劉春曉

天津市安定醫(yī)院，天津 300222

1 丹參主要成分——丹參酮

1.1 丹參酮基本概況

唇型科植物丹參 (Salvia miltiorrhiza Bge)為鼠尾草屬植物，中國(guó)有78種、24變種和8個(gè)型，具有廣泛和較高價(jià)值的藥理活性。丹參始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品，性微寒，味苦，具有活血祛瘀、清熱涼血、清心除煩、養(yǎng)神定志、通利關(guān)脈等作用。

圖1—1 丹參

丹參的脂溶性有效成分丹參酮ⅡA屬鄰醌結(jié)構(gòu)由于難溶于水，其藥物的應(yīng)用和藥效的發(fā)揮受到了很大的限制。近年來，丹參酮在作用機(jī)制、臨床制劑和臨床應(yīng)用等方面的研究均取得了較大的進(jìn)展。在丹參酮制劑的研究方面，也取得了較好的成績(jī)。

1.2 丹參酮的理化性質(zhì)

丹參的化學(xué)成分主要有兩大類:脂溶性的丹參酮類化合物和水溶性的酚酸類化合物［1－2］。丹參酮IIA是丹參根部經(jīng)醇提而得的脂溶性成分，純品為紅色針狀結(jié)晶。

丹參酮IIA含有醌型結(jié)構(gòu)，易被氧化還原，受熱易分解，損失的程度隨溫度的升高和時(shí)間的延長(zhǎng)而增加，因此應(yīng)選用低溫干燥等方法進(jìn)行干燥。丹參酮IIA，在溶液中對(duì)光極敏感，會(huì)發(fā)生光化反應(yīng)，生成多種產(chǎn)物。濕熱也能使丹參酮 IIA開環(huán)，發(fā)生一系列的化學(xué)變化。［3］

2 丹參酮提取工藝

2.1 提取分離工藝的研究

2.1.1 超聲法特點(diǎn)

通過超聲波提取目標(biāo)產(chǎn)物具有快速、常溫、能耗低、提取率調(diào)味等特點(diǎn)。應(yīng)用超聲波提取法操作方便，提取時(shí)間短，提取率高，節(jié)能、節(jié)約藥材，一般無需加熱，具有很多常規(guī)提取方法無法比擬的優(yōu)點(diǎn)。

2.1.2 提取工藝

根據(jù)參考文獻(xiàn)［4－5］與超臨界CO2流體萃取法，加熱回流提取法，浸漬 (常溫浸漬、煎煮等)提取法相比，丹參酮IIA的最佳提取方法為超聲提取。

2.1.2.1 原料的預(yù)處理

將丹參根經(jīng)多功能食品加工機(jī)粉碎得到丹參顆粒，過40目篩，得到丹參粉末待下一步提取。

2.1.2.2 丹參酮IIA的提取

取丹參粉末50g，放入圓底燒瓶，以95%乙醇作為提取溶劑，放入超聲波清洗器中，40℃提取兩次，每次用8倍量溶劑，提取30min。兩次提取后一并抽濾，收集濾液，經(jīng)40℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得丹參浸膏，回收乙醇。

2.2 丹參酮分離純化方法

2.2.1 丹參酮的分離純化研究狀況

1976年，房其年等從丹參根粉中性部分得到丹參酮I、隱丹參酮、丹參酮IIA和丹參酮IIB等［6］。

延續(xù)至今，所有研究人員對(duì)丹參脂溶性化學(xué)成分的提取分離使用的固定相主要有兩種:硅膠［7］和氧化鋁［8］，但是分離丹參酮多數(shù)用硅膠作固定相。

2.2.2 吸附柱色譜原理

吸附色譜法的三要素是吸附劑、溶劑 (展開劑、洗脫劑)、被分離物質(zhì)，三者之間相互聯(lián)系又相互制約，處理好三者的關(guān)系是分離成敗的關(guān)鍵。

2.2.3 裝柱與上樣

裝柱有干法裝柱與濕法裝柱兩種。同樣加樣也有干法加樣 (拌樣加樣法)和溶液加樣法。本實(shí)驗(yàn)采用濕法裝柱和拌樣加樣。

2.2.4 洗脫梯度的選擇

用硅膠、氧化鋁等極性吸附劑進(jìn)行吸附柱色譜操作，采用逐步提高洗脫劑的洗脫能力 (極性)來達(dá)到分離不同極性成分的目的。

起始洗脫劑的選擇:

分別選用石油醚－乙酸乙酯=100:1和80:1、50:1、30:1作為展開劑，在253.7nm下點(diǎn)樣。

2.2.5 樣品收集

將各份洗脫液濃縮后用薄層色譜檢測(cè)，把成分相同的洗脫液合并，回收溶劑，得到單體。如為數(shù)個(gè)成分的混合物，可再進(jìn)一步用柱色譜法或其它方法進(jìn)一步分離純化。將用不同比例洗脫的收集液分別用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器蒸干，收集樣品。

3 含量測(cè)定

3.1 色譜條件

色譜柱:Diamonsi1TM C18色譜柱 (200 mm×4.6 mm，5μm，迪馬公司);流動(dòng)相:甲醇－水 (85:15);流速:1.0ml/min;檢測(cè)波長(zhǎng):270nm;柱溫:30℃;進(jìn)樣量:20μl。

3.2 色譜行為

標(biāo)準(zhǔn)品 精密稱取干燥丹參酮IIA標(biāo)準(zhǔn)品2mg，用流動(dòng)相溶解，并用流動(dòng)相定容至5ml容量瓶中備用。

樣品 精密稱取柱層析分離的丹參酮IIA粗品2mg，用流動(dòng)相溶解，并用流動(dòng)相定容至5ml容量瓶中備用。

3.3 最大吸收波長(zhǎng)的測(cè)定

稱取干燥至恒重的丹參酮IIA樣品適量，以甲醇為溶劑，并稀釋為適當(dāng)濃度，容量瓶中定容，以甲醇為空白，在200－350 nm范圍內(nèi)掃描。丹參酮IIA在溶液中的紫外吸收最大吸收峰為270 nm，即為最大吸收波長(zhǎng)。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典 (一部)［S］.化學(xué)工業(yè)出版社，2005:57.

［2］楊云，張晶，陳不婷.天然藥物化學(xué)成分提取分離手冊(cè)［M］.中國(guó)中醫(yī)藥出版社，2003:143－145.

［3］蘇子仁、劉中秋、周華.丹參醇提液在濃縮、干燥工藝過程中的化學(xué)成分變化研究 (Ⅰ)——丹參酮ⅡA濕熱降解機(jī)理探討［J］.中成藥，1997，19(11):5－6.