汪梅姣 謝志軍 谷煥鵬 溫成平

（浙江中醫(yī)藥大學(xué)，浙江 杭州 310053）

蟲類入藥，歷史悠久，其研究與應(yīng)用前景廣闊，比如蜈蚣、地龍、地鱉蟲在鎮(zhèn)痛方面具有明顯優(yōu)勢(shì)。本研究擬通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)比較蜈蚣、地龍、地鱉蟲水提物的鎮(zhèn)痛作用，為臨床合理選擇用藥提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與儀器

1.1 藥物 蜈蚣（產(chǎn)地：浙江）、地龍（產(chǎn)地：上海）、地鱉蟲（產(chǎn)地：山東），由浙江中醫(yī)藥大學(xué)飲片廠提供。美洛昔康，上海勃林格殷格翰藥業(yè)有限公司（國(guó)藥準(zhǔn)字H20020217）。取干燥的蜈蚣、地龍、地鱉蟲藥材切碎，分別用去離子水煎1 h，去渣后使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，得水提物的生藥濃度為0.10 g/mL。美洛昔康溶液：去離子水配制藥物濃度為15 mg/mL。

1.2 動(dòng)物 實(shí)驗(yàn)用清潔級(jí)ICR小鼠，體質(zhì)量（20±2）g，由浙江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物中心提供。

1.3 儀器與試劑 YLS-6B智能熱板儀，濟(jì)南益延科技發(fā)展有限公司；電子分析天平，賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司（型號(hào)：00000246）。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，電爐等實(shí)驗(yàn)室常用設(shè)備。冰醋酸，杭州化學(xué)試劑有限公司（批號(hào)：20041201）。

1.4 熱板法疼痛實(shí)驗(yàn) 調(diào)節(jié)職能熱板儀溫度在（55±0.5）℃，熱板預(yù)熱10 min。取雌性ICR小鼠，放在熱板上，小鼠自放上熱板到出現(xiàn)舔后足或抬后足并回頭所需時(shí)間（s）作為該鼠的痛閾值。凡舔后足或抬后足時(shí)間＜5 s或＞30 s或跳躍者，棄之不用。取合格的小鼠40只，分為空白對(duì)照組（蒸餾水灌胃）、蜈蚣組（蜈蚣水提物灌胃，劑量1.12 g/kg，相當(dāng)于人體用藥 6 g/60 kg）、地龍組（地龍水提物灌胃，劑量1.12 g/kg）、地鱉蟲組（地鱉蟲水提物灌胃，劑量1.12 g/kg）、美洛昔康組（美洛昔康溶液灌胃，劑量1.4 mg/kg，相當(dāng)于人體用藥7.5 mg/60 kg），每組8只。其中空白對(duì)照組、蜈蚣組、地龍組、地鱉蟲組均灌胃給藥7 d，末次灌胃后0、30、60、90、120 min分別用智能熱板儀測(cè)小鼠痛閾值。美洛昔康組只在測(cè)定當(dāng)天灌胃，實(shí)驗(yàn)步驟同前。如60 s小鼠仍無反應(yīng)，取出小鼠停止實(shí)驗(yàn)，以免燙傷，其痛閾值以60 s計(jì)算。

1.5 醋酸致小鼠扭體反應(yīng)實(shí)驗(yàn) 取ICR小鼠40只，雌雄各半，分為空白對(duì)照組（蒸餾水灌胃）、蜈蚣組（蜈蚣水提物灌胃）、地龍組（地龍水提物灌胃）、地鱉蟲組（地鱉蟲水提物灌胃）、美洛昔康組（美洛昔康溶液灌胃），每組8只。空白對(duì)照組、蜈蚣組、地龍組、地鱉蟲組均灌胃給藥7 d，末次灌胃給藥50 min后，各小鼠均腹腔注射0.6%醋酸0.2 mL/10 g。美洛昔康組只在當(dāng)天灌胃，實(shí)驗(yàn)步驟同前，觀察15 min內(nèi)各組小鼠出現(xiàn)扭體反應(yīng)（腹部?jī)?nèi)凹、伸展后肢、顛部抬高）次數(shù)，計(jì)算鎮(zhèn)痛百分率，公式為：鎮(zhèn)痛百分率=（對(duì)照組平均扭體次數(shù)-給藥組平均扭體次數(shù)）/對(duì)照組平均扭體次數(shù)×100%。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以（±s）表示，方差齊性檢驗(yàn)采用Levene檢驗(yàn)，多組間方差齊性時(shí)采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t法，所有假設(shè)檢驗(yàn)均采用雙側(cè)檢驗(yàn)。P≤0.05者將被認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 熱板法疼痛實(shí)驗(yàn) 見表1。給藥前各組小鼠添足反應(yīng)時(shí)間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。給藥后與給藥前比較：蜈蚣組、地龍組、地鱉蟲組小鼠舔足時(shí)間明顯延長(zhǎng)，其中，在30、90、120 min時(shí)蜈蚣組與空白對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05）；在120 min時(shí)，地龍組與空白對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05），地鱉蟲組與美洛昔康組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05），其余時(shí)間段差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

表1 各組給藥后不同時(shí)點(diǎn)痛閾（舔足反應(yīng)時(shí)間）比較（s，±s）

表1 各組給藥后不同時(shí)點(diǎn)痛閾（舔足反應(yīng)時(shí)間）比較（s，±s）

與美洛昔康組比較，*P＜0.05；與空白對(duì)照組比較，△P＜0.05。下同。

組 別 n 0 min 30 min 60 min 90 min 120 min空白對(duì)照組 8蜈蚣組 8 11.75±1.53 13.26±2.59 38.94±30.80△ 38.43±31.19△地龍組 8 10.68±5.91 23.20±21.99 14.36±8.10 31.16±22.43 38.81±23.92△地鱉蟲組 8 7.70±2.08 13.56±11.59 19.15±12.06 22.61±20.51 20.80±20.64*10.74±5.64 11.90±1.71 12.01±2.51 10.74±4.92 30.41±15.58△ 17.26±6.37美洛昔康組 812.92±5.86 21.75±10.03 37.47±16.6527.95±23.04 36.16±23.33

2.2 醋酸致小鼠扭體反應(yīng)實(shí)驗(yàn) 見表2。給藥前各組小鼠添足反應(yīng)時(shí)間沒有顯著差異（P＜0.05）。蜈蚣組、地龍組、地鱉蟲組與空白對(duì)照組比較，小鼠扭體次數(shù)明顯減少，其中蜈蚣組、地鱉蟲組與空白對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。各組與美洛昔康組比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。蜈蚣組、地龍組、地鱉蟲組3組間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

表2 各組給藥前后扭體次數(shù)與鎮(zhèn)痛率比較（±s）

表2 各組給藥前后扭體次數(shù)與鎮(zhèn)痛率比較（±s）

組 別 n 小鼠扭體次數(shù) 疼痛率（%）空白對(duì)照組 8蜈蚣組 8 33.0±6.5 —14.0±10.9△ 57.6地龍組 8 28.0±14.1 15.2地鱉蟲組 8 27.0±13.6△ 18.2美洛昔康組 813.0±7.9 60.6

3 討 論

蟲類藥用于鎮(zhèn)痛治療歷史悠久，《千金要方》、《外臺(tái)秘要》都有用蟲類藥治療痹證的記載。宋代治療痹證的醫(yī)方中較前人更多使用了蟲類藥，如：蜈蚣、地龍、烏蛇、白花蛇、全蝎之類，代表方如《圣惠方》的原蠶蛾散（地龍、原蠶蛾、僵蠶、蟬蛻），蛜螂丸（蛜螂即全蝎）。目前，蟲類藥亦廣泛用于治療風(fēng)濕痹病，如益腎蠲痹丸（含蜈蚣、地龍等）有搜風(fēng)剔邪，蠲痹通絡(luò)之功，臨床用于治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)直性脊柱炎等風(fēng)濕痹癥具有較好的療效［1］。腰痛寧膠囊（含土鱉蟲等）具有消腫止痛，疏散寒邪，溫經(jīng)通絡(luò)作用，常用于治療腰腿痛、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)痛等［2］。蟻參蠲痹膠囊（復(fù)方螞蟻丸）（含蜈蚣等）臨床上用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎［3］。

蜈蚣功能息風(fēng)鎮(zhèn)痙，通絡(luò)止痛，攻毒散結(jié)，可用于治療風(fēng)濕頑痹等；地龍功能清熱定驚，通絡(luò)，平喘，利尿，可用于關(guān)節(jié)痹痛，肢體麻木，半身不遂等；地鱉蟲功能破瘀血，續(xù)筋骨，可用于筋骨折傷，瘀血經(jīng)閉，癓瘕痞塊。研究表明，蜈蚣醇提物、水提物均有明顯的鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、解痙和抗炎作用［4］，對(duì)熱板法刺激引起的疼痛有顯著鎮(zhèn)痛作用，且小劑量?jī)?yōu)于大劑量；對(duì)二甲苯引起的小鼠耳廊炎癥也有顯著的抑制作用［5］；地龍具有溶栓、降壓、鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、殺精子等作用［6-7］；楊耀芳研究發(fā)現(xiàn)土鱉蟲呈現(xiàn)較強(qiáng)的鎮(zhèn)痛作用［8］。

本研究表明，蜈蚣、地龍、地鱉蟲水提物對(duì)熱板、醋酸導(dǎo)致的疼痛有明顯的緩解作用；其中，蜈蚣在熱板、醋酸導(dǎo)致的疼痛實(shí)驗(yàn)中表現(xiàn)出最強(qiáng)的鎮(zhèn)痛作用，在熱板法疼痛實(shí)驗(yàn)中地龍的鎮(zhèn)痛作用強(qiáng)于地鱉蟲，但是在醋酸致小鼠扭體反應(yīng)實(shí)驗(yàn)中結(jié)果相反，表明地鱉蟲短效鎮(zhèn)痛作用較好，而地龍有長(zhǎng)效的鎮(zhèn)痛作用。本文僅比較了蜈蚣、地龍、地鱉蟲水提物的鎮(zhèn)痛作用，對(duì)于其醇提物及其他蟲類藥的鎮(zhèn)痛作用比較還有待深入研究。

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