汪愛霞， 張惠萍， 安雙生， 范富元

（甘肅河西制藥有限責(zé)任公司，甘肅張掖 734000）

前列泰片鹽酸水蘇堿定量測定方法改進(jìn)

汪愛霞， 張惠萍， 安雙生， 范富元

（甘肅河西制藥有限責(zé)任公司，甘肅張掖 734000）

目的 改進(jìn)前列泰片藥品標(biāo)準(zhǔn)鹽酸水蘇堿定量測定方法。方法 采用薄層掃描法 （TLCS法）；供試品溶液制備中將1%鹽酸甲醇溶液提取調(diào)整為甲醇溶液提取；對照品質(zhì)量濃度由1 mg/mL調(diào)整為2 mg/mL，點(diǎn)樣量為2μL和4 μL；供試品點(diǎn)樣量由2 μL調(diào)整為4 μL；顯色條件改為薄層板在105℃加熱15 min，放冷，噴以稀碘化鉍鉀試液－1%三氯化鐵乙醇溶液 （10∶1）的混合液顯色。結(jié)果 鹽酸水蘇堿在2.284～11.420 μg范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好，r=0.999 1；對照品斑點(diǎn)與供試品斑點(diǎn)顯色更加清晰、集中，分離度、穩(wěn)定性、重復(fù)性好。結(jié)論 改進(jìn)后的方法提升了檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性，可有效地控制前列泰片的質(zhì)量。

前列泰片；薄層掃描法；鹽酸水蘇堿

前列泰片為國家食品藥品監(jiān)督管理局《國家藥品標(biāo)準(zhǔn)新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)第34冊》收載品種，標(biāo)準(zhǔn)號WS3－090（Z－015）－2002（Z）［1］，由益母草、萹蓄、紅花、油菜蜂花粉、知母、黃柏等中藥材加工制成，具有清熱利濕，活血散結(jié)的功效，臨床用于慢性前列腺炎濕熱挾瘀證。該藥品標(biāo)準(zhǔn)采用薄層掃描法測定鹽酸水蘇堿，在具體實(shí)驗(yàn)中，存在顯色后薄層板上的斑點(diǎn)顏色淺，且斑點(diǎn)容易迅速擴(kuò)散呈空心狀，影響掃描峰形，測定結(jié)果誤差較大。針對這一問題，我們查閱了相關(guān)鹽酸水蘇堿檢測方法［2-3］和薄層掃描定量的影響因素及其方法學(xué)驗(yàn)證［4-5］等資料，并通過實(shí)驗(yàn)研究，對原測定方法中的提取溶劑、提取時間、對照品配制質(zhì)量濃度、薄層板的預(yù)處理及顯色方法［6］進(jìn)行了研究改進(jìn)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 CS-9301型雙波長薄層掃描儀，日本島津；定量毛細(xì)點(diǎn)樣管，日本島津；硅膠G薄層板，青島海洋化工廠；十萬分之一電子天平，型號：AG135型，梅特勒-托利多儀器有限公司；萬分之一電子天平，型號：FA1004型，上海恒平科學(xué)儀器有限公司。

1.2 試藥 鹽酸水蘇堿對照品 （中國藥品生物制品檢定所，批號：110712-200508）；前列泰片 （甘肅河西制藥有限責(zé)任公司提供，規(guī)格：每素片質(zhì)量0.44g，批號：100901、101101、101102）；水為重蒸水，其它試劑均為分析純。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 供試品溶液的制備 取本品40片，除去包衣，精密稱定，研細(xì)，取約4.4 g，精密稱定，置索氏提取器中，加乙酸乙酯回流至提取液無色 （約7 h），藥渣揮干，繼用甲醇回流至提取液無生物堿反應(yīng) （約7 h），提取液濃縮至干，殘渣中精密加入水20 mL置平底燒瓶中，稱定質(zhì)量，置沸水浴上加熱5 min后，再稱定質(zhì)量，用水補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液10 mL，置水浴上蒸干，殘渣用甲醇溶解轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取鹽酸水蘇堿對照品 （置五氧化二磷減壓干燥器中干燥12 h）適量，加甲醇制成每1 mL含2 mg的溶液，即得。

2.3 層析條件 點(diǎn)樣方式：交叉點(diǎn)樣；吸附劑：硅膠G板；展開劑：正丁醇－鹽酸 （36%）－乙酸乙酯 （8∶3∶1），混勻，展開劑無分層；展開方式：上行展開，薄層板展開后，取出，晾干，在105℃加熱15 min，放冷，噴以稀碘化鉍鉀試液－1%三氯化鐵乙醇溶液 （10∶1）的混合液至斑點(diǎn)顯色清晰，在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用膠布固定。

2.4 掃描條件 照薄層色譜法（《中國藥典》2010年版一部附錄ⅥB薄層掃描法）進(jìn)行反射法鋸齒掃描，狹縫：0.4 mm×0.4 mm，掃描波長 λ=510 nm，掃描寬度：16 mm。

2.5 顯色結(jié)果 顯色后薄層板上的斑點(diǎn)顏色深、集中，并且不易擴(kuò)散。見圖1。

圖1 對照品色譜圖

2.6 線性關(guān)系考察 精密吸取對照品溶液1、2、3、4、5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，按上述層析條件展開、顯色后，并按上述掃描條件測定峰面積積分值，以鹽酸水蘇堿含有量為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的峰面積積分值為縱坐標(biāo)，計算得回歸方程為Y=353.49X－464.84，相關(guān)系數(shù)r=0.999 1，在2.284～11.420 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。掃描后峰形見圖2。

圖2 線性關(guān)系考察薄層掃描圖

2.7 精密度試驗(yàn) 分別精密吸取對照品溶液2 μL、4 μL交叉點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，連續(xù)6次，按上述薄層色譜條件展開并掃描，測定峰面積積分值，結(jié)果2 μL峰面積RSD為1.32%（n=5），4 μL峰面積積分值RSD為0.53%（n=5），掃描后峰形見圖3。

圖3 精密度試驗(yàn)薄層掃描圖

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 分別于0、20、40、60、80、100 min掃描測定同一供試品峰面積積分值，結(jié)果RSD為2.56%（n=6）。

2.9 重復(fù)性試驗(yàn) 取前列泰片樣品 （批號：100901），分別制備供試品溶液6份，對照品點(diǎn)樣2 μL、4 μL與供試品點(diǎn)樣4 μL分別交叉點(diǎn)樣于同一生產(chǎn)廠家同一批號和規(guī)格的6塊薄層板上，展開、掃描，測定每份樣品中鹽酸水蘇堿，結(jié)果樣品中鹽酸水蘇堿平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為6.09 mg/g，RSD為2.85%（n=6），重復(fù)性良好［7］。

2.10 加樣回收試驗(yàn) 精密稱取已知量的前列泰片樣品6份 （批號：100901，除去包衣平均片質(zhì)量為0.441 3 g，鹽酸水蘇堿質(zhì)量分?jǐn)?shù)6.09 mg/g），每份約2.2 g，精密加入鹽酸水蘇堿對照品13 mg，按2.1項(xiàng)下供試品溶液制備方法制備，按2.3項(xiàng)下薄層層析條件及2.4項(xiàng)下掃描條件測定鹽酸水蘇堿，結(jié)果鹽酸水蘇堿的平均加樣回收率為100.7%，RSD為2.86%，見表1。

表1 加樣回收試驗(yàn)

2.11 供試品測定 取3批前列泰片樣品各2份，分別制成供試品溶液，測定鹽酸水蘇堿，測定結(jié)果見表2。掃描后峰形見圖4。

表2 供試品測定結(jié)果

圖4 供試品測定薄層掃描圖

3 討論

3.1 供試品提取溶劑選擇［8］供試品溶液制備時，分別選用1%鹽酸甲醇溶液、0.5%鹽酸甲醇溶液、甲醇溶液作為提取溶劑，其中1%鹽酸甲醇與0.5%鹽酸甲醇提取液均有大量絮狀沉淀生成，而甲醇提取液無沉淀物，供試品制備時采用甲醇溶液作為提取溶劑，斑點(diǎn)顯色清晰，因此選擇甲醇溶液提取。

3.2 供試品提取時間的確定 供試品溶液制備時，精密稱定，置索氏提取器中，加乙酸乙酯回流至提取液無色，提取時間在6～7 h提取液基本無色；藥渣揮干，繼用甲醇回流至提取液無生物堿反應(yīng)，提取時間在6～8 h提取液無生物堿反應(yīng)［9］。故選擇兩次提取時間約為7 h較為適宜。

3.3 對照品質(zhì)量濃度及點(diǎn)樣量的調(diào)整［10］原測定方法對照品溶液點(diǎn)樣量為2 μL的斑點(diǎn)穩(wěn)定性差，將對照品質(zhì)量濃度由1 mg/mL調(diào)整為2 mg/mL，點(diǎn)樣量仍為2 μL和4 μL，供試品點(diǎn)樣量相應(yīng)由2 μL調(diào)整為4 μL，調(diào)整后斑點(diǎn)更穩(wěn)定、集中，掃描峰形良好。

3.4 薄層板的預(yù)處理和顯色劑選擇 采用《中國藥典》2010年版一部益母草膏項(xiàng)下收載的鹽酸水蘇堿含量測定項(xiàng)［11］所用的薄層板的預(yù)處理方法和顯色方法，即顯色前的薄層板在105℃加熱15 min［12］，放冷，噴以稀碘化鉍鉀試液－1%三氯化鐵乙醇溶液 （10∶1）的混合液顯色，顯色結(jié)果表明，比薄層板晾干后直接采用稀碘化鉍鉀試液顯色的斑點(diǎn)清晰、集中，掃描圖譜無干擾，分離度好。

［1］國家食品藥品監(jiān)督管理局.國家藥品標(biāo)準(zhǔn)新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)第34冊［S］.2003：8-9.

［2］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：2005年版一部［S］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：203-204.

［3］裴香萍，張淑蓉，裴妙榮.薄層掃描法測定婦月康膠囊中鹽酸水蘇堿的含量［J］.中成藥，2007，29（7）：1108-1108.

［4］何麗一.色譜［M］，北京：化學(xué)工業(yè)出版社化學(xué)與應(yīng)用化學(xué)出版中心出版，2005：177.

［5］林樂明，張 軍.藥物分析中薄層色譜的方法認(rèn)證［J］.色譜，1997，15（4）：310.

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［9］肖崇厚主編.中藥化學(xué)［M］.上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，1996：91-92.

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K927.2

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1001-1528（2012）06-1188-03

2011-04-28

汪愛霞 （1975—），女，主管藥師，從事中藥新產(chǎn)品研發(fā)和檢驗(yàn)工作。Tel：（0936）8212192，E-mail：gshxzy@126.com