王婷婷 丁明 付春蘭

[摘要] 目的 觀察腹腔注射不同劑量的鹽酸戊乙奎醚對大鼠認(rèn)知功能及大鼠海馬膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶（ChAT）陽性細(xì)胞數(shù)量的影響。 方法 12月齡Wistar大鼠32只，隨機(jī)分為4組（n = 8）。對照組：腹腔注射生理鹽水2 mL；PL組：注射鹽酸戊乙奎醚0.64 mg/kg；PM組鹽酸戊乙奎醚1.28 mg/kg組（PH）組鹽酸戊乙奎醚2.56 mg/kg。連續(xù)3 d腹腔給藥，停藥1d后進(jìn)行Morris水迷宮行為測試。測試結(jié)束后立即處死大鼠，取海馬組織，進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，測定海馬膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶（ChAT）的表達(dá)。 結(jié)果 水迷宮測試結(jié)果： PM組和PH組大鼠的潛伏期（2～3 d）和游泳距離均明顯長于PL組和NS組（P < 0.05）。ChAT在PL組和NS組海馬內(nèi)表達(dá)均顯著高于PM組和PH組（P < 0.05）。 結(jié)論 腹腔重復(fù)注射較大劑量鹽酸戊乙奎醚對大鼠的認(rèn)知功能有明顯損害作用，而注射小劑量的鹽酸戊乙奎醚對大鼠的認(rèn)知功能無明顯損害作用。

[關(guān)鍵詞] 鹽酸戊乙奎醚；認(rèn)知功能；膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶

[中圖分類號] R749.2[文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A[文章編號] 1673—9701（2012）25—0005—02

Effects of penehyclidine hydrochloride on cognitive function in aged rats

WANG Tingting1 DING Ming2 FU Chunlan2

1.Department of Anesthesiology of Weifang Medical College， Weifang 261000， China； 2.Department of Anesthesiology， the Eighty—ninth Hospital of PLA， Weifang 261000， China

[Abstract] Objective To investigate the effect of different doses of Penehyclidine hydrochloride on cognitive function and choline acetyltransterase （ChAT） in the hippocampus of aged rats. Methods Thirty—two 12—month—old wistar rats were randomly divided into four groups （n = 8）. Control group （NS group）： normal saline 2 mL； hydrochloric penehyclidine 0.64mg/kg （PL） group； hydrochloride penehyclidine 1.28 mg/kg （PM） group and the hydrochloric penehyclidine 2.56 mg/kg （PH） group， each group received intraperitoneal per day for three days. One day after the last drug administration， the animals underwent Morris water maze test， The animals were killed after last test. The hippocampus samples were harvested to determine the expression of choline acetyltransferase （ChAT） in the hippocampus using immunohistochemistry. Results The water maze test results： the latent period （2—3 d） and swimming distance of PM and PH group were significantly longer than the PL and NS group（P < 0.05）， the expression of ChAT in the hippocampus of the PL and NS group were significantly higher than the PM and PH group （P < 0.05）. Conclusion The repeated injections of high doses of Penehyclidine hydrochloride have significant effect on learning and memory ability of rat， but low dose has no obvious effect.

[Key words] Penehyclidine hydrochloride； Cognitive function； ChAT

術(shù)后認(rèn)知功能障礙（postoperation cognitive dysfunction，POCD）指患者在手術(shù)后出現(xiàn)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)并發(fā)癥，表現(xiàn)為精神錯亂、焦慮、人格的改變及記憶受損。在老年人群中， POCD有較高的發(fā)生率，據(jù)研究推測，中樞特定腦區(qū)的膽堿能通路參與了老年人POCD的發(fā)生[1]。鹽酸戊乙奎醚（Penehyclidine hydrochloride）是一種新型的抗膽堿能藥物，對M1和M3受體具有高度的選擇性，有較強(qiáng)的抑制腺體分泌作用，對心臟M2受體無明顯作用[2]，被越來越廣泛地用于臨床麻醉的術(shù)前用藥。但是術(shù)前抗膽堿能藥物可干擾腦信息的存儲過程特別是隨著抗膽堿能藥物劑量增大，導(dǎo)致記憶功能損害[3]。本研究旨在研究鹽酸戊乙奎醚的不同使用劑量對大鼠認(rèn)知功能的影響，為臨床合理應(yīng)用麻醉前用藥提供安全性依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 動物與分組

健康Wistar大鼠32只，雌雄各半，體重 500～600 g ， 由濰坊醫(yī)學(xué)院動物實驗中心提供。適應(yīng)性飼養(yǎng)1周使大鼠熟悉實驗室環(huán)境，自由攝食飲水。隨機(jī)分為4組，每組 8只對照組：腹腔注射生理鹽水2 mL； PL組：鹽酸戊乙奎醚0.64 mg/kg；PM組：鹽酸戊乙奎醚1.28 mg/kg；PH組：鹽酸戊乙奎醚2.56 mg/kg。

1.2 水迷宮測試

于停藥后1 d開始行Morris水迷宮測試，記錄大鼠進(jìn)入水中到站到隱蔽平臺的時間（即潛伏期）和總游泳距離，連續(xù)測試3 d。

1.3 大鼠海馬取材

第3天水迷宮測試后，麻醉大鼠，剪開胸腔看到搏動的心臟，經(jīng)心尖將導(dǎo)管插入主動脈內(nèi)，固定后剪開右心耳，先以生理鹽水快速沖洗至沒有血液流出，再用4℃ 4%的多聚甲醛灌注，斷頭剝離腦組織，10%的多聚甲醛中固定，組織經(jīng)洗滌脫水透明浸蠟包埋成蠟塊，石蠟切片機(jī)切片，片厚5 μm。

1.4 海馬膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶（ChAT）的測定

用免疫組化SP法測定海馬膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶（ChAT）的表達(dá)，免疫組化結(jié)果為細(xì)胞質(zhì)內(nèi)或核膜上出現(xiàn)棕黃色顆粒者為陽性細(xì)胞； 采用計算機(jī)圖像系統(tǒng)分析攝片，測出各組陽性細(xì)胞個數(shù)。

1.5 統(tǒng)計學(xué)分析

采用SPSS 18.0統(tǒng)計分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析， 計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，定位航行實驗數(shù)據(jù)采用重復(fù)測量資料的方差分析，免疫組化數(shù)據(jù)采用單因素方差分析，P < 0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Morris水迷宮測試結(jié)果

4組第3天潛伏期及游泳距離均較第1天縮短（P < 0.05）； PM組和PH組水迷宮第2天及第3天潛伏期及游泳距離較NS組顯著延長（P < 0.05）.見表1～2。PL組3天潛伏期和游泳距離與NS組無明顯差異（P﹥0.05）。

表1 各組平均潛伏期的比較（x±s，n = 8，s）

注：與第1天比較具有統(tǒng)計學(xué)意義（★P < 0.05 ），與NS組比較具有統(tǒng)計學(xué)意義（■P < 0.05）

表2 各組游泳距離的比較（x±s，mm，n = 8）

注：與第l天比較具有統(tǒng)計學(xué)意義（★P < 0.05）；與NS組比較具有統(tǒng)計學(xué)意義（■P < 0.05）

2.2 海馬ChAT表達(dá)的比較

PM組和PH組海馬ChAT表達(dá)較NS組顯著減少（P < 0.05）， 而PL組與 NS組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.05）。見表3。

3討論

在本實驗中，低劑量（0.64 mg/kg）的鹽酸戊乙奎醚在水迷宮測試和免疫組化海馬ChAT陽性細(xì)胞表達(dá)方面明顯優(yōu)于中（1.28 mg/kg）、高（2.56 mg/kg）劑量組。表明低劑量的鹽酸戊乙奎醚在老年人的術(shù)后認(rèn)知方面有著良好作用。本實驗鹽酸戊乙奎醚用量分別是0.64 mg/kg、1.28 mg/kg和2.56 mg/kg， 相當(dāng)于人的給藥劑量0.02 mg/kg、 0.04 mg/kg和0.08 mg/kg[4]（臨床常規(guī)用量）。

中樞膽堿能通路是學(xué)習(xí)、記憶功能的主要通路。海馬是腦內(nèi)具有學(xué)習(xí)和記憶功能的重要結(jié)構(gòu)，尤其海馬M—R的含量與學(xué)習(xí)、記憶功能密切相關(guān)。鹽酸戊乙奎醚作為老年患者術(shù)前用藥，有其突出的優(yōu)勢[5]，主要作用于M1、M3受體， 而對M2受體的作用較弱或不明顯，有效地避免了心率增快導(dǎo)致的心肌耗氧增加、術(shù)后尿潴留、腸麻痹等不良反應(yīng)的發(fā)生[6]。水迷宮試驗是公認(rèn)的判斷大鼠認(rèn)知功能的方法之一。本實驗PL組水迷宮測試結(jié)果明顯優(yōu)于PM組和PH組。ChAT活性降低和AChE活性升高，常作為POCD的發(fā)病機(jī)制。PL組海馬ChAT表達(dá)明顯多于PM組和PH組，從而推斷高劑量的鹽酸戊乙奎醚相對于低劑量POCD的發(fā)生率高。這與隨著年齡增長特別是藥物劑量的增加，中樞對抗膽堿藥物愈加敏感，使老年人的術(shù)后認(rèn)知功能更易受術(shù)前用藥的影響相符[3]?？傊骨恢貜?fù)注射較大劑量鹽酸戊乙奎醚對大鼠的認(rèn)知功能有明顯損害作用，而小劑量的則無明顯損害作用，從而為臨床老年用藥提供參考。

[參考文獻(xiàn)]

[1]Ontl T，Xing Y，Bai L，et al. Development and aging of N—methyl—D—aspartate receptor expression in the prefrontal/frontal cortex of mice[J]. Neuroscience，2004，123（2）：467—479.

[2]楊藻宸. 藥理學(xué)和藥物治療學(xué)[M]. 北京：人民衛(wèi)生出版社，1994：355—365.

[3]Kratz CD，Schleppers A，Iber T，et al. Pharmacological peculiarities andproblems with older patients[J]. Anaesthesist，2005，54（5）：467—475.

[4]Lucassen PJ，Vollmann— Honsdorf GK Gleisberg M，et al. Chronic psychosocial stress differentially affects apoptosis inhippoccampus subregions and cortex of theadult tree shrew[J]. Eur J Neur，2001，14（1）：161—166.

[5]彭惠，趙德錄. 8種抗膽堿藥對中樞M受體亞型的選擇性研究[M]. 北京：軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)出版社，1989：101.

[6]段世明. 麻醉藥理學(xué)[M]. 北京：人民衛(wèi)生出版社，2001：141.

（收稿日期：2012—07—10）