日前，在液體乳產(chǎn)品中發(fā)現(xiàn)黃曲霉毒素M，超標(biāo)，引發(fā)公眾廣泛關(guān)注。ABSCIEX公司一直致力于為客戶(hù)提供全方位的解決方案，在事件爆發(fā)的第時(shí)間建立并向客戶(hù)提供測(cè)定黃曲霉毒素的整體解決方案。

黃曲霉毒素檢測(cè)常見(jiàn)的方法為經(jīng)免疫親和柱凈化后，采用HPLC(高效液相色譜法)、TLC(薄層層析法)、LCMS／MS(液質(zhì)聯(lián)用)及ELISA(酶聯(lián)免疫)法檢測(cè)。其中ELISA法使用較為普遍，但因其定量不準(zhǔn)確，只能作為陽(yáng)性樣品的初篩工具；LC Ms／MS檢測(cè)方法具有靈敏度高，快速、準(zhǔn)確等特點(diǎn)，適用于乳制品中黃曲霉毒素的檢測(cè)，被廣泛應(yīng)用于食品安全檢測(cè)。AB SCIEX公司就是用高效液相串聯(lián)質(zhì)譜法建立的黃曲霉毒素整體解決方案——iMethod^TM。

樣品前處理方法

1提取方法

(1)乳

稱(chēng)取50.00g(精確至0.01g)混勻的試樣，置于50mL具塞離心管中，在水浴中加熱到35-37℃。在6000r／下離心15min。收集全部上清液，供凈化用。

(2)發(fā)酵乳(包括固體狀、半固體狀和帶果肉型)

稱(chēng)取50.00g(精確至0.01g)混勻的試樣，用0.5mol／L的氫氧化鈉溶液在酸度計(jì)指示下調(diào)pH值至7.4，在9500r／rain下勻漿5min，在水浴中加熱到35-37℃。在6000r／min下離心15min。收集全部上清液，供凈化用。

(3)乳粉和粉狀嬰幼兒配方食品

稱(chēng)取10.00g(精確至0.01g)試樣，置于250mL燒杯中。將50mL已預(yù)熱到50℃的水加入到乳粉中，用玻璃棒將其混合均勻。如果乳粉仍未完全溶解，將燒杯置于50℃的水浴中放N30min。溶解后冷卻至20℃，移入100mL容量瓶中，用少量的水分次洗滌燒杯，洗滌液并移入容量瓶中，用水定容至刻度，搖勻后分別移至兩個(gè)50mL離心管中，在6000r／min下離心15min，混合上清液，用移液管移取50mL上清液供凈化處理用。

(4)干酪

稱(chēng)取經(jīng)切細(xì)、過(guò)10目圓孔篩混勻的試樣5.00g(精確至0.01g)，置于50mL離心管中，加2mL水和30mL甲醇，在9500r／min i,勻漿5min，超聲提取30min，在6000／min下離心1 5min。收集上清液并移入25 0m L分液漏斗中。在分液漏斗中加／X30mL石油醚，振搖2min，待分層后，將下層移于50mL燒杯中，棄去石油醚層。重復(fù)用石油醚提取2次。將下層溶液移到100mL圓底燒瓶中，減壓濃縮至約2mL，濃縮液倒入離心管中，燒瓶用乙腈+Tic溶液(1+4)5mL分2次洗滌，洗滌液并倒入50mL離心管中，加水稀釋至約50mL，在6000轉(zhuǎn)／mm b離心5min，上清液供凈化處理。

(5)奶油

稱(chēng)取5.00g(精確至0.01g)試樣，置于50mL燒杯中，用20mLC油醚將其溶解并移于250mL具塞錐形瓶中。加20mL水和30mL甲醇，振蕩30min后，將全部液體移于分液漏斗中，待分層后，將下層溶液全部移到100mL圓底燒瓶中，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中減壓濃縮至約5mL，加水稀釋至約50mL，供凈化處理。

2凈化方法

(1)免疫親和柱的準(zhǔn)備

將次性的50mL注射器筒與親和柱上頂部相串聯(lián)，再將親和柱與固相萃取裝置連接起來(lái)。

(2)試樣的純化

將上述樣品提取液移至50mL注射器筒中，調(diào)節(jié)固相萃取裝置的真空系統(tǒng)，控制試樣以2-3mL／miD穩(wěn)定的流速過(guò)柱。取下50mL的注射器筒，裝上10mL注射器筒。注射器筒內(nèi)加入水，以穩(wěn)定的流速洗柱，然后抽干親和柱。脫開(kāi)真空系統(tǒng)，在親和柱下部放入10mL刻度試管，上部裝上另一個(gè)10mL注射器筒，加入4mL乙腈，洗脫待測(cè)物，洗脫液收集在刻度試管中，洗脫時(shí)間不少于60秒。然后用氮?dú)饩従彽卦?0℃下將洗脫液蒸發(fā)至近干(如果蒸發(fā)至干，會(huì)損失待測(cè)物)，用乙腈+水溶液(1+9)稀釋至1mL。

LC—MS／MS儀器條件

1液相色譜參數(shù)

色譜柱：Phenomenex Luna PFP(2)3um，100A，50mm×2.0mm；

柱溫：28℃：

流動(dòng)相：含0.1％甲酸，甲醇／5mM乙酸銨水溶液(60：40)；

流速：0.4mL／min：

進(jìn)樣量：10uL

運(yùn)行時(shí)問(wèn)：3min。

2質(zhì)譜參數(shù)

以API 3200為例的質(zhì)譜參數(shù)如表所示，具體參數(shù)和檢測(cè)靈敏度視儀器不同而有所差異。

離子源參數(shù)

CUR：20psi：lS：5500V：TEM：425℃：GS：30psi；GS2：60psi；Ihe：On；CAD：High。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

黃曲霉毒素B₁、B₂、G₁、G₂和M₁提取離子流圖如圖1所示。

結(jié)論

AB SCEIX公司提供的仝方位解決方案iMethod_TM可同時(shí)測(cè)定乳及乳制品中B₁、B₂、G₁、G₂和M₁共5種黃曲霉毒素。iMethodTM不僅能夠?yàn)槟峁┛焖俚姆椒◤亩鴾p少方法開(kāi)發(fā)需要的時(shí)問(wèn)，擁有了可立快Cliquid軟件，您就可以用一種簡(jiǎn)化的四步法工作流程選擇試驗(yàn)、建立樣品表單、選擇報(bào)告模版和運(yùn)行試驗(yàn)。這四步法工作流程極為簡(jiǎn)單，即使是沒(méi)有質(zhì)譜操作經(jīng)驗(yàn)的人員也能夠很快掌握。AB SCIEX公司免費(fèi)提供用于測(cè)定黃曲霉毒素的iMethodTM，在cliquid~軟件中安裝后便可直接使用。