歐喜燕，于秀華

(長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，吉林 長(zhǎng)春 130021)

隨著現(xiàn)代社會(huì)人口素質(zhì)的提高，婦女對(duì)年輕化的追求越來(lái)越迫切，皮膚護(hù)理產(chǎn)品銷售的潛在市場(chǎng)日益擴(kuò)大?；瘖y品行業(yè)已經(jīng)進(jìn)入了一個(gè)新的時(shí)代，或者至少進(jìn)入了化妝品研發(fā)領(lǐng)域的新階段。傳統(tǒng)中醫(yī)藥由于毒副作用小，效果顯著，在護(hù)膚品中具有不可替代的作用。研究開(kāi)發(fā)中藥護(hù)膚品不僅可以滿足不斷擴(kuò)大的市場(chǎng)需求，對(duì)傳統(tǒng)中醫(yī)藥的開(kāi)發(fā)也具有重大的意義。本研究主要通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)，從酪氨酸酶活性抑制方面觀察白芷美白液對(duì)皮膚美白祛斑的功能。

1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器

1.1 實(shí)驗(yàn)藥品 白芷美白液：由長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院實(shí)驗(yàn)中心提供；酪氨酸酶：購(gòu)自美國(guó)Worthing-ton公司，2.5萬(wàn)u/25 mg，批號(hào)：20110601；磷酸氫二鈉：購(gòu)自北京化工廠，500 g/瓶，批號(hào):20100203；磷酸二氫鈉：購(gòu)自北京化工廠，500 g/瓶，批號(hào):20100203。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器 恒溫箱：型號(hào)：GZX-9146MBE，上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠；紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)：型號(hào)：Lambda25，美國(guó)Perkin Elmer公司產(chǎn)品。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 白芷美白液制備方法 白芷2 000 g，加6倍水，浸泡4 h，蒸餾4 h，收集蒸餾液，分離得到揮發(fā)油；餾液濃縮至950 mL,加入揮發(fā)油和適量賦形劑，加水制成1 000 mL,即得。

2.2 白芷美白液抑制酪氨酸酶的實(shí)驗(yàn) 采用蘑菇酪氨酸酶多巴速率氧化法[1]稍加修改進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。白芷美白液給藥組反應(yīng)混合物2 mL：0.1 M pH 6.8 PBS0.9 mL加不同濃度的白芷美白液1 mL加0.03%酪氨酸0.1 mL。37 ℃的恒溫箱孵育10 min,加0.1 mL的酪氨酸酶(350 u/mL)水溶液，將溶液混合均勻，置于37 ℃的恒溫箱中反應(yīng)25 min后,用分光光度計(jì)于475 mm測(cè)定吸光度值(A)；空白組處理以等體積的PBS代替酪氨酸酶溶液，用分光光度計(jì)于475 mm測(cè)定吸光度值(B)；對(duì)照組以等體積的蒸餾水代替白芷美白液,用分光光度計(jì)于475 mm測(cè)定吸光度值(C)；總空白組以等體積的蒸餾水代替白芷美白液，并以等體積的PBS代替酪氨酸酶溶液,用分光光度計(jì)于475 mm測(cè)定吸光度值(D)。0.1 M pH 6.8 PBS按照2005版《中國(guó)藥典》配制。白芷美白液分為50%、80%、100%、200% 4個(gè)濃度。同時(shí)，以熊果苷(10 mg/mL)作為陽(yáng)性對(duì)照組。每個(gè)濃度白芷美白液實(shí)驗(yàn)均重復(fù)10次。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

不同濃度的白芷美白液對(duì)酪氨酸酶活性抑制作用，見(jiàn)表1。

表1 不同濃度的白芷美白液對(duì)酪氨酸酶活性抑制作用(±s)

4 討論

皮膚黑素形成是一個(gè)十分復(fù)雜的過(guò)程，在皮膚黑素的形成過(guò)程中由于受到紫外線、遺傳、內(nèi)分泌、炎癥介質(zhì)、飲食不當(dāng)?shù)纫蛩氐挠绊?，色素代謝異常，皮膚黑素過(guò)快增長(zhǎng)和分布不均，就會(huì)造成局部皮膚過(guò)黑及色素沉著，表現(xiàn)為黃褐斑、雀斑和炎癥后色素沉著等。酪氨酸酶為含Cu離子的氧化酶，其普遍存在于哺乳動(dòng)物、植物和微生物中，主要參與生物體內(nèi)黑色素和其他多酚類物質(zhì)的形成過(guò)程，是生物體合成黑色素的關(guān)鍵酶，酪氨酸酶抑制劑就是通過(guò)抑制酪氨酸酶活性從而抑制黑色素生成,因而可用來(lái)預(yù)防和治療色素沉著等[2]。

白芷，《神農(nóng)本草經(jīng)》謂其“長(zhǎng)肌膚，潤(rùn)澤，可作面脂”；《本草經(jīng)百種錄》提到“白芷極香，能驅(qū)風(fēng)燥濕，其質(zhì)又極滑，能和利血脈，而不枯耗，用之則有利而無(wú)害”。其含有易揮發(fā)成分，這些易揮發(fā)成分具有活血化瘀的作用，能使攣縮的微動(dòng)脈和毛細(xì)血管得以恢復(fù)，血流速度加快，血流量顯著增多，有效地改善微循環(huán)，可以維持皮膚的生態(tài)平衡，能有效地延緩皮膚色素沉著。近年來(lái)有報(bào)道[3-6]提出白芷提取物對(duì)黑色素有顯著的抑制作用。

本研究通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)觀察了白芷美白液對(duì)酪氨酸酶活性的抑制作用，結(jié)果表明不同濃度的白芷美白液對(duì)酪氨酸酶活性均有抑制作用,從50%～100%濃度的白芷美白液有顯著的量效關(guān)系，而100%濃度以上量效關(guān)系消失。證實(shí)白芷美白液具有確切的美白祛斑功效。本研究?jī)H通過(guò)觀察白芷美白液對(duì)酪氨酸酶活性的抑制實(shí)驗(yàn)闡述其對(duì)皮膚色素沉著的改善作用，至于其是否有其他改善皮膚狀態(tài)的途徑，還有待于進(jìn)一步研究。

[1]高瑞英,黨志,鄒穎楠,等.當(dāng)歸提取物抗皮膚衰老及美白功效體外實(shí)驗(yàn)研究[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2010,21(4):874-875.

[2]劉錚,肖艷,鄧燕.中藥對(duì)黑素細(xì)胞及酪氨酸酶雙向調(diào)節(jié)作用的研究進(jìn)展[J].新中醫(yī),2008,40(4):117-118.

[3]唐海誼,何冠邦,周喜林.美白中藥之水及乙醇提取物對(duì)酪氨酸酶抑制功效之比較[J].中國(guó)藥學(xué)雜志,2005,40(5):342-343.

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[6]楊健,金洪鍵.四白美白面膜對(duì)家兔皮膚微血管血流量的影響[J].長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2009,25(6):828-829.