鄭蓓蓓，竇志英

UV法測(cè)定川楝子不同炮制品中總萜和東莨菪內(nèi)酯的含量*

鄭蓓蓓，竇志英

[目的]考察不同炮制方法對(duì)川楝子中有效成分的影響，為以后炮制工藝的優(yōu)化提供指導(dǎo)。[方法]以總萜和東莨菪內(nèi)酯含量為指標(biāo)，采用紫外分光光度法，分別來考察不同炮制方法對(duì)川楝子中有效成分的影響。[結(jié)果]各炮制品所含總萜含量與生品比較呈下降趨勢(shì)；而東莨菪內(nèi)酯含量與生品比較有上升的趨勢(shì)。[結(jié)論]本實(shí)驗(yàn)以總萜和東莨菪內(nèi)酯含量作為川楝子飲片品質(zhì)優(yōu)劣的評(píng)定，對(duì)川楝子生品及不同工藝炮制品進(jìn)行比較，在其生產(chǎn)與確保用藥安全方面都具有實(shí)際意義。

川楝子；總萜；東莨菪內(nèi)酯

川楝子為楝科植物川楝（Melia toosendan Sieb．et Zucc．）的果實(shí)[1]，性味苦，寒，有小毒，歸肝、小腸、膀胱經(jīng)，具有舒肝、行氣止痛、驅(qū)蟲的作用。臨床多用于胸脅、脘腹脹痛，疝痛，蟲積腹痛等癥[2]。川楝子生品有小毒，炮制以后能降低毒性，增強(qiáng)理氣止痛作用[3]，所以常炮制后用藥。川楝子的化學(xué)成分及其藥理作用研究較少，有效成分不明。三萜類為川楝子的主要成分，東莨菪內(nèi)酯為香豆素類化合物，是最新從川楝子中分離得到的活性成分。為了更有效的控制川楝子飲片質(zhì)量，使炮制工藝穩(wěn)定可控，本研究以總萜、東莨菪內(nèi)酯含量考察了川楝子的炮制工藝，研究川楝子炮制前后有效成分含量的變化。

1 儀器與試藥

SP-2102UV型UV可見分光光度計(jì)（上海光譜儀器有限公司）；食用醋；鹽；水為超純水；乙腈為色譜純；其余所有試劑為分析純。川楝素對(duì)照品購于成都曼思特生物科技有限公司（批號(hào)58812-37-6）；東莨菪內(nèi)酯對(duì)照品購于中國藥品生物制品檢定所（批號(hào)110768-200504）；川楝子購于天津市中藥飲片廠。

2 方法與結(jié)果

2.1 川楝子炮制品的制備 炒焦川楝子：取凈川楝子，置熱鍋中，用中火炒至表面焦黃色，斷面色加深為度，取出，放涼。醋炙川楝子：取凈川楝子加20%醋拌潤，待醋液吸盡后，文火炒干。鹽炙川楝子：取凈川楝子與鹽水拌勻，稍悶，待鹽水吸盡后，文火炒干。每100 kg川楝子用食鹽2 kg。

2.2 總萜含量測(cè)定

2.2.1 對(duì)照品溶液的配制 精密稱取川楝素對(duì)照品1.05 mg，置于10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，配制成0.105 mg/mL的川楝素對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的配制 精密稱取樣品粉末（過40目篩）1 g，置圓底燒瓶中，精密加入甲醇25 mL，稱定質(zhì)量，回流提取30 min，濾過，重復(fù)提取3次，合并濾液蒸干，甲醇復(fù)溶至10 mL的容量瓶中。

2.2.3 測(cè)定波長的選擇 取川楝素對(duì)照品溶液加顯色劑后（同測(cè)定方法項(xiàng)下方法），進(jìn)行光譜掃描，結(jié)果表明在535 nm處有最大吸收，多次重復(fù)，峰形一致，且陰性對(duì)照無干擾，故選擇535 nm為樣品的測(cè)定波長。

2.2.4 測(cè)定方法 香草醛-冰醋酸顯色法：精密吸取供試品溶液1 mL，稀釋100倍至磨口具塞試管中，水浴加熱揮干溶劑，加5%香草醛冰醋酸溶液（需新鮮配置）0.2 mL，高氯酸0.8 mL，于60℃恒溫水浴15 min，立即取出置冰水浴內(nèi)冷卻，加冰醋酸5.0 mL搖勻，以相應(yīng)試劑為空白，紫外分光光度儀535 nm處測(cè)定吸光度，計(jì)算總萜含量。

2.2.5 線性關(guān)系的考察 精密吸取上述對(duì)照品溶液 0.1、0.3、0.6、0.9、1.2、1.5 mL，分別置具塞試管中，按“供試品溶液的配制”下依法顯色操作，以試劑為空白進(jìn)行校正，在535 nm處測(cè)定吸光度。以吸光度（Y）為縱坐標(biāo)，濃度（X）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得Y贊＝2．673 1X＋0．006 5，r＝0．999 7（n＝6），線性范圍在0.010 5～0.157 5 mg，呈良好的線性關(guān)系。

2.2.6 精密度實(shí)驗(yàn) 精密吸取供試品溶液，連續(xù)測(cè)定6次，RSD為0.083%，該方法的精密度良好。

2.2.7 重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn) 取同一批次樣品6份，依法平行測(cè)定6次，結(jié)果RSD為2.741%。

2.2.8 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取同一顯色后的樣品，每隔0.5 h測(cè)定1次，共測(cè)6次，結(jié)果在3 h內(nèi)，RSD為1.425%，其吸收度值基本穩(wěn)定。

2.2.9 回收率實(shí)驗(yàn) 精密稱取已知含量（3．42%）的川楝子粉末0.5 g，然后分別精密加入川楝素對(duì)照品溶液（0．105 mg/mL），按“供試品溶液的配制”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，依法操作測(cè)定吸光度，計(jì)算，結(jié)果表明，本方法回收率良好。見表1。

表1 回收率測(cè)定結(jié)果

2.3 東莨菪內(nèi)酯含量測(cè)定

2.3.1 對(duì)照品溶液的配制 精密稱取東莨菪內(nèi)酯對(duì)照品10.8 mg，置于50 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，配制成0.216 mg/mL的東莨菪內(nèi)酯對(duì)照品溶液。2.3.2 供試品溶液的配制 精密稱取樣品粉末（過40目篩）1 g，置圓底燒瓶中，精密加入甲醇25 mL，稱定質(zhì)量，在一定條件下回流提取30 min，濾過，重復(fù)提取3次，合并濾液蒸干，甲醇溶解定容至10 mL的容量瓶中，搖勻，即得。

2.3.3 測(cè)定波長的選擇 將東莨菪內(nèi)酯對(duì)照品溶液于紫外分光光度計(jì)上于400～800 nm波長范圍內(nèi)掃描，結(jié)果分別在208、227、343 nm處有最大吸收，考慮到溶劑末端吸收的干擾，故選擇343 nm為測(cè)定波長。

2.3.4 線性關(guān)系的考察 精密吸取上述對(duì)照品溶液 0.1、0.3、0.6、0.9、1.2、1.5mL，分別置于 10mL 容量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻，隨行空白，在343 nm處測(cè)定吸光度。以吸光度（Y）為縱坐標(biāo)，濃度（X）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得Y贊=11.754X+0.008 4，r=0.999 5（n＝6），線性范圍在 0.002 16～0.032 4 mg 呈良好的線性的關(guān)系。

2.3.5 精密度實(shí)驗(yàn) 精密吸取供試品溶液，連續(xù)測(cè)定6次，RSD為0.412%，方法的精密度良好。

2.3.6 重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn) 取同一批次樣品6份，依法平行測(cè)定6次，結(jié)果RSD為2.971%。

2.3.7 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取同一樣品，每隔0.5 h測(cè)定1次，共測(cè)6次結(jié)果在3 h內(nèi)，RSD為3.709%，其吸收度值基本穩(wěn)定。

2.3.8 回收率實(shí)驗(yàn) 精密稱取已知含量（0．577%）的川楝子粉末0.5 g，然后分別精密加入東莨菪內(nèi)酯對(duì)照品溶液（0．216 mg/mL），按“供試品溶液的配制”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，依法操作測(cè)定吸光度，計(jì)算，見表2。結(jié)果表明，本方法回收率良好。

表2 回收率測(cè)定結(jié)果

2.3.9 樣品的含量測(cè)定 取各炮制品供試溶液，測(cè)定其含量，見表3。

表3 炮制品中總萜和東莨菪內(nèi)酯的含量比較（n＝3）%

3 討論

3.1 指標(biāo)成分的選擇 川楝子中的主要活性成分為四環(huán)三萜類化合物，且含量最高。東莨菪內(nèi)酯為香豆素類化合物，是最新從川楝子中分離得到的活性成分，藥效研究表明，該成分具有抗炎止痛作用，該成分含量的降低，將直接導(dǎo)致藥效的降低。因此，本實(shí)驗(yàn)選擇總萜和東莨菪內(nèi)酯為指標(biāo)成分分別來考察不同炮制方法對(duì)川楝子中有效成分的影響。

3.2 實(shí)驗(yàn)條件的考察 實(shí)驗(yàn)中分別考察了超聲提取、加熱回流、索氏提取3種方法的提取效果，以回流提取法的總萜和東莨菪內(nèi)酯提取效率最高。而回流提取法中，又分別比較了不同的溶劑(水、甲醇、乙醇、乙酸乙酯等)、不同的提取時(shí)間、溶劑的不同體積倍量、提取次數(shù)等的提取效果，實(shí)驗(yàn)表明以25倍量的甲醇為提取溶劑，提取30 min，提取3次可將川楝子中的總萜和東莨菪內(nèi)酯基本提取完全。

3.3 總萜含量測(cè)定 結(jié)果可知，總萜的含量順序?yàn)椋荷罚境雌罚钧}炙品＞醋炙品，各炮制品中總萜含量均低于生品。醋炙品與鹽炙品的總萜含量相對(duì)較低，與其炮制過程中，長時(shí)間悶潤需較長時(shí)間受熱以干燥，從而導(dǎo)致成分損失有關(guān)。由東莨菪內(nèi)酯含量測(cè)定結(jié)果可知，東莨菪內(nèi)酯的含量順序?yàn)椋撼雌罚钧}炙品＞生品＞醋炙品，炒品中東莨菪內(nèi)酯含量與生品比較有顯著性升高的變化，鹽炙品與生品比較含量有升高趨勢(shì)，但沒有顯著的變化，而醋炙品中東莨菪內(nèi)酯的含量最低，可能的原因是在高溫下，醋酸導(dǎo)致內(nèi)酯開環(huán)，含量下降。

本實(shí)驗(yàn)以總萜和東莨菪內(nèi)酯含量作為川楝子飲片品質(zhì)優(yōu)劣的評(píng)定，以川楝素的最大限量作為川楝子飲片的毒性指標(biāo)，對(duì)川楝子生品及不同工藝炮制品進(jìn)行比較，在其生產(chǎn)與確保用藥安全方面都具有實(shí)際意義。

[1] 中華人民共和國藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典一部[S].北京：北京醫(yī)藥科技出版社，2010.

[2] Huang RC,Okamura H,Iwagawa T,et al.The stuctures of Azedanachirs,Limonol Antifeedamts from Chinese Melia azedanachLinn[J].BullChemSocJpn,1994,67(9):2468-2472.

[3] 葉定江.中藥炮制學(xué)[M]．上海：上海科技出版社，1996：95.

Content determination of total terpene and scopoletin in different processed product of Fructus toosendan by UV method

ZHENG Bei-bei,DOU Zhi-ying
（Tianjin University of TCM,Tianjin 300193,China）

[Objective]To study the effect of different processing methods on the effective components in Fructus toosendan and provide a guidance for subsequent processing technology optimization.[Methods]Taking total terpene and scopoletin contents as the indexes and using ultraviolet spectrophotometry the effect of different processing methods on the effective components in Fructus toosendan was studied respectively.[Results]Compared with raw materials,the content of total terpene in processed products was decreased;while the content of scopoletin had a rising trend.[Conclusion]In this experiment,taking total terpene and scopoletin contents as the indexes of quality assessment in Fructus toosendan their contents were compared between raw materials and different processed product of Fructus toosendan.It has some practical significances in its production and can ensure the safety of medication.

fructus toosendan;total terpene;scopoletin

R285

A

1673－9043（2012）03－0160-03

國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（81073053）。

300193 天津中醫(yī)藥大學(xué)

鄭蓓蓓（1985-），女，碩士研究生，研究方向?yàn)橹兴幩幬锎x研究。

*通訊作者：竇志英。

2012-04-24）