Phu Duong

安捷倫ZORBAX超高壓快速高分離度（RRHD）寬孔徑300A色譜柱是進(jìn)行蛋白質(zhì)級結(jié)構(gòu)分析的最佳選擇，能夠有效進(jìn)行蛋白質(zhì)鑒定、翻譯后修飾定量，在生物治療用蛋白的研發(fā)及生產(chǎn)應(yīng)用中還有助于獲得雜質(zhì)的指紋圖譜。

現(xiàn)在，安捷倫又增加了多種新的ZORBAX色譜柱固定相，為廣大用戶提供更多的選擇來優(yōu)化整體結(jié)果。與安捷倫3.5μm和5μm300A色譜柱一樣，新型C18、C8和C3色譜柱也使用StableBond固定相。此外，新型ZORBAX寬孔徑300A二苯基固定相色譜柱使用安捷倫PursultXRs100A和200A色譜柱采用的二苯基固定相。

C18固定相采用反相填料，用于肽片段分析中的重要應(yīng)用，例如從蛋白質(zhì)酶解物到小分子蛋白質(zhì)分析。C8固定相分析大分子蛋白質(zhì)（包括抗體）時具有較高的分離度和回收率。C3固定相能夠?yàn)檩^大分子疏水性蛋白質(zhì)（包括單克隆抗體MAb）分離提供更多選擇性和更好的峰形，回收率也更高。而二苯基固定相通過與MAb和芳香族氨基酸的pi-Pi相互作用為您帶來更多選擇性。

下圖顯示了安捷倫ZORBAXRRHD生物色譜柱系列的部分應(yīng)用。圖1-4顯示了4種色譜柱在不到2分鐘的時間里極好地分離了蛋白質(zhì)和降解產(chǎn)物。C18和二苯基固定相的色譜圖包含了色譜柱的選擇性，圖5對兩者的性能進(jìn)行了比較。與C18柱相比，二苯基柱的分離度更好。表1還列出了C18柱和二苯基柱的一些性能參數(shù)。

最大程度優(yōu)化分析結(jié)果

將目光移向ZORBAX生物色譜柱系列，客戶便可輕松找到最適合特定應(yīng)用的色譜柱。該系列色譜柱采用久經(jīng)驗(yàn)證的StableBond技術(shù)，該技術(shù)在低pH環(huán)境下具有良好的穩(wěn)定性，使用三氟乙酸或甲酸流動相改性劑分離蛋白質(zhì)和多肽時也能得到對稱峰形，絲毫無損色譜柱壽命。在紫外和質(zhì)譜檢測下都能獲得穩(wěn)定的基線。這些新型色譜柱的柱效得到極大的提高，進(jìn)一步改善了分離度，并且能夠更可靠地定量翻譯后修飾。

色譜柱的包裝工藝也經(jīng)過優(yōu)化，用于安捷倫1290Infinity液相色譜時最高耐壓1200bar。安捷倫ZORBAXRRHD300A1.8μm色譜柱有50mm和100mm兩種長度規(guī)格用于快速分離和高分離度分析，對于大多數(shù)復(fù)雜樣品都能實(shí)現(xiàn)真正的高分離度分離。這些色譜柱在分析蛋白質(zhì)時具有UHPLC性能的所有優(yōu)勢，不僅能提高效率，還能使客戶對所有結(jié)果都信心百倍。下面是關(guān)于如何選擇適合的安捷倫ZORBAX色譜柱來重現(xiàn)良好的蛋白質(zhì)分離并提高所有分析結(jié)果準(zhǔn)確度的介紹。

色譜條件分析

1安捷倫ZORBAXRRHD300SB-63色譜柱色譜條件

樣品：核糖核酸酶A、細(xì)胞色素C和溶菌酶（3mg／mL）；

進(jìn)樣量：1μL：

流動相A：A含0.1％TFA的蒸餾水溶液，B含0.01％TFA的乙腈溶液：

梯度：0-2.5minB從10％增加到70％；

流速：1mL／min（-700bar）：

HPLC儀器：1290Infinity系列；

檢測：紫外，280nm。

2安捷倫ZORBAXRRHD300SB-C8色譜柱色譜條件

樣品：核糖核酸酶A。細(xì)胞色素C和溶菌酶（3mg／mL）；

進(jìn)樣量：1μL：

流動相A：A含0.1％TFA的蒸餾水溶液，B含0.01％TFA的乙腈溶液；

梯度：0-2.5minB從10％增加到70％；

流速：1mL／min（-700bar）：

HPLC儀器：1290Infinity系列；

檢測：紫外，280nm。

3安捷倫ZORBAXRRHD300SB-C18色譜柱色譜條件

樣品：核糖核酸酶A、細(xì)胞色素C和溶菌酶（3mg／mL）：

進(jìn)樣量：1μL：

流動相A：A含0.1％TFA的蒸餾水溶液，B含0.01％TFA的乙腈溶液；

梯度：0-2.5minB從10％增加到70％；

流速：1mL／min（-700bar）；

HPLC儀器：1290Infinity系列：

檢測：紫外，280nm。

4安捷倫ZORBAXRRBD30-Diphenyl色譜柱色譜條件

樣品：核糖核酸酶A、細(xì)胞色素c和溶菌酶（3mg／mL）；

進(jìn)樣量：1μL

流動相A：A含0.1％TFA的蒸餾水溶液，B含0.01％TFA的乙腈溶液；

梯度：0-2.5minB從10％增加到70％：

流速：1mL／min（-700bar）；

HPLC儀器：1290Infinity系列：

檢測：紫外，280nm。

5安捷倫ZORBAX

RRHD

300SB-C18和300-Diphenyl色譜柱色譜條件

樣品：核糖核酸酶A、細(xì)胞色素c和溶菌酶（3mg／mL）；

進(jìn)樣量：1μL：

流動相A：A含0.1％TFA的蒸餾水溶液，B含0.01％TFA的乙腈溶液；

梯度：0-2.5minB從10％增加到70％：

流速：1mL／min（-700bar）：

HPLC儀器：1290Infinity系列：

檢測：紫外，280nm。