郝書林 張亞南 王 靜

（江蘇省徐州市畜禽水產(chǎn)品質(zhì)量檢測中心，徐州 221006）

沙門氏菌屬是一群形態(tài)和培養(yǎng)特性都類似的腸桿菌科中的一個(gè)大屬，也是腸桿菌科中最重要的病原菌屬。沙門氏菌血清型多，分布廣泛，是重要的人畜共患病的病原體。沙門氏菌病一直是一個(gè)世界性問題，對(duì)世界各國經(jīng)濟(jì)造成的損失也很大，嚴(yán)重威脅人的健康和生命安全。沙門氏菌作為食品致病菌檢測的一項(xiàng)重要指標(biāo)，在公共衛(wèi)生、口岸檢疫和畜牧獸醫(yī)上有重要的意義。近年來，隨著免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)和分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，沙門氏菌檢驗(yàn)技術(shù)的研究也有了新的研究進(jìn)展。

1 血清學(xué)鑒定

血清學(xué)方法是利用抗原抗體的特異性反應(yīng)，可見到明顯的凝集現(xiàn)象。目前，國內(nèi)外還應(yīng)用其他方法來鑒定如PCR技術(shù)、屬特異性抗體ELISA等。國內(nèi)報(bào)道了雞白痢沙門氏菌脂多糖敏化紅細(xì)胞的間接血凝試驗(yàn)，是張如寬等（1998）用熱酚-水法提取雞白痢沙門氏菌LPS經(jīng)pH8.0熱處理后，致敏醛化的綿羊紅細(xì)胞，用被檢血或血清作間接血凝試驗(yàn)，具有特異、快速、簡便且陽性檢出率比全血玻板凝集反應(yīng)法高10%～30%。

2 免疫標(biāo)記技術(shù)

免疫標(biāo)記技術(shù)是由免疫熒光標(biāo)記、免疫酶標(biāo)記和放射免疫技術(shù)組成，是當(dāng)前免疫學(xué)技術(shù)應(yīng)用的重點(diǎn)。而沙門氏菌的檢測技術(shù)上著重應(yīng)用了免疫熒光和免疫酶技術(shù)。這2種技術(shù)的應(yīng)用，促進(jìn)和推動(dòng)了沙門氏菌檢測上向著快速、靈敏、簡便的方向發(fā)展。

2.1 免疫熒光標(biāo)記技術(shù)

用熒光素標(biāo)記抗原或抗體，與特異的抗體或抗原結(jié)合而產(chǎn)生熒光。孫洋等人（1994）利用吖啶橙免疫熒光菌團(tuán)培養(yǎng)法檢測沙門氏菌，證明該檢測法對(duì)于34個(gè)菌/ml的沙門氏菌均可檢出，與枯草桿菌、大腸桿菌等8種雜菌均不形成菌團(tuán)交叉，與雜菌的濃度比在1∶640內(nèi)均不受干擾，在30 h內(nèi)可獲得結(jié)果，縮短了檢測時(shí)間，且具有敏感性高、特異性強(qiáng)、簡便快速等特點(diǎn)。Cloak等人（1999）利用表面吸附將檢測樣品吸附于玻璃斜面的一種薄膜上，再用免疫熒光顯微鏡進(jìn)行結(jié)果判定。該法可檢測103.5個(gè)沙門氏菌/ml，而不呈現(xiàn)假陽性或假陰性反應(yīng)?？傊?，以上方法具有能在短時(shí)間內(nèi)較準(zhǔn)確的確定沙門氏菌，而要真正的分清楚沙門氏菌的血清型及種還有待于通過其他方法進(jìn)一步鑒定。

2.2 免疫酶技術(shù)

由最初發(fā)展的免疫酶測定方法，到后來發(fā)展的免疫酶聯(lián)吸附試驗(yàn)（ELISA），給沙門氏菌的檢測帶來新的檢測方法。但許多學(xué)者應(yīng)用后，發(fā)現(xiàn)使用多價(jià)血清不同程度地存在交叉反應(yīng)，使ELISA產(chǎn)生較多的假陽性，給生產(chǎn)實(shí)踐應(yīng)用帶來了一定困難。直到20世紀(jì)80年代單克隆抗體的出現(xiàn)，才有效的解決了這一問題，使沙門氏菌的檢測特別是ELISA迎來了新的曙光，相繼產(chǎn)生了許多檢測方法，如沙門氏菌鞭毛蛋白單抗ELISA法，沙門氏菌屬特異性單克隆抗法ELISA法，抗原捕獲ELISA等。

3 分子生物學(xué)技術(shù)

3.1 基因型檢測

鼠傷寒沙門氏菌和傷寒沙門氏菌的DNA序列是非常接近的。根據(jù)雜交實(shí)驗(yàn)證實(shí)，二者的DNA序列98%～99%相似。但這2個(gè)菌之間的同源重組頻率相當(dāng)?shù)停ǔ藗抽T氏菌ty21α）。其原因是，被mutS和mutL編碼的錯(cuò)配修補(bǔ)蛋白和RecBCD的recD依賴性外切酶活性所抑制的結(jié)果。通過鑒別基因型的差別，可將沙門氏菌屬及亞種加以區(qū)分。

3.2 核酸探針雜交及PCR技術(shù)

目前，檢測沙門氏菌的核酸探針是屬特異性沙門氏菌探針，已從鼠傷寒沙門氏菌E23566菌株染色體DNA克隆成功，已用于食品中沙門氏菌的檢測。

PCR技術(shù)檢測沙門氏菌的特異性取決于所擴(kuò)增序列是否是沙門氏菌高度保守的特異性片斷，能否準(zhǔn)確無誤地?cái)U(kuò)增靶序列由引物決定。也就是說，引物的設(shè)計(jì)取決于沙門氏菌是否具有顯著特征的屬或種特異性靶序列。靶序列的選擇與引物的設(shè)計(jì)是本試驗(yàn)成功與否的關(guān)鍵所在。從目前的報(bào)道來看，大多是采用一段已知的沙門氏菌染色體DNA片段來設(shè)計(jì)的，且大多數(shù)是根據(jù)屬特異性靶序列設(shè)計(jì)的。

3.3 血清型的研究

應(yīng)用分子生物學(xué)技術(shù)對(duì)沙門氏菌血清型的研究報(bào)道還不多。目前，主要集中在以下4個(gè)方面：①雙相菌第二相H抗原缺失 瑞士學(xué)者Burnens（1996）報(bào)道，有9，12∶1，V∶-血清型的行查表有5個(gè)血清型可作為它的前體型，基因酶切片斷分析證明其第二相基因的存在，啟動(dòng)子flj的分析證明其缺失hin基因，2相基因處于鎖閉狀態(tài)。②復(fù)合的雙相H抗原 薩林那斯沙門氏菌是一個(gè)具有復(fù)合雙相H抗原的沙門氏菌4，12∶d∶e，h∶e，n，215。此菌具有2套H抗原的基因。若被H：d抗血清誘導(dǎo)，則產(chǎn)生4，12，e，h∶e，n，215，與圣地亞哥血清型無法區(qū)別。但后來的抗原表面上將其志杜伊斯堡血清型4，12，27∶d∶e，n，215合并。③H抗原的R相 Franco（1992）報(bào)道從印度尼西亞獲得的20株傷寒桿菌中有7株具有特別的外膜蛋白電泳圖和特別的DNA酶切模式。免疫斑點(diǎn)分析顯示外膜蛋白具有H：j和H：d抗原；而其他傷寒菌株無H：j抗原。④無動(dòng)力菌隱蔽的H抗原 法國學(xué)者Kilger和Grimont用第一相鞭毛抗原基因fliC擴(kuò)增酶切圖譜分析，說明G系復(fù)合抗原與雙相菌第一相抗原的酶切圖譜不同，雛雞沙門氏菌血清型帶有隱蔽的鞭毛基因gm，與無動(dòng)力無Vi抗的傷寒血清型不同。

總之，沙門氏菌的檢測技術(shù)在不同的研究方向上均取得了可喜的研究進(jìn)展，有的已應(yīng)用于生產(chǎn)實(shí)際，有的仍處在研究探索階段。隨著免疫學(xué)技術(shù)和分子生物學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展，必將帶動(dòng)沙門氏菌檢測技術(shù)的快速向前發(fā)展，必將向著快速、靈敏、特異性強(qiáng)、經(jīng)濟(jì)的方向不斷發(fā)展。

[1]張如寬，甘軍紀(jì).雞白痢沙門氏菌脂多糖敏化紅細(xì)胞在間接血凝試驗(yàn)中應(yīng)用[J].中國畜禽傳染病，1989，（1）：59-60.

[2]孫洋，王云翔，柳增善.吖啶橙免疫熒光菌團(tuán)培養(yǎng)法對(duì)沙門氏菌的快速檢測[J].吉林畜牧獸醫(yī)，1994，（6）：14-16.

[3]Cloak OM，Duffy G，Sheridan JJ，etal.Development of a surface adhesion immunofluo-resent technigue for the rapid detection of Salmonella spp. From meat and pultry [J]. Journal of Applied Microbiology，1999，（4）：583-590.

[4]Burnens AP，Stanley J，Sechter I，etal.Evolutionary origin of amonophasic Salmonella serovar，9，12：l，v：-，revealed by IS200 profiles and restriction fragment polymorphisms of the fljB gene[J].J Clin Microbiol，1996，（34）：1641-1645.