馬新生，吳慧明，尚子帥，朱國念

(浙江大學 農藥與環(huán)境毒理研究所，浙江 杭州 310029)

炔草酯是先正達作物保護有限公司開發(fā)的芳氧苯氧羧酸酯類手性含氟高效低毒除草劑，對惡性禾本科雜草有顯著效果，與安全劑以一定比例混合，用于禾谷類作物，對禾本科雜草如鼠尾草、看麥娘、野燕麥、黑麥草、早熟禾、狗尾草等有較好防效。炔草酯在土壤中能迅速降解，對后茬作物無影響［1-5］。

Sugata Roy等［6］開發(fā)了炔草酯 (clodinafoppropargyl)和炔草酸 (clodinafop acid)在小麥田樣品中殘留量的液相檢測方法，并指出炔草酯可以在短時間內在土壤中轉化為炔草酸，研究炔草酯及其代謝產物炔草酸在土壤中的殘留動態(tài)是必要的。

本文采用液質聯(lián)用技術建立了炔草酯和炔草酸在小麥植株和土壤中的殘留分析方法，并研究了炔草酯和炔草酸在室內外土壤中的消解動態(tài)，為評價該藥劑適用于小麥的持效期及風險評估提供依據，為該藥的合理使用提供依據。

1 材料與儀器

1.1 供試材料

農藥標準品:炔草酯≥98.1%，炔草酸≥96.0%均由杭州宇龍化工有限公司提供。

供試農藥:炔草酯15%可濕性粉劑由杭州宇龍化工有限公司提供。

試劑:甲醇 (HPLC級，TEDIA公司)，丙酮，二氯甲烷，鹽酸，氯化鈉，無水硫酸鈉 (AR，市售)等。

1.2 儀器設備

UPLC-MS/MS(Waters Premier XE)，色譜柱CAPCELL PAK C18 IF S2;R-215旋轉蒸發(fā)儀 (瑞士BUCHI);N-EVAP 11氮吹儀 (杭州爾力);大型冷凍恒溫振蕩器 (DHZ-DA型);搗碎機、平底燒瓶及各種玻璃儀器;0.000 1感量電子天平，0.001感量電子天平。

1.3 田間試驗設計

田間試驗在浙江省諸暨市小麥田中進行。土壤類型:沙壤土，pH值6.5。

選1塊約15 m2的地塊，除去土表附著物，按制劑用量1 g·m-2施藥。兌水施藥后，分別于施藥后0(2 h)，1，3，7，14，21，28和45 d取土壤檢測炔草酯和代謝產物炔草酸殘留量。采樣和樣品處理按照《農藥殘留試驗準則》進行［7］。

1.4 室內試驗土壤中的降解試驗

取一定量的田間試驗地土壤為供試土壤，經風干，研磨，過1 mm篩備用。

試驗前，供試土壤要預先放置在溫度為 (25±1)℃避光培養(yǎng)箱中預培養(yǎng)7 d。試驗時，取20 g備用土壤于于150 mL三角瓶中，為了盡量使室內土壤濃度跟田間第1天檢測濃度 (約為0.4 mg·kg-1)保持一致，在每個三角瓶中加入100 mg·L-1的炔草酯溶液0.1 mL，攪拌均勻后，加去離子水調節(jié)土壤含水量至田間持水量的60%，牛皮紙封口，置于 (25±1)℃避光恒溫箱中培養(yǎng)，定期取樣。每次各取1組測定土壤中的殘留量，已取樣品保存于-20℃冰箱中。試驗過程中，每周補水 (滅菌后的去離子水)1次。

2 分析方法

2.1 標樣的配制

分別準確稱取10.2，10.4 mg炔草酯、炔草酸標準品，于10 mL容量瓶中，用色譜甲醇溶解后，定容至刻度，配制成1 000 mg·L-1的標準液，并將配制好的標準液逐步稀釋成100，10，1，0.1，0.01和0.005 mg·L-1的標準溶液。

2.2 土壤樣品中的提取與凈化

稱取20.00 g樣品至250 mL錐形瓶中，加入20.00 mL去離子水，靜置15 min，再加入80 mL丙酮，于振蕩器上振蕩30 min，用鋪有2層濾紙的布氏漏斗抽濾，濾渣用40 mL丙酮洗。將濾液全部轉移至已裝有50 mL 3%的 NaCl溶液的分液漏斗中，加入100 mL二氯甲烷液-液分配萃取 (振蕩5 min)，靜置分層后，用250 mL平底燒瓶收集下層 (二氯甲烷層)液體;上層水相再用40 mL二氯甲烷萃取2次，過無水硫酸鈉收集合并二氯甲烷提取液，30℃水浴減壓濃縮，N2吹干，用2 mL色譜甲醇溶解殘留物，過0.22μm膜后，待測。

2.3 儀器方法

流動相。A液，0.1%甲酸水溶液;B液，乙腈，采 用 梯 度 淋 洗 (表 1)。流 速:0.3 mL·min-1。柱溫:30℃。進樣體積:10μL。炔草酯的保留時間約為2.0 min，炔草酸的保留時間約為1.5 min。

表1 超高效液相色譜洗脫梯度

質譜條件。質譜掃描方式:多離子反應檢測模式檢測 (MRM)。離子源:ESI(+);毛細管電壓:2.5 kV;錐孔電壓:30 V;離子源溫度:120℃;錐孔反吹氣流量:50 L·h-1;RF透鏡電壓:0.0 V;脫溶劑氣溫度:350℃;脫溶劑氣流量:500 L·h-1。

質量分析器。分析器1低端分辨率 LF Resolutin 1:13.5 V;高端分辨率HM Resolution 1:13.5 V;離子能量1:1.0;入口透鏡電壓:0 V;出口電壓:0 V;分析器2低端分辨率LF Resolutin 2:13.5 V;高端分辨率HM Resolutin 2:13.5 V;離子能量2:1.0。

炔草酯的 m/z 351.8/267.58，351.8/91.05為定性離子對，m/z 351.8/91.0為定量離子;炔草酸m/z 312.3/266.6，312.3/91.4為定性離子對，m/z 312.3/91.0為定量離子。

3 結果與討論

3.1 試驗結果

3.1.1 方法準確度和精密度

空白土壤的添加回收試驗結果表明 (表2)，當炔草酯添加濃度為0.01～1.0 mg·kg-1時，回收率最低為80.8%，最高為84.5%;炔草酸的回收率則為80.0%～87.7%。變異系數(shù)為1.8% ～5.5%，符合農藥殘留試驗準則［9］的相關要求。

表2 土壤中的添加回收率 %

3.1.2 方法靈敏度

依照上述樣品處理方法和儀器條件，炔草酯和炔草酸的最小檢出量分別為7.4×10-10g和2.9×10-11g，在土壤樣品中最低檢出濃度分別為0.01，0.001 mg·kg-1。

此方法符合農藥殘留檢測靈敏度的要求。

3.2 外標法定量

基質加標，外標法單點校正定量。用空白樣品按2.2樣品提取和凈化方法所得的溶液，將標樣稀釋成 0.001，0.050，0.100，0.500，1.000 mg·kg-1的標準工作液，分別進樣得到土壤基質加標準曲線，所得標準工作曲線均呈良好的線性。

3.3 炔草酯和炔草酸在麥田土壤和室內試驗土壤中的消解動態(tài)

由上述降解試驗可知 (圖1，b)，炔草酸降解較慢，因此又做了炔草酸在標準濃度 (10 mg·kg-1)下在室內試驗土壤中的降解試驗 (圖1，c)。除在每個三角瓶中準確加入100 mg·L-1的炔草酯溶液2 mL外，其他試驗操作同上。

田間試驗結果表明，炔草酯和炔草酸在土壤中的消解動力學曲線方程為:Ct=0.150e-0.08t，R2=0.900和Ct=0.152e-0.09t，R2=0.951;在室內試驗土壤降解試驗中，消解動力學曲線分別為:Ct=0.163e-0.277t， R2=0.852 和 Ct= 10.61e-0.049t，R2=0.975。

圖1 炔草酯在土壤 (a田間;b室內)和炔草酸 (c室內)中的消解動態(tài)曲線

炔草酯和炔草酸在麥田土壤中的半衰期T1/2分別為6.3 d和7.7 d，在室內試驗土壤中的半衰期T1/2分別為2.5 d和14.1 d。

4 小結

在分析方法研究中，對UPLC-MS/MS各項參數(shù)進行了優(yōu)化，顯著縮短儀器檢測時間。本文應用UPLC-MS/MS所建立的分析方法，其前處理步驟較QuEChERS方法［8］復雜，但考慮到農藥本身的特殊性，本試驗采用傳統(tǒng)的液-液分配［9］技術，這樣可以得到更高和更穩(wěn)定的回收率結果，保證了分析的準確性和可靠性。Sugata等［6］用液相色譜法分析炔草酸殘留量時，其最低檢測濃度為 0.25 mg·kg-1，每個樣品儀器分析時間為5 min。本文采用超高效液相色譜-串聯(lián)質譜法建立的分析方法，最低檢測濃度可達到0.01～0.001 mg·kg-1，且每個樣品儀器分析時間約為3 min。故本文采用的分析方法具有靈敏度高，分析時間短的特點。

消解動態(tài)研究結果表明，炔草酯和炔草酸在麥田土壤和室內試驗土壤中的殘留量隨采樣時間的延長而逐漸降低，消解動態(tài)曲線符合一級動力學方程。田間試驗結果表明，施藥當天采集的土壤樣品中炔草酸的含量不高，而在施藥1 d后達到最高，為0.225 mg·kg-1，其后又逐漸降低，呈現(xiàn)先升后降的趨勢，這可能是由于施藥后炔草酯在土壤中會轉化為炔草酸，導致其殘留量降低而炔草酸的含量會相對升高的原因。室內土壤降解試驗中，炔草酸的含量亦呈先升后降的趨勢，炔草酯的半衰期是2.5 d，這與Sugata等［6］報道的炔草酯在土壤中的半衰期為3.4 d的研究結果相差不大;從起始添加濃度為10 mg·kg-1的炔草酸的降解試驗可以得出，炔草酸的半衰期為14.1 d，根據文獻 ［10］，說明炔草酯和其代謝物炔草酸在土壤中屬于易降解農藥。由室內外試驗結果可知，炔草酸在室內土壤中的半衰期大于田間試驗的半衰期，這是由于室內外環(huán)境土壤溫度、水分、光照等因素的差異［11］引起的。

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