楊蕙王宇紅張秀麗韓遠(yuǎn)山丁志平

［1.湖南省中藥粉體與創(chuàng)新藥物省部共建國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，湖南長沙410007；2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院中藥藥理（心血管）實(shí)驗(yàn)室，湖南長沙410007；3.湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南長沙410007；4.湖南省中醫(yī)藥研究院，湖南長沙，410007］

馬錢子粉屬于常用的有毒中藥，臨床主要用于治療各種難治性疾病，由于療效確切，力猛效捷，為歷代醫(yī)家所推崇。前期工作研究表明，馬錢子微粉化后由于比表面積增加，所含藥效成分的釋放速度與釋放量遠(yuǎn)優(yōu)于中藥普通粉體與傳統(tǒng)中藥飲片及傳統(tǒng)中藥丸散劑，其藥效成分吸收率增加，生物利用度提高［1-2］。因此進(jìn)一步明確馬錢子超微粉抗炎的量效關(guān)系對(duì)于馬錢子超微粉的臨床應(yīng)用具有重要意義。馬錢子超微粉毒、效成分復(fù)雜，毒性機(jī)制不明確，隨著藥物劑量的遞增，機(jī)體將相繼出現(xiàn)治療效應(yīng)、毒性效應(yīng)，直至死亡效應(yīng)。出現(xiàn)這3種效應(yīng)的劑量分別稱為有效劑量（ED）、毒性劑量（TD）和致死劑量（LD）。筆者以類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA）大鼠為模型動(dòng)物，以最大效能（Emax）、效價(jià)強(qiáng)度（KD）、治療指數(shù)（TI）、安全界限（SF）為參數(shù)，考察微粉化對(duì)馬錢子療效與毒性量效關(guān)系的影響。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 試劑與儀器馬錢子購自湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院，經(jīng)鑒定為馬錢科植物云南馬錢Strychnos pierriana A.W.Hill的干燥成熟種子，其質(zhì)量符合2010年版《中國藥典》馬錢子項(xiàng)下規(guī)定。馬錢子超微粉與其粗粉均采用同一批原料制備而成，批號(hào)分別為W20090203、C20090203，臨用前以蒸餾水配成混懸液。弗氏完全佐劑由美國Sigma公司提供。YLS-7B型足趾容積測(cè)定儀（山東醫(yī)學(xué)科學(xué)院設(shè)備站）。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SD大鼠，SPF級(jí)，180～200 g，200只，雄性，購自湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，合格證號(hào)NHASLKJ 20100778，生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK（湘）2009-0004。全價(jià)顆粒飼料由湖南中醫(yī)藥大學(xué)SPF實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。動(dòng)物飼養(yǎng)室溫：20～24℃，相對(duì)濕度：45%～60%。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物環(huán)境設(shè)施合格證號(hào)：SYXK（湘）2009-0001。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 馬錢子超微粉與其粗粉抑制RA大鼠足腫脹的量效關(guān)系試驗(yàn)

2.1.1 分組與給藥SD雄性大鼠78只，適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d，按體質(zhì)量隨機(jī)分為13組：空白組、模型組、陽性藥（雷公藤多苷片8.0 mg/kg）組、受試藥物（馬錢子超微粉與其粗粉各為50.0、35.0、24.5、17.2、12.0 mg/kg）組。所有動(dòng)物于造模前測(cè)定左、右后部足趾容積，除空白對(duì)照組外，其余各組動(dòng)物右后部足趾注射弗氏完全佐劑0.1 mL，復(fù)制類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎大鼠模型［3］。造模1 h后按10 mL/kg灌胃給藥，模型對(duì)照組與空白對(duì)照組給予等劑量的蒸餾水，每天給藥1次，連續(xù)給藥21 d。

2.1.2 觀測(cè)指標(biāo)分別于造模24 h，6 d，12 d，15 d，21 d測(cè)量各組大鼠右后部足趾容積，于造模后12 d，15 d，21 d測(cè)量各組大鼠左后部足趾容積。

2.1.3 馬錢子超微粉與其粗粉抑制RA大鼠足腫脹的ED50、ED95以大鼠右后部足趾容積與左后部足趾容積計(jì)算足腫脹率、足腫脹抑制率及效應(yīng)率，根據(jù)量效關(guān)系實(shí)驗(yàn)結(jié)果 進(jìn)行線性回歸，Bliss法計(jì)算馬錢子超微粉與其粗粉的ED50及ED95。足腫脹率（%）=（右后部足趾容積－左后部足趾容積）/左后部足趾容積×100%。足腫脹抑制率（%）=（模型組足腫脹率－給藥組足腫脹率）/模型組足腫脹率×100%。藥物效應(yīng)率（%）=某劑量的抑制率/最大抑制率×100%。

2.2 急性致死量試驗(yàn)

2.2.1 劑量確定經(jīng)預(yù)實(shí)驗(yàn)得SD大鼠馬錢子超微粉最低全致死量Dm為207.4 mg/kg、最高不致死量Dn為83.3 mg/kg，馬錢子粗粉最低全致死量Dm為259.0 mg/kg、最高不致死量Dn為104.2 mg/kg。按組間等比關(guān)系，把馬錢子超微粉按1∶0.7961分為207.4、165.1、131.4、104.6及83.3 mg/kg 5個(gè)劑量組，粗粉按1∶0.7964分為259.0、206.3、164.3、130.8及104.2 mg/kg 5個(gè)劑量組。

2.2.2 分組及給藥SD雄性大鼠100只，SPF級(jí)，體質(zhì)量18～22 g，按體質(zhì)量分層隨機(jī)分為10組，每組10只，馬錢子超微粉與其粗粉各5組，禁食12 h后一次性灌胃上述劑量的馬錢子超微粉或其粗粉，灌胃體積10 mL/kg，然后正常飼養(yǎng)并觀察14 d，記錄期間各組動(dòng)物的死亡數(shù)。以Bliss法計(jì)算馬錢子超微粉與其粗粉的LD50及LD5。

2.3 安全范圍計(jì)算按照以下公式計(jì)算大鼠灌胃馬錢子超微粉與其粗粉的治療指數(shù)TI=LD50/ED50，安全界限SF=LD5/ED95。

3 結(jié)果

3.1 馬錢子超微粉與其粗粉抑制RA大鼠足腫脹的量效關(guān)系曲線

3.1.1 馬錢子超微粉與其粗粉抑制RA大鼠足腫脹的作用見表1。結(jié)果 示馬錢子超微粉與其粗粉均可明顯抑制弗氏完全佐劑導(dǎo)致的大鼠足腫脹。馬錢子超微粉在12.0～24.5 mg/kg范圍內(nèi)，量增效增；在35.5～50.0 mg/kg劑量范圍內(nèi)，量增效減。其粗粉在12.0～35.0 mg/kg劑量范圍內(nèi)，量增效增；50.0 mg/kg劑量，量增效減。相同劑量的馬錢子超微粉藥效明顯優(yōu)于其粗粉，且其最小有效劑量小于粗粉。在馬錢子超微粉24.5～50.0 mg/kg劑量范圍量增效減的原因，可能是給藥劑量超過了最大安全劑量，導(dǎo)致毒性反應(yīng)，從而降低了其藥效。

表1 各組RA大鼠足腫脹情況比較（±s）

表1 各組RA大鼠足腫脹情況比較（±s）

與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

組別抑制率（%）效應(yīng)率（%）模型組--劑量（mg/kg）腫脹率（%）-58.2±13.5雷公藤多苷片32.696.4 n66 20.039.2±6.6馬錢子超微粉612.051.4±7.311.734.6馬錢子超微粉617.246.4±11.720.360.1馬錢子超微粉624.538.5±13.0*33.8100.0馬錢子超微粉635.041.1±5.7**29.487.0馬錢子超微粉650.050.3±12.313.640.2馬錢子粗粉612.062.3±12.8-7.0-24.6馬錢子粗粉617.258.6±11.6-0.7-2.5馬錢子粗粉624.547.3±10.918.765.6馬錢子粗粉635.041.6±17.628.5100.0馬錢子粗粉650.049.9±14.914.350.2

3.1.2 線性擬合［4-5］見圖1。在馬錢子超微粉及其粗粉的量增效增劑量范圍內(nèi)，采用線性擬合方法 分別分析其量效關(guān)系。結(jié)果 表明，馬錢子超微粉及粗粉的劑量與其效應(yīng)率呈正比。

圖1 馬錢子超微粉及粗粉效應(yīng)率的線性擬合曲線

圖2 馬錢子超微粉抑制RA大鼠足腫脹的量效曲線

3.1.3 多項(xiàng)式曲線擬合見圖2及圖3。在馬錢子超微粉及粗粉的全劑量范圍內(nèi)，采用多項(xiàng)式曲線擬合方法 ，分析其足腫脹抑制率的量效關(guān)系。

馬錢子超微粉與其粗粉足腫脹抑制率量效曲線擬合方程為：

超微粉：Y=-0.167X2+10.441X-66.082，R2=0.9418。當(dāng)劑量為31.26 mg/kg時(shí)，其最大效能Emax=97.11%，效價(jià)KD=14.21 mg/kg，斜率為5.69。

粗粉：Y=-0.2194X2+15.911X-194.51，R2=0.9571。當(dāng)劑量為36.26 mg/kg時(shí)，其最大效能Emax=93.96%，效價(jià)KD=21.63 mg/kg，斜率為6.42。

馬錢子超微粉的Emax較其粗粉大，提示，馬錢子超微粉抑制足腫脹的藥效優(yōu)于其粗粉；馬錢子超微粉的KD較其粗粉小，即馬錢子超微粉的效價(jià)強(qiáng)度增大，提示，馬錢子超微粉50%Emax所對(duì)應(yīng)劑量較其粗粉?。蓽p少34.3%），馬錢子超微粉臨床使用劑量可以減低至其粗粉的2/3；斜率減小，表明馬錢子超微粉的有效劑量范圍增大了1.13倍。

圖3 馬錢子超微粉與其粗粉效應(yīng)率擬合曲線

從圖3可知，馬錢子超微粉ED50=14.3（95%可信區(qū)間為13.4～15.1），ED5=8.5，ED95=24.1；其粗粉ED50=23.2（95%可信區(qū)間為22.5～23.9），ED5=18.8，ED95=28.6。

3.2 馬錢子超微粉與其粗粉的LD50見圖4。灌胃馬錢子超微粉或其粗粉后，一般大鼠會(huì)在約10～20 min出現(xiàn)中毒癥狀，表現(xiàn)為全身抽搐、或全身僵直，進(jìn)而出現(xiàn)呼吸停止而死亡，若出現(xiàn)中毒癥狀后能恢復(fù)正常者，則30 min后基本不再復(fù)發(fā)，并恢復(fù)正常活動(dòng)及飲食。

馬錢子超微粉LD50=131.4（95%可信區(qū)間為117.01～147.6），LD5=91.6；馬錢子粗粉LD50=156.8（95%可信區(qū)間為139.69～175.7），LD5=110.4。馬錢子超微粉SD大鼠的急性毒性大于其粗粉。

3.3 馬錢子超微粉與其粗粉的TI、SF馬錢子超微粉與其粗粉急性灌胃給藥一次，分別計(jì)算得超微粉TI=131.4/14.3=9.2，超微粉SF=91.6/24.1=3.8；粗粉TI=156.8/23.2=6.8，粗粉SF=110.4/28.6=3.9。

結(jié)果 提示，馬錢子超微粉的治療指數(shù)較其粗粉升高，則表明采用小劑量多次給藥形式，馬錢子超微粉較其粗粉相對(duì)安全；馬錢子超微粉與其粗粉的安全界限基本相當(dāng)，則表明馬錢子超微粉與其粗粉一次給藥的安全性無明顯差異。

圖4 馬錢子超微粉與其粗粉死亡率擬合曲線

4 討論

馬錢子超微粉的ED50、ED95分別為14.3、24.1 mg/kg，LD50、LD5分別為131.4、91.6 mg/kg；馬錢子粗粉的ED50、ED95分別為23.2、28.6 mg/kg，LD50、LD5分別為156.8、110.4 mg/kg。結(jié)果 表明，馬錢子超微粉與其粗粉的治療劑量與中毒劑量較為接近，安全范圍較窄。馬錢子超微粉50%Emax所需劑量較其粗粉小（約0.66倍），其臨床使用劑量可以減低至其粗粉的2/3；微粉化使馬錢子的有效劑量范圍增大了1.13倍。

治療指數(shù)（TI）是衡量藥物安全性的一個(gè)指標(biāo)，以LD50與ED50之比來表示。TI越大，相對(duì)越安全，一般TI＞3較安全而TI＜2不安全。安全界限（SF）是定量比較一次給藥的安全性，以單次給藥后的LD5與ED95之比來表示，克服了TI不能反映療效和毒性的劑量-效應(yīng)關(guān)系的缺點(diǎn)。馬錢子超微粉的治療指數(shù)TI=9.2、安全界限SF=3.8，其粗粉的治療指數(shù)TI=6.8、安全界限SF=3.9。結(jié)果 提示，馬錢子超微粉與其粗粉小劑量多次給藥相對(duì)較安全，且馬錢子超微粉小劑量給藥較其粗粉相對(duì)安全。馬錢子超微粉與其粗粉的安全界限接近，馬錢子超微粉與其粗粉一次給藥的安全性基本相當(dāng)。

《中國藥典》收載的馬錢子粉（細(xì)粉），由于其安全劑量范圍較窄，臨床應(yīng)用受到限制。本試驗(yàn)結(jié)果 表明，馬錢子微粉化后最小有效劑量降低、安全劑量范圍增大，臨床可用于治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等疾病，但仍需要調(diào)整劑量，確保安全有效。

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