楊衛(wèi)振，脫紅芳，彭彥輝

(河北省人民醫(yī)院，石家莊050051)

急性胰腺炎(AP)是一種起病急、進(jìn)展快、病情重、可涉及全身各個臟器組織的急腹癥。在AP發(fā)病機(jī)制中，促炎因子和抗炎因子失衡理論逐漸被重視。干預(yù)AP時信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中關(guān)鍵細(xì)胞因子的調(diào)控，遏制觸發(fā)炎癥介質(zhì)的“瀑布樣級聯(lián)反應(yīng)”，達(dá)到抑制AP進(jìn)展的治療新方法正被關(guān)注。目前針對AP實驗室治療研究的細(xì)胞因子包括TNF-α、IL-6、ICAM-1等。本文就分子生物學(xué)中研究熱點的幾種細(xì)胞因子與AP的關(guān)系予以綜述。

1 核因子(NF-κB)

1.1 NF-κB簡介 NF-κB是一種能與免疫球蛋白κ輕鏈基因增強(qiáng)子κB序列(GGGACTTTC)特異結(jié)合的核蛋白因子。它是由Rel家族構(gòu)成的二聚體蛋白，具有1個由300個氨基末端組成的Rel同源結(jié)構(gòu)域。靜息狀態(tài)下NF-κB蛋白分子中Rel功能區(qū)與其抑制蛋白IκB的5～7個錨蛋白重復(fù)序列結(jié)合形成無活性的三聚體，以抑制NF-κB分子由胞質(zhì)向核移位。當(dāng)受到外界因素刺激時，IκB磷酸化，通過迅速激活泛素—蛋白酶體途徑，暴露出NLS和DNA結(jié)合位點，激活NF-κB的核定位信號，發(fā)生核易位，引起相應(yīng)基因的轉(zhuǎn)錄［1］。

1.2 NF-κB與AP的關(guān)系 NF-κB是廣泛存在于人體多種細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄因子，是多種細(xì)胞因子、化學(xué)趨化因子、黏附分子、生長因子和免疫受體等基因表達(dá)的樞紐，也是參與機(jī)體免疫炎癥反應(yīng)的快速反應(yīng)因子，在AP發(fā)病機(jī)制學(xué)說中起重要作用。Meng等［2］在大鼠AP模型中觀察到，建立模型后NF-κB主要在胰腺腺泡細(xì)胞的胞質(zhì)表達(dá)，3 h時出現(xiàn)表達(dá)高峰，指出NF-κB高表達(dá)在誘發(fā)AP反應(yīng)中作用明顯。Chen等［3］采用腺病毒作為載體，使NF-κB活性亞單位ReL/P65的基因與腺病毒的DNA片段進(jìn)行整合，并通過胰管注射注入胰腺，NF-κB目的基因在胰腺內(nèi)表達(dá)，產(chǎn)生大量活化的NF-κB，對照組未出現(xiàn)上述改變。

1.3 NF-κB治療實驗研究 實驗中對NF-κB通道的控制可采取兩種方法［4］:①通過藥物或特異抗體拮抗相關(guān)因子;②通過基因操作的方法建立相關(guān)因子不表達(dá)或受體不表達(dá)。治療藥物主要包括IκB激酶(IKK)抑制劑、P38MAP抑制劑、抗氧化劑、蛋白酶體抑制劑、糖皮質(zhì)激素、非甾體類抗炎藥物等?；蛑委熤饕ㄖ苯拥幕蜣D(zhuǎn)移、反義核因子寡核苷酸和核因子圈套寡聚脫氧核苷酸、RNA干擾等。上述治療方法通過不同途徑抑制NF-κB活化，阻斷炎癥信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，降低炎性介質(zhì)和炎性因子釋放，從而減輕實驗中AP的病情進(jìn)展。NF-κB可作為AP有價值的治療靶點。

2 腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子(TRAF6)

2.1 TRAF6簡介 TRAF6是TNF超家族和Toll樣/IL-1受體(TIR)超家族重要的接頭分子。家族中包括7個密切相關(guān)的蛋白，其中TRAF6由530個氨基酸組成。LRs的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中，TLR4與MyD88相互作用誘導(dǎo)IL-1受體相關(guān)激酶(IRAK)磷酸化，IRAK脫離MyD88與TRAF6結(jié)合后活化轉(zhuǎn)化生長因子B激酶1(TAK1)，進(jìn)一步活化NF-κB激酶(NIK)，NIK再激活I(lǐng)KK復(fù)合體，使IκB泛素化而被降解，致使IκB與NF-κB解離，NF-κB遷移到胞核內(nèi)，導(dǎo)致一系列特定基因的表達(dá)，從而產(chǎn)生原發(fā)性致炎因子(TNF-α、IL-1等)，完成炎癥的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程［5］。

2.2 TRAF6與AP的關(guān)系 TRAF6是直接參與TNFR家族和IL-1R/TLR超家族信號傳導(dǎo)的信號銜接蛋白，在固有免疫和獲得性免疫、炎癥、組織內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定中發(fā)揮著重要作用。實驗采用TRAF6基因敲除小鼠模型中TLR2、TLR5、TLR7、TLR9受體在相應(yīng)病原體的刺激下不能激活NF-κB。Zhou等［6］研究發(fā)現(xiàn)，在小鼠AP時TRAF6在胰腺組織和肺組織上表達(dá)有先降后升的趨勢，并認(rèn)為TLR4-TRAF6通路參與了胰腺炎癥及胰腺炎相關(guān)的肺損傷，其機(jī)制可能是觸發(fā)了某些凋亡相關(guān)的信號通路。Lomaga等［7］發(fā)現(xiàn)TRAF6缺失小鼠明顯降低 LPS誘導(dǎo)的NF-κB和誘生型NO合成酶的活性，并導(dǎo)致IL-1和IL-18信號傳導(dǎo)障礙，使機(jī)體對LPS低反應(yīng)。有研究表明通過TRAF6基因沉默可顯著降低LPS誘導(dǎo)的c-Jun氨基末端激酶和I-KB磷酸化。

2.3 TRAF6治療實驗研究 Chen等［8］實驗研究發(fā)現(xiàn)，誘導(dǎo)性熱休克蛋白70作為TRAF6的C端結(jié)構(gòu)域結(jié)合，抑制其介導(dǎo)的NF-κB活化，以達(dá)到治療炎癥的目的。Chen等設(shè)計出與TRAF6的C端TRAF結(jié)構(gòu)域結(jié)合的干擾RNA，其抑制TRAF6蛋白表達(dá)，阻斷其介導(dǎo)的CD40和LI-1信號，從而減輕炎癥的發(fā)展。鑒于TRAF6能同時介導(dǎo)多條信號通路，因此有望通過拮抗TRAF6的表達(dá)來治療AP。

3 血小板活化因子(PAF)

3.1 PAF簡介 PAF是由血小板、中性粒細(xì)胞等多種細(xì)胞產(chǎn)生的具有強(qiáng)大生物學(xué)活性的磷脂類介質(zhì)，生理狀態(tài)下是以前體形式儲存在細(xì)胞膜內(nèi)，當(dāng)機(jī)體受到TNF、白三烯、內(nèi)毒素等炎性介質(zhì)刺激后，磷脂酶A2被激活、形成并釋放活性的PAF，與PAF受體結(jié)合，激活磷脂酰肌醇、細(xì)胞內(nèi)信使系統(tǒng)，相關(guān)蛋白激酶誘導(dǎo)絲氨酸、酪氨酸等發(fā)生磷酸化，傳遞信息從而發(fā)揮生物效應(yīng)［9］。

3.2 PAF與AP關(guān)系 PAF作為AP時最關(guān)鍵的強(qiáng)效脂質(zhì)性炎癥介質(zhì)，在加重胰腺微循環(huán)障礙、誘導(dǎo)胰腺持續(xù)缺血和壞死的同時，又在促進(jìn)急性炎癥反應(yīng)中發(fā)揮中心樞紐的作用［10］。在AP早期造模實驗中，胰腺損傷的程度與胰腺組織PAF-R mRNA表達(dá)水平一致。AP中PAF的作用機(jī)制［11］包括:活化血小板，使血小板黏附、聚集，形成血栓，由于胰腺動脈常為終末支，致使胰腺的血流灌注不足，加重胰腺微循環(huán)障礙，致胰腺缺血、壞死;與TNF、IL-6等細(xì)胞因子相互誘導(dǎo)合成及釋放，協(xié)同參與，使細(xì)胞因子間網(wǎng)絡(luò)調(diào)控紊亂，并激活炎性細(xì)胞，加重組織破壞;胰腺內(nèi)游離鈣水平升高，損傷胰腺細(xì)胞，加重胰腺外分泌及胰酶活化。

3.3 PAF治療實驗研究 新近的研究顯示PAF受體拮抗劑可有效抑制PAF在AP中的致病作用。銀杏苦內(nèi)酯B(BN52021)能拮抗PAF與其受體結(jié)合，使PAF不能通過G蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)激活效應(yīng)器酶，從而阻斷PAF受體信號轉(zhuǎn)導(dǎo)［12］。Pooran等［13］研究發(fā)現(xiàn)PAF拮抗劑BB-882在實驗性AP模型中可以顯著降低血清淀粉酶，并改善胰腺組織學(xué)評分，降低動物死亡率。在臨床試驗中BB-882顯著降低SAP患者的血清IL-6、IL-8水平，降低器官衰竭的發(fā)生率，改善SAP患者的住院時間。PAF與SAP有關(guān)的全身炎性反應(yīng)綜合征逆轉(zhuǎn)的結(jié)果令人鼓舞。

4 受體相互作用蛋白家族(RIP3)

4.1 RIP3簡介 RIPs是一類具有特異的絲氨酸/蘇氨酸激酶活性的蛋白。今發(fā)現(xiàn)RIP家族成員已有7種。它們在結(jié)構(gòu)上具有一段同源性較高的Ser/ Thr特異的保守激酶結(jié)構(gòu)域。RIP3廣泛表達(dá)于胚胎和大量的成熟組織中。它定位于人染色體14qll.2，是一個在腫瘤發(fā)生中多發(fā)基因突變的區(qū)域。體外激酶分析實驗表明，RIP3是一個會發(fā)生自磷酸化的激酶。

4.2 RIP3與AP關(guān)系 最新研究發(fā)現(xiàn)，RIP3作為TNF誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡與細(xì)胞壞死相互轉(zhuǎn)換的分子開關(guān)，RIP3是多種細(xì)胞壞死所必需的。王曉東等［14］利用高通量RNAi篩選技術(shù)鑒定了RIPK1的同家族蛋白RIP3是調(diào)控TNF-α誘導(dǎo)性細(xì)胞壞死的關(guān)鍵蛋白。并發(fā)現(xiàn)RIP3只在一些細(xì)胞中選擇性表達(dá)，其表達(dá)跟TNF-α誘導(dǎo)性細(xì)胞壞死密切相關(guān)。韓家淮等指出RIP3通過激活關(guān)鍵代謝酶的活性調(diào)節(jié)TNF介導(dǎo)的活性氧簇產(chǎn)量，活性氧簇能促進(jìn)RIP3誘導(dǎo)細(xì)胞壞死。揭示細(xì)胞能量代謝的調(diào)節(jié)會影響細(xì)胞選擇不同的死亡方式。指出RIP3表達(dá)量高細(xì)胞則走向壞死路徑，表達(dá)量低細(xì)胞則走向凋亡路徑。

細(xì)胞凋亡是一種正常的生理現(xiàn)象，而細(xì)胞壞死則是病理性變化。細(xì)胞壞死常引發(fā)組織急性炎癥。實驗研究發(fā)現(xiàn)胰腺腺泡細(xì)胞對損傷的反應(yīng)在評價疾病嚴(yán)重程度中起重要作用，可以通過誘導(dǎo)胰腺細(xì)胞凋亡的方法減少細(xì)胞壞死而治療AP。在雨蛙素誘導(dǎo)的小鼠AP模型中，RIP3基因敲除的鼠血清淀粉酶明顯降低，胰腺細(xì)胞的壞死顯著減少，有效降低了胰腺組織的損傷。

目前對RIP3的研究甚少，但通過對凋亡機(jī)制的進(jìn)一步研究，使人們更深入地了解了細(xì)胞壞死以及與細(xì)胞壞死相關(guān)疾病的病因，如果我們能夠有效抑制RIP3的活性，就能在一定程度上控制細(xì)胞死亡方式，對那些由細(xì)胞死亡導(dǎo)致的相關(guān)疾病就可能起到減輕或治療的作用。RIP3可成為AP的治療靶點。

5 結(jié)語與展望

限于當(dāng)前科學(xué)知識及技術(shù)的發(fā)展，在AP靶向治療的過程中存在許多問題:①對炎癥傳導(dǎo)通路中的關(guān)鍵性細(xì)胞因子生物學(xué)功能不完全了解;②對炎癥信號轉(zhuǎn)導(dǎo)各通路機(jī)制了解不夠透徹;③各個信號通路之間形成相互交叉、相互代償?shù)霓D(zhuǎn)導(dǎo)網(wǎng)絡(luò);④具體藥物的作用機(jī)制尚不明確，存在毒副作用。針對細(xì)胞因子靶向治療出現(xiàn)的問題，需以功能明確的特異性炎癥細(xì)胞分子作為靶點，進(jìn)行多靶點聯(lián)合治療，增加藥物的特異性和針對性，降低其毒副反應(yīng)，提高靶向治療的效率。目前單獨針對單靶點分子的治療效果不理想，且以細(xì)胞因子為靶點治療多處于動物實驗階段。相信隨著基礎(chǔ)研究的不斷深入，AP發(fā)病機(jī)制會逐漸明確，更多功能明確的特異性靶點分子被確定，分子靶向治療一定可以在不久的將來給AP治療帶來更多改變。

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