龐紹新

吉林市新世紀醫(yī)院檢驗科，吉林省吉林市 132021

在臨床細菌檢測上需采用合適的血液細菌鑒定法對患者血液樣品進行檢測，這樣可有效提供臨床疾病的診斷與治療的準確性。而目前臨床應(yīng)用較多的細菌鑒定法有：血清學(xué)凝集試驗、鏡檢、直接藥敏試驗、常規(guī)檢驗等。臨床藥敏試驗的目的就是從患者的血液樣品中檢驗細菌對抗菌藥物的敏感度，進而能夠較準確、快捷地鑒定出引起患者疾病細菌的類型。在本文的研究中，我們通過多720例患者的陽性血液樣品進行鑒定與檢測，進而探討利用直接藥敏試驗法的臨床血液細菌檢測中的應(yīng)用價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本文將選取2010年5月～2011年12月期間我院收治的發(fā)燒并伴全身感染癥狀者患者中的720例陽性血培養(yǎng)標本，所有患者均采用BacT9050型的全自動血培養(yǎng)儀(美國)，行細菌鑒定時所使用的API鑒定板條(法國梅里埃公司)。采用Walkaway40全自動微生物鑒定儀(美國 Dade-Berhing公司出品)，G+和G-的菌鑒定及藥敏綜合板(PC11、NC21)、藥敏紙片以及MH干粉(均為英國OXIOD公司)，巧克力平板、麥康凱平板、分離用血平板(廣州樂通泰公司)，檢測所使用的一次性無菌試紙以及10mL無菌針筒(均為美國BD公司)。

1.2 血液樣品檢測方法

本文患者的血液樣品均采用兩種檢測技術(shù)(直接藥敏試驗和常規(guī)藥敏試驗)進行檢測，同時分析不同檢測方法所得出的細菌鑒定結(jié)果以及藥敏結(jié)果的符合率。

1.2.1 直接藥敏試驗 直接藥敏試驗：首先需將血液樣本接種于BacT9050型全自動血培養(yǎng)儀(美國)中進行自動的培養(yǎng)和檢測。在培養(yǎng)儀檢測出陽性樣后，迅速使用無菌注射器抽取陽性品(10mL)，并將其注入無菌試管中行密度梯度的離心分離細菌，所有陽性樣均行1500 r/min離心，在5 min后將上層清液收集起來，然后再次在3000r/min下離心約15min后清除清液，使用PBS進行洗滌并沉淀兩次后進行重懸[1]。另外在選取20μL的懸液涂片對陽性樣行革蘭氏染色，同時在倒置情況下進行顯微鏡觀察：①若為一般菌種，將其接種2滴懸液于MH平板上(真菌例外)。采用無菌拭子將其均勻涂抹與平板上并貼上藥敏紙片。判斷陽性樣中的敏感、耐藥以及中度敏感可根據(jù)2005 NCCLSI標準進行；②如果發(fā)現(xiàn)G+菌呈鏈狀時，便可利用MH+5%的羊血血平板進行初級藥敏試驗。同時根據(jù)試驗的結(jié)果來選擇酶，另外將菌液的濃度調(diào)整為6.2×108cfu/L，之后將其接種于藥敏綜合板NC21上行細菌鑒定和藥敏試驗[2]。

1.2.2 樣品常規(guī)檢測 常規(guī)檢測：也就是將血液陽性樣分別接種于血平板、巧克力平板和麥康凱平板上，并其置于35℃環(huán)境中進行16～28h的孵育，然后再將其行生長菌落涂片進行革蘭染色鏡檢。之后在根據(jù)涂片的檢驗結(jié)果來選擇合適的觸酶或者氧化酶試驗，并按照Walkaway40全自動微生物鑒定儀上的操作步驟上機對血液陽性樣進行細菌鑒定和藥敏試驗[3]。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 對本文資料進行處理時采用SPSS13.0統(tǒng)計學(xué)軟件，采用χ2對計數(shù)數(shù)據(jù)進行檢驗，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。

2 結(jié)果

2.1 鑒定結(jié)果

通過對720例血液樣品進行BacT9050型全自動血培養(yǎng)儀檢出的420例的陽性樣，并對其行直接法與常規(guī)法進行血液細菌的鑒定，其結(jié)果以及檢出符合率詳見表1。

2.2 直接法與常規(guī)法的藥敏試驗結(jié)果及符合率

通過2種不同方法行陽性樣的藥敏試驗，其檢測結(jié)果的總符合率均比較高，其中G+球菌的耐藥、敏感、中度敏感符合率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(Z=-0.215，P﹥0.05)。而G-桿菌的耐藥、敏感、中度敏感的符合率差異同樣沒有統(tǒng)計學(xué)意義(Z=-1.112，P﹥0.05)，具體數(shù)據(jù)詳見表 2。

表1 2種檢測方法菌種檢出符合率比較

表2 2種檢測方法抗生素敏感度檢出符合率比較

3 討論

在最近幾年的院內(nèi)感染中，大部分都是由于患者受到多重耐藥菌的感染進而誘發(fā)其全身感染或者敗血癥等細菌性疾病，其原因主要是由于患者的體內(nèi)細菌耐藥性的大幅度增加所致的。其將嚴重影響患者的疾病診治以及生命質(zhì)量。因而在臨床上急需擁有快速、高效的臨床檢測方法來對細菌進行鑒定和耐藥性測試，以此來指導(dǎo)臨床用藥。

目前，在臨床血液細菌鑒定檢測方法中較常用的是藥敏實驗。但是由于受到技術(shù)及實驗條件的限制，此檢測方法無法全面推廣應(yīng)用。但是隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，使得較為簡便的臨床檢測技術(shù)獲得推廣應(yīng)用，在本文中我們采用了BacT9050型全自動血培養(yǎng)儀，對陽性樣進行提取分離，同時采用熒光探測技術(shù)對陽性樣內(nèi)的微生物進行檢測，進而能夠快速對血液樣品中的細菌進行鑒定[4]。

從本文的研究結(jié)果來看，直接法采用BacT9050型全自動血培養(yǎng)儀檢出的420例的陽性樣中，然后對其含有的G-桿菌、G+球菌的藥敏試驗檢測，其檢測結(jié)果與常規(guī)方法檢測結(jié)果相比，兩組的總符合率均比較高，且兩種方法檢測結(jié)果差異無統(tǒng)計學(xué)意義，另外，采用此套檢測系統(tǒng)其檢測時間可縮短至10h，這與常規(guī)檢測方法相比時間明顯較短，其操作簡便，因而直接法可替代常規(guī)藥敏實驗對G-桿菌和G+球菌的抗菌藥物敏感度進行檢測。這對于臨床診治敗血癥以及菌血癥均具有重要的臨床意義。

[1]蒙美平.直接藥敏試驗法在涂陽肺結(jié)核耐藥性檢測中的應(yīng)用[J].中國熱帶醫(yī)學(xué)，2007，7(2)：262-264.

[2]崔艷芳，朱敏，劉瑾，等.常見革蘭陰性菌耐藥性變遷臨床分析[J].同濟大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版)，2010，31(3)：114-117.

[3]任光，虎鳳俠.切口感染23例的病原菌分布及藥物敏感試驗分析[J].中國社區(qū)醫(yī)師(醫(yī)學(xué)專業(yè)半月刊)，2009，23：181.

[4]黎海東，謝文銳.細菌鑒定在臨床血液檢驗中的應(yīng)用研究[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志，2007，17(5)：955-957.