王 煒，李 芳，段國(guó)威，吳曉玲，宋 青

(1河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院，石家莊050000;2河北井陘縣醫(yī)院;3河北深澤縣醫(yī)院)

哮喘是由多種細(xì)胞和細(xì)胞組分共同參與的氣道慢性炎癥性疾病。近年來(lái)隨著對(duì)哮喘發(fā)病機(jī)制的深入研究，發(fā)現(xiàn)免疫耐受的破壞也是哮喘發(fā)病的重要環(huán)節(jié)［1］。調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞是一群能夠有效地調(diào)節(jié)或抑制其他免疫活性細(xì)胞功能，在誘導(dǎo)免疫耐受中發(fā)揮著重要作用的細(xì)胞［2］。調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞在多種免疫性疾病中發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)作用［3］。而目前有關(guān)誘導(dǎo)性調(diào)節(jié)性 T淋巴細(xì)胞(Foxp3+IL-10+)在哮喘兒童中的變化以及其與病情關(guān)系的研究尚無(wú)報(bào)道。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 根據(jù)2008年中華醫(yī)學(xué)會(huì)兒科學(xué)會(huì)呼吸學(xué)組制定的《兒童支氣管哮喘診斷與防治指南》中兒童支氣管哮喘的診斷標(biāo)準(zhǔn)，2009年7月～2010年12月，選擇80例對(duì)戶塵螨過(guò)敏(戶塵螨過(guò)敏原皮膚點(diǎn)刺試驗(yàn)陽(yáng)性，風(fēng)團(tuán)反應(yīng)范圍≥++)的中度支氣管哮喘患兒，按臨床表現(xiàn)分為急性期組和緩解期組，每組40例，兩組患兒在性別、年齡、病程、伴隨疾病、皮膚點(diǎn)刺試驗(yàn)結(jié)果的陽(yáng)性過(guò)敏原分布情況等方面均無(wú)差異。兩組患兒采血前4周內(nèi)未全身使用糖皮質(zhì)激素及其他免疫抑制劑，均未用過(guò)抗過(guò)敏藥物;均間斷應(yīng)用小至中等劑量的吸入型糖皮質(zhì)激素(布地奈德吸入劑)，必要時(shí)應(yīng)用β2受體激動(dòng)劑(硫酸沙丁胺醇吸入劑)，不合并使用長(zhǎng)效抗組胺及抗白三烯類藥物。同時(shí)選擇30例健康查體患兒作為對(duì)照組，此組患兒戶塵螨過(guò)敏原皮膚點(diǎn)刺實(shí)驗(yàn)陰性。急性期組男22例、女18例，年齡(8.26± 2.72)歲;緩解期組男23例、女17例，年齡(8.83± 2.64)歲;對(duì)照組男16例、女14例，年齡(8.52± 2.47)歲。3組在性別、年齡方面無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法 全部患兒及對(duì)照組均于清晨留取外周肝素鈉抗凝靜脈血3 mL，應(yīng)用淋巴細(xì)胞分離液分離外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)，用含10%小牛血清的完全RPMI 1640培養(yǎng)基調(diào)整淋巴細(xì)胞濃度為2 ×106/mL，接種于24孔細(xì)胞培養(yǎng)板內(nèi)，每孔1 mL，并給予戶塵螨浸出液20 μg/mL刺激后將PBMC于37℃ 5%CO2飽和濕度細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h。培養(yǎng)結(jié)束后按試劑盒說(shuō)明書處理標(biāo)本，經(jīng)FACSCantoⅡ流式細(xì)胞分析儀進(jìn)行檢測(cè)并分析。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，數(shù)據(jù)均采用±s表示。各組間比較采用Kruskal-Wallis H檢驗(yàn)和Nemenyi檢驗(yàn)。調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞水平和哮喘疾病嚴(yán)重程度相關(guān)性分析采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析。以P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.2 相關(guān)性分析 支氣管哮喘患兒誘導(dǎo)性調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞水平與病情呈負(fù)相關(guān)(r=－0.652，P＜0.01)。

3 討論

調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞是指既可天然產(chǎn)生又可以經(jīng)誘導(dǎo)而產(chǎn)生的具有免疫抑制功能的細(xì)胞亞群。它主要包括自然調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞(nTreg，F(xiàn)oxp3+IL-10－)、適應(yīng)性調(diào)節(jié) T淋巴細(xì)胞(iTreg、Tr1、Th3、T等)以及具有調(diào)節(jié)活性的固有類T細(xì)胞(自然殺傷性 T細(xì)胞、dgT淋巴細(xì)胞)等［4，5］。其中與免疫性疾病關(guān)系密切的主要有nT-reg、誘導(dǎo)性調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞(Foxp3+IL-10+)、Tr1細(xì)胞Foxp3－IL-10+)和Th3細(xì)胞()等。調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞主要通過(guò)分泌IL-10、TGF-β1等具有免疫抑制作用的細(xì)胞因子以及細(xì)胞—細(xì)胞直接接觸的抑制作用等多種機(jī)制發(fā)揮免疫抑制作用［6，7］。其中IL-10是主要的抑制性細(xì)胞因子，它可通過(guò)直接和間接機(jī)制明顯降低抗原特異性T細(xì)胞增殖［8］。IL-10可有效抑制IL-12的產(chǎn)生，而IL-12是Th1細(xì)胞分化的關(guān)鍵因子。IL-10還可阻止T細(xì)胞受體介導(dǎo)的細(xì)胞活化。以IL-10處理T細(xì)胞導(dǎo)致持久的抗原特異性T細(xì)胞無(wú)反應(yīng)，以抗CD3和CD28抗體重新刺激細(xì)胞不能逆轉(zhuǎn)IL-10誘導(dǎo)的T細(xì)胞無(wú)能，加入外源性的IL-2也不能逆轉(zhuǎn)IL-10誘導(dǎo)的T細(xì)胞無(wú)能。除了主動(dòng)抑制T細(xì)胞增殖，在特定條件下，IL-10可誘導(dǎo)Tr1的分化，人和小鼠細(xì)胞在IL-10存在時(shí)經(jīng)慢性活化可產(chǎn)生Tr1，增強(qiáng)Tr1的抑制作用?？梢?jiàn)IL-10是調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞發(fā)揮免疫抑制功能的主要細(xì)胞因子。而目前有關(guān)可分泌IL-10的誘導(dǎo)性調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞在哮喘兒童中的變化以及其與病情關(guān)系的研究尚無(wú)報(bào)道。

根據(jù)本研究結(jié)果，我們認(rèn)為誘導(dǎo)性調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞數(shù)目減少，導(dǎo)致抑制免疫功能減弱或呈低反應(yīng)性可能是引起支氣管哮喘發(fā)病的機(jī)制之一，同時(shí)也說(shuō)明哮喘患兒癥狀的緩解可能與體內(nèi)誘導(dǎo)性調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞水平的恢復(fù)有關(guān)。誘導(dǎo)性調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞在哮喘的發(fā)病中發(fā)揮著重要作用，其水平可用來(lái)評(píng)估哮喘病情。

［1］陽(yáng)艷麗，潘玉琴，何幫順，等.哮喘患兒外周血調(diào)節(jié)性T細(xì)胞和Th1/Th2的變化及其與哮喘病情的關(guān)系［J］.中國(guó)當(dāng)代兒科雜志，2011，13(6):482-486.

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［4］Sakaguchi S.Regulatory T cells in the past and for the future［J］.Eur J Immunol，2008，38(4):901-937.

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