,其作用過程有待進(jìn)一步探討。

        有研究回顧近30年有關(guān)卵巢炎和POF的文獻(xiàn),發(fā)現(xiàn)POF患者活化T淋巴細(xì)胞增加,該細(xì)胞表達(dá)主要組織相容性抗原-Ⅱ(MHC-Ⅱ)類分子,產(chǎn)生IL-1β,進(jìn)而活化卵巢上皮巨噬細(xì)胞,分泌細(xì)胞因子,進(jìn)入卵泡液,參與生長卵泡的閉鎖過程[6,7]。

        3.2 淋巴細(xì)胞亞群在POF組織中的病理作用

        近年來,眾多的研究表明細(xì)胞免疫在POF中起著至關(guān)重要的作用,而CD4+和CD8+T細(xì)胞是細(xì)胞免疫中的主要細(xì)胞。CD4+T細(xì)胞根據(jù)分泌細(xì)胞因子的不同,分為Th1(分泌IL-2,IFN-γ等)、Th2(分泌IL-6,IL-10等)兩大類,分別參與細(xì)胞免疫和體液免疫,兩者之間為動(dòng)態(tài)平衡,如某種因素打破了這種狀態(tài),則可能導(dǎo)致各種免疫相關(guān)的疾病。Th1細(xì)胞占優(yōu)勢,其分泌的細(xì)胞因子IL-2、IFN-γ等可誘導(dǎo)顆粒細(xì)胞及黃體細(xì)胞MHC-Ⅱ類抗原表達(dá)誘發(fā)自身免疫應(yīng)答,使顆粒細(xì)胞和卵泡受到破壞,從而發(fā)生POF。CD8+T細(xì)胞主要指細(xì)胞毒性T細(xì)胞,其主要功能是特異性殺傷靶細(xì)胞。在POF中,卵巢功能減退閉經(jīng)時(shí),CD8+T增加是自身免疫性卵巢炎在外周血的反映。謝梅青[8]報(bào)道:在POF患者體內(nèi),CD8+T細(xì)胞作為一個(gè)整體,雖然其數(shù)量是增加的,但其調(diào)節(jié)功能下降,機(jī)體的自身免疫反應(yīng)亢進(jìn)。所以在POF中,CD8+T細(xì)胞亞群水平升高。其升高的程度與疾病的嚴(yán)重程度、病情變化、治療反應(yīng)及預(yù)后密切相關(guān)。

        本研究結(jié)果顯示:兩組全血T+B+NK、CD3、CD4、CD8、CD4/CD8、CD19、CD16+56 水平均無差異,這與文獻(xiàn)報(bào)道不一致,其原因可能是:①研究對象的選擇及病程長短的差異;②實(shí)驗(yàn)技術(shù)和測定方法等因素的影響。

        總之,POF病因復(fù)雜,其發(fā)病機(jī)制與神經(jīng)內(nèi)分泌免疫網(wǎng)絡(luò)之間存在著復(fù)雜的聯(lián)系,隨著生殖醫(yī)學(xué)的飛速發(fā)展,將為其發(fā)病機(jī)理的研究開辟新的途徑。如何早期預(yù)防POF的發(fā)生及恢復(fù)卵巢功能,提高生活質(zhì)量,是國內(nèi)外生殖內(nèi)分泌學(xué)者亟待解決的問題。因POF患者可能存在自身免疫功能紊亂,應(yīng)用免疫抑制劑是治療方法之一,但激素類藥物長期應(yīng)用副作用較大,且不易為所有POF患者所接受。而中醫(yī)藥通過多環(huán)節(jié)發(fā)揮整體調(diào)節(jié)作用,進(jìn)而改善患者癥狀,且副作用較小。因此,中醫(yī)藥與POF的病理生理研究將是極有發(fā)展前景的領(lǐng)域之一。

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        8 謝梅青.卵巢早衰的病因[J].實(shí)用婦產(chǎn)科雜志,2003,19(4):193-195.

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