冷遠(yuǎn)景， 陳 捷， 王共先

(南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院泌尿外科，南昌大學(xué)泌尿外科研究所，江西南昌330006)

前列腺癌(prostatic carcinoma，PCa)為歐美發(fā)達(dá)國家男性最常見的惡性腫瘤之一，是老年男性惡性腫瘤死亡的首要原因［1］。在我國隨著社會人口老齡化、前列腺特異性抗原(prostate specific antigen，PSA)普查和臨床診療技術(shù)的提高，PCa的發(fā)病率呈上升趨勢。PCa患者早期診斷時多對激素剝奪治療(androgen deprivation therapy，ADT)敏感，稱為雄激素依賴性前列腺癌(androgen－dependent prostate cancer，ADPC)。但長時間的ADT時，ADPC會逐漸演變?yōu)樾奂に胤且蕾囆郧傲邢侔?(androgen－independent prostate cancer，AIPC)。Fas相關(guān)死亡域樣白細(xì)胞介素1β轉(zhuǎn)換酶抑制蛋白(cellular FLICE－inhibitory protein，c－FLIP)作為一種抗凋亡蛋白，參與死亡受體(death receptor，DR)信號通路。c－FLIP的表達(dá)在PCa中具有重要意義，可能是AIPC和ADPC治療新的基因靶點［2］。為此本文介紹c－FLIP的一些概況及在PCa過表達(dá)意義的研究進(jìn)展。

1 c－FLIP概述和功能

DR信號通路配體包括FasL、腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor α，TNF － α)、腫瘤壞死因子相關(guān)弱凋亡誘導(dǎo)配體(TNF－like weak inducer of apoptosis，TWEAK)/APO－3L和腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(TNF－related apoptosis－inducing ligand，TRAIL)/APO－2L，通過與相對應(yīng)的受體Fas/CD95、TNFR －1、DR3/AP0－3、DR4/5結(jié)合并活化，活化后的Fas相關(guān)死亡域(Fas－associated death domain，F(xiàn)ADD)能夠與procaspase－8形成復(fù)合物，激活DR信號通路，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。TRAIL和TWEAK配體能特異性誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡而不損傷正常細(xì)胞，在腫瘤治療可能具有重要意義［3－4］。但往往腫瘤中存在c－FLIP過表達(dá)的情況，影響TRAIL的治療效果。

c－FLIP 又稱 Casper、iFLICE、FLAME －1、CASJ、CLARP、MRIT或usurpin，其基因轉(zhuǎn)錄時有13種mRNA剪接變異體，但目前在細(xì)胞中只能檢測到3種蛋白產(chǎn)物，即 c－FLIP(L)、c－FLIP(S)和 c－FLIP(R)。其中c－FLIP(L)分子量約55 kD，N端有2個死亡效應(yīng)結(jié)構(gòu)域(death effect domain，DED)，C端含有無生物學(xué)活性的caspase－8樣結(jié)構(gòu)域;c－FLIP(S)和c－FLIP(R)分子量分別為2.6 kD 和2.4 kD，N'端結(jié)構(gòu)與 c－FLIP(L)類似，但C端比 c－FLIP(L)短，且C端無caspase－8樣結(jié)構(gòu)域。c－FLIP結(jié)構(gòu)類似于 procaspase－8，其3種亞型蛋白產(chǎn)物的DED均能競爭性與DR的FADD結(jié)合，抑制caspase凋亡通路，從而維持細(xì)胞存活。Chang等［5］發(fā)現(xiàn)c－FLIP僅在高劑量時才表現(xiàn)抗凋亡作用，而低劑量的c－FLIP卻表現(xiàn)為促凋亡功能。因此，降低PCa細(xì)胞c－FLIP過表達(dá)水平，可能會提高腫瘤細(xì)胞的凋亡敏感性。

2 雄激素受體信號通路調(diào)控c－FLIP表達(dá)

雄激素受體(androgen receptor，AR)信號通路存在于前列腺組織，被認(rèn)為與前列腺生長、PCa細(xì)胞存活及AIPC進(jìn)程均有一定聯(lián)系。AR信號通路主要從兩方面調(diào)控c－FLIP表達(dá):(1)當(dāng)內(nèi)源性雄激素配體如睪丸激素、二氫睪酮活化AR，活化的AR進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)，通過 INNP4B/Akt/NF － κB/FBX10/c － Fos［6－8］通路使c－FLIP表達(dá);(2)此外作為AR靶向基因的c－ FLIP［9－11］，其非編碼區(qū)存在雄激素反應(yīng)元件(androgen response elements，AREs)，能夠與活化的AR的DNA區(qū)域(DNA－binding domain，DBD)結(jié)合，形成復(fù)合物c－FLIP(AREs)－DBD(AR)，此復(fù)合物也可使c－FLIP表達(dá)上調(diào)［11］。AR的輔調(diào)節(jié)因子如FOXO3a等在調(diào)控AR與其靶向基因結(jié)合的同時，也可調(diào)控c－FLIP的表達(dá)［12］。ADT時:一方面上述信號通路被阻斷，Akt/PI3K途徑受到抑制，c－Fos上調(diào)，c－FLIP表達(dá)下降;另一方面也影響AR的活化，從而不能與c－FLIP的DBD結(jié)合，抑制了c－FLIP表達(dá)?？梢哉J(rèn)為，活化的AR可調(diào)控c－FLIP的表達(dá)水平。

3 過表達(dá)的c－FLIP維持PCa細(xì)胞的存活與生長

細(xì)胞凋亡是機體正常細(xì)胞在生理和病理性刺激后，高度有序基因調(diào)控下，一系列酶參與的引起自發(fā)死亡過程。當(dāng)前列腺細(xì)胞發(fā)生癌變時，基因調(diào)控紊亂，表現(xiàn)為抗凋亡基因表達(dá)上調(diào)，促凋亡基因表達(dá)下降。Kim 等［13］發(fā)現(xiàn) 96.3%(103/107)PCa 患者組織存在抗凋亡蛋白c－FLIP的強陽性表達(dá)。Christian等［14］發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)染c－FLIP表達(dá)質(zhì)粒至PC－3細(xì)胞荷瘤鼠能影響蛋白酶小體(proteosome)抑制劑硼替佐米(bortezomib)的治療效果，54%的PC－3細(xì)胞荷瘤鼠腫瘤體積并沒有明顯變化，而對陰性對照組有治療作用。蛋白酶抑制劑雖能誘發(fā)處于快速分裂中的癌細(xì)胞的凋亡，但主要途徑仍是通過細(xì)胞外凋亡途徑即caspase途徑，而表達(dá)的c－FLIP能夠抑制procaspase－8的激活，阻斷caspase凋亡途徑，因此轉(zhuǎn)染c－FLIP表達(dá)質(zhì)粒至PC－3細(xì)胞荷瘤鼠對硼替佐米的治療具有抵抗作用。

ADPC和AIPC細(xì)胞的生長和存活均需要一定的c－FLIP表達(dá):當(dāng)ADT作用于雄激素依賴的LNCaP細(xì)胞時，c－FLIP表達(dá)下調(diào)，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。如再繼續(xù)ADT時，AR受體有可能會發(fā)生突變，其機制尚不明確。突變后的AR受體對雄激素異常敏感，表現(xiàn)為異常活化，而此時LNCaP細(xì)胞的c－FLIP表達(dá)水平升高，LNCaP細(xì)胞雖對ADT有抗性，但生長仍依賴于雄激素信號通路，只是此時雄激素信號通路的激活并不依賴于雄激素的存在，而是由于發(fā)生包括雄激素受體突變在內(nèi)的改變導(dǎo)致該雄激素信號增強，此時單一的ADT對于AIPC效果往往較差。如使用低劑量12－O－十四烷酰佛波乙酸酯－13(12－O －tetradecanoylphorbol－13－acetate，TPA)降低LNCaP細(xì)胞的c－FLIP水平，可使LNCaP細(xì)胞重新對凋亡敏感化［15］。AIPC細(xì)胞的存活也同樣需要c－FLIP過表達(dá)的維持［16］:體外實驗發(fā)現(xiàn)低表達(dá)的PC－3細(xì)胞易受TRAIL誘導(dǎo)凋亡的影響;c－FLIP表達(dá)上調(diào)時，PC－3細(xì)胞對TRAIL誘導(dǎo)的凋亡不敏感。可能c－FLIP同時通過抑制介導(dǎo)激活細(xì)胞內(nèi)源性線粒體途徑，維持 PCa細(xì)胞的存活［17］。有理由相信，高表達(dá)的c－FLIP在維持ADPC和AIPC的細(xì)胞生長與繁殖有著重要的地位。

4 過表達(dá)的c－FLIP影響AIPC的進(jìn)程

AIPC的形成機制較為復(fù)雜，可能與腫瘤的異質(zhì)性、AR異常變異及凋亡基因調(diào)控失調(diào)等方面有關(guān)。近幾年發(fā)現(xiàn)c－FLIP與雄激素非依賴性PCa形成有一定聯(lián)系:(1)ADT時，ADPC的c－FLIP表達(dá)上調(diào)，而在AIPC中無變化［18］;(2)動物實驗通過轉(zhuǎn)染c－FLIP基因至LNCaP細(xì)胞的荷瘤鼠發(fā)現(xiàn)耐受ADT時間短于對照組［11］。這可能是由于長時間治療ADPC時，引起AR受體突變后的異?；罨?，同時也在加速AIPC的形成，此外，也會引起c－FLIP表達(dá)上調(diào)。因此認(rèn)為，c－FLIP的過表達(dá)參與了AIPC的進(jìn)程，這對于治療AIPC或延緩其進(jìn)程具有重要臨床意義。

5 過表達(dá)的c－FLIP作為PCa的治療靶點

上述已介紹c－FLIP對于維持PCa細(xì)胞的存活、生長及促進(jìn)AIPC均有一定聯(lián)系，有效調(diào)節(jié)c－FLIP的過表達(dá)水平對于延緩AIPC及促進(jìn)凋亡有一定作用。體外實驗發(fā)現(xiàn)第4代促性腺激素釋放激素(gonadotropin－releasing hormone，GnRH)拮抗劑Ozarelix對于PC－3、DU－145細(xì)胞具有抑制其增殖作用，其機制是降低腫瘤細(xì)胞的c－FLIP的表達(dá)，誘導(dǎo) PCa 細(xì)胞凋亡敏感化［19］。Yasukochi等［20］研究發(fā)現(xiàn)在體外實驗中組織蛋白酶E對于PCa細(xì)胞增殖具有抑制作用，并且不受耐阿霉素治療PCa細(xì)胞作用的影響。他們認(rèn)為組織蛋白酶E對PCa細(xì)胞的抑制作用是通過降低腫瘤細(xì)胞的c－FLIP表達(dá)水平，聯(lián)合使用組織蛋白酶E和阿霉素對于治療化療抵抗性的PCa是有效的。Jung等［21］迅速激活DU－145細(xì)胞的腺苷酸活化蛋白激酶(AMP－activated protein kinase，AMPK)后發(fā)現(xiàn)，DU145能抵抗Fas介導(dǎo)的DR信號通路，而抑制DU145的 AMPK會降低c－FLIP的表達(dá)水平，激活 DR信號通路。Symes等［22］發(fā)現(xiàn)米托蒽醌和多西紫杉醇能夠殺死PCa細(xì)胞的作用機制同樣也是因為降低c－FLIP的表達(dá)水平，此外，白細(xì)胞介素－8及MG－132通過降低c－FLIP表達(dá)誘導(dǎo)PCa細(xì)胞凋亡敏感化［23－24］。因此抑制 PCa細(xì)胞的c－FLIP表達(dá)對治療PCa具有一定作用［25］。

6 展望

c－FLIP作為抗凋亡蛋白，通過競爭性抑制DR的 Fas/CD95、TNFR －1、DR3/AP0－3、DR4/5與 procaspase－8結(jié)合，抑制細(xì)胞凋亡。研究證實了AIPC的組織中存在c－FLIP過表達(dá)的情況，進(jìn)而對DR介導(dǎo)的凋亡信號產(chǎn)生抵抗作用。體內(nèi)、外實驗發(fā)現(xiàn)直接或間接抑制PCa細(xì)胞的c－FLIP表達(dá)能誘導(dǎo)PCa細(xì)胞凋亡敏感化。本文作者認(rèn)為c－FLIP可能是PCa有效的基因治療靶點，如何有效、特異地降低腫瘤組織c－FLIP水平可能將成為雄激素非依賴性(或難治性)PCa的治療重點之一。降低腫瘤組織的c－FLIP不僅能誘導(dǎo)PCa細(xì)胞凋亡，還能延緩甚至逆轉(zhuǎn)AIPC形成，在PCa基因治療的基礎(chǔ)研究中具有積極意義。

［1］Jemal A，Siegel R，Xu J，et al.Cancer statistics，2010［J］.CA Cancer J Clin，2010，60(5):277 －300.

［2］Micheau O.Cellular FLICE－inhibitory protein:an attractive therapeutic target?［J］.Expert Opin Ther Targets，2003，7(4):559 －573.

［3］楊 雷，楊聯(lián)萍，李茹冰，等.TRAIL對多種腫瘤細(xì)胞的殺傷作用［J］.中國病理生理雜志，2007，23(6):1236 －1237，1239.

［4］Zhong W，He W，Ma W，et al.The effect of TNF－related apoptosis－inducing ligand on the activity of nuclear kappa B in prostate cancer cell line PC －3M［J］.Chin J Pathophysiol(中國病理生理雜志)，2008，24(5):966－971.

［5］Chang DW，Xing Z，Pan Y，et al.c－FLIP(L)is a dual function regulator for caspase－8 activation and CD95－mediated apoptosis［J］.EMBO J，2002，21(14):3704 －3714.

［6］Zhang X，Huang X，Olumi AF.Repression of NF－κB and activation of AP－1 enhance apoptosis in prostate cancer cells［J］.Int J Cancer，2009，124(8):1980 －1989.

［7］Ge R，Wang Z，Zeng Q，et al.F－box protein 10，an NF－ κB －dependent anti－ apoptotic protein，regulates TRAIL－induced apoptosis through modulating c－Fos/c－ FLIP pathway［J］.Cell Death Differ，2011，18(7):1184 －1195.

［8］Katso R，Okkenhaug K，Ahmadi K，et al.Cellular function of phosphoinositide 3－kinases:implications for development，homeostasis，and cancer［J］.Annu Rev Cell Dev Biol，2001，17:615 －675.

［9］Nastiuk KL，Kim JW，Mann M，et al.Androgen regulation of FLICE－like inhibitory protein gene expression in the rat prostate［J］.J Cell Physiol，2003，196(2):386 －393.

［10］Gao S，Wang H，Lee P，et al.Androgen receptor and prostate apoptosis response factor－4 target the c－FLIP gene to determine survival and apoptosis in the prostate gland［J］.J Mol Endocrinol，2006，36(3):463 －483.

［11］Gao S，Lee P，Wang H，et al.The androgen receptor directly targets the cellular Fas/FasL－associated death domain protein－like inhibitory protein gene to promote the androgen－independent growth of prostate cancer cells［J］.Mol Endocrinol，2005，19(7):1792 －1802.

［12］Cornforth AN，Davis JS，Khanifar E，et al.FOXO3a mediates the androgen－dependent regulation of FLIP and contributes to TRAIL－induced apoptosis of LNCaP cells［J］.Oncogene，2008，27(32):4422 － 4433.

［13］Kim SY，Song SY，Kim MS，et al.Immunohistochemical analysis of Fas and FLIP in prostate cancers［J］.APMIS，2009，117(1):28 －33.

［14］Christian PA，Thorpe JA，Schwarze SR.Velcade sensitizes prostate cancer cells to TRAIL induced apoptosis and suppresses tumor growth in vivo［J］.Cancer Biol Ther，2009，8(1):73 －80.

［15］Zhang X，Li W，Olumi AF.Low－dose 12－O－tetradecanoylphorbol－13－acetate enhances tumor necrosis factor related apoptosis－inducing ligand induced apoptosis in prostate cancer Cells［J］.Clin Cancer Res，2007，13(23):7181－7190.

［16］Zhang X，Jin TG，Yang H，et al.Persistent c－FLIP(L)expression is necessary and sufficient to maintain resistance to tumor necrosis factor－related apoptosis －inducing ligand － mediated apoptosis in prostate cancer［J］.Cancer Res，2004，64(19):7086 －7091.

［17］Li H，Zhu H，Xu CJ，et al.Cleavage of BID by caspase 8 mediates the mitochondrial damage in the Fas pathway of apoptosis［J］.Cell，1998，94(4):491 － 501.

［18］Ye H，Li Y，Melamed J，et al.Stromal anti－apoptotic androgen receptor target gene c－FLIP in prostate cancer［J］.J Urol，2009，181(2):872 －877.

［19］Festuccia C，Dondi D，Piccolella M，et al.Ozarelix，a fourth generation GnRH antagonist，induces apoptosis in hormone refractory androgen receptor negative prostate cancer cells modulating expression and activity of death receptors［J］.Prostate，2010，70(12):1340 －1349.

［20］Yasukochi A，Kawakubo T，Nakamura S，et al.Cathepsin E enhances anticancer activity of doxorubicin on human prostate cancer cells showing resistance to TRAIL－mediated apoptosis［J］.Biol Chem，2010，391(8):947 －958.

［21］Jung SN，Park IJ，Kim MJ，et al.Down － regulation of AMP－activated protein kinase sensitizes DU145 carcinoma to Fas－induced apoptosis via c－FLIP degradation［J］.Exp Cell Res，2009，315(14):2433 －2441.

［22］Symes JC，Kurin M，F(xiàn)leshner NE，et al.Fas－mediated killing of primary prostate cancer cells is increased by mitoxantrone and docetaxel［J］.Mol Cancer Ther，2008，7(9):3018－3028.

［23］Wilson C，Wilson T，Johnston PG，et al.Interleukin － 8 signaling attenuates TRAIL－and chemotherapy－induced apoptosis through transcriptional regulation of c－FLIP in prostate cancer cells［J］.Mol Cancer Ther，2008，7(9):2649－ 2661.

［24］Li W，Zhang X，Olumi AF.MG－132 sensitizes TRAIL－resistant prostate cancer cells by activating c－Fos/c－Jun heterodimers and repressing c － FLIP(L)［J］.Cancer Res，2007，67(5):2247 －2255.

［25］Zhang X，Li W，Olumi AF.Overcoming resistance to TRAIL－induced apoptosis in prostate cancer by regulation of c － FLIP［J］.Methods Enzymol，2008，446:333 －349.