王昌壁，許 慧，唐 燕

(江蘇省張家港市中醫(yī)醫(yī)院檢驗科 215600)

尿液有形成分分析是臨床檢驗的重要組成部分，尤其是紅細胞的檢測，對泌尿系統(tǒng)疾病的診斷、輔助診斷及治療有重要意義。以往對于它的檢測是采用傳統(tǒng)的顯微鏡，但其效率低下，結(jié)果易受技術人員的水平和主觀因素的影響；隨后出現(xiàn)了干化學技術，因其靈敏、快速而逐漸取代了顯微鏡；近年來又有了利用流式細胞記數(shù)法(FCM)技術的UF-1000i尿細胞分析儀(簡稱UF-1000i)，因其自動化程度高、精密度好，被廣泛應用于臨床檢驗。但在實際的工作中，由于不同方法的過篩標準不同及尿液有形成分的復雜，往往會出現(xiàn)一些假陽(陰)性結(jié)果，針對這一情況，作者對1 297例尿液標本運用UF-1000i、H-800干化學分析儀(簡稱H-800)及顯微鏡3種方法進行測定并比較分析，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 (1) 標本來源：收集本院2011年10～11月共1 297例住院患者晨尿20 mL，平均分兩管，一份用于UF-1000i檢測，另一份用于H-800和顯微鏡檢測。(2)儀器與試劑：UF-1000i全自動尿細胞分析儀(日本希森美康株式會社)及其配套的試劑和質(zhì)控品；H-800(長春迪瑞醫(yī)療科技股份有限公司)及其配套的試紙條和質(zhì)控品；Olympus顯微鏡(日本奧林巴斯株式會社)；80-2臺式低速離心機(上海醫(yī)療器械有限公司)；刻度離心管。

1.2方法

1.2.1操作方法 (1)UF-1000i和H-800：嚴格按照操作說明每天對其進行清洗、調(diào)試和配套質(zhì)控，確保其正確測試。(2)顯微鏡鏡檢：根據(jù)第3版《全國臨床檢驗操作規(guī)程》中顯微鏡尿沉渣操作程序進行，對進行H-800檢測后的標本混勻后倒入刻度離心管，1 500 r/min,相對離心力400 g，時間5 min，棄上清液，留0.2 mL沉渣輕輕混勻后鏡檢。

1.2.2結(jié)果判定 (1)UF-1000i正常參考值：女性紅細胞 0～25個/μL，男性紅細胞 0～15個/μL，超過此上限為陽性；(2)H-800結(jié)果為：-、±、+、++、+++，檢測以+以上為陽性；(3)顯微鏡：紅細胞大于或等于3個/HP為陽性。

1.3統(tǒng)計學處理 采用SPSS13.0 統(tǒng)計軟件對所有數(shù)據(jù)進行分析，配對計數(shù)資料采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.13種方法檢測尿液紅細胞結(jié)果比較 以顯微鏡檢測結(jié)果作為尿液有形成分檢測的金標準分別對UF-1000i和H-800的檢測結(jié)果評價。UF-1000i分析尿液紅細胞陽性符合率為94.24%，陰性符合率為95.68%，假陽性率為4.32%，假陰性率為5.76%，總符合率為95.30%，二者結(jié)果差異有統(tǒng)計學意義(χ2=6.56，P<0.05)；H-800分析尿液紅細胞陽性符合率為95.68%,陰性符合率為97.16%，假陽性率為2.84%，假陰性率為4.32%，總符合率為98.84%，二者結(jié)果差異無統(tǒng)計學意義(χ2=2.88,P>0.05)；UF-1000i與H-800結(jié)果差異無統(tǒng)計學意義(χ2=0.98,P>0.05)，見表1。

表1 3種方法檢測尿液紅細胞結(jié)果比較(n)

2.23種方法檢測尿液中紅細胞結(jié)果分析 見表2。

表2 3種方法檢測尿液紅細胞結(jié)果分析

2.3UF-1000i 、H-800檢測尿液紅細胞假陽性及假陰性結(jié)果分析 UF-1000i的檢測結(jié)果中紅細胞假陽性41例，其中草酸鈣結(jié)晶29例，尿酸鹽結(jié)晶3例，磷酸鹽結(jié)晶1例，細菌3例，(類)酵母菌4例，精子1例；紅細胞假陰性20例，其中紅細胞碎片3例，影紅細胞6例，未知原因11例； H-800的檢測結(jié)果中紅細胞假陽性27例，其中血紅蛋白尿4例，細菌尿3例，腎病患者15例，pH>8.0 3例，未知原因2例；紅細胞假陰性15例，其中抗壞血酸大于5.7 mmol/L 5例，尿比重(SG)>1.030 4例，尿pH<5.0 4例，受藥物影響2例。

3 討 論

3.1UF-1000i使用的是FCM技術。用激光束照射染色后在鞘流貫流分析池中形成的鞘流樣本，并通過對各粒子產(chǎn)生的前向散射光、側(cè)向散射光以及側(cè)向熒光信號轉(zhuǎn)換成的光電信號來進行綜合分析細胞形態(tài)、細胞橫截面積、染色片段的長度、細胞容積等信息，繪出散點圖，得出計數(shù)結(jié)果，并通過對每一個細胞信號和波形的特征來對其分類。對于紅細胞則是利用細胞膜和核酸親和力不一樣的兩種熒光染料進行染色，紅細胞僅細胞膜被染色，儀器根據(jù)熒光強度低和前向散射光強度低將其歸為紅細胞[1]。因此凡是影響上述二者的因素都直接導致了結(jié)果的假性增高。從表1得到UF-1000i與顯微鏡的結(jié)果差異有統(tǒng)計學意義(χ2=6.56，P<0.05)，國外也有一些這方面的報道[2-3]。本文的假陽性率為4.32%，產(chǎn)生的原因有：(1)草酸鈣結(jié)晶29例，因其形態(tài)大小與紅細胞相似，在散點圖中與紅細胞交叉分布形成干擾；(2)集聚成團的非晶形尿酸鹽結(jié)晶、磷酸鹽結(jié)晶4例，與紅細胞散點出現(xiàn)交叉，當其濃度增高時，會對紅細胞產(chǎn)生影響[4]；(3)細菌3例，染色后熒光強度和前向散射光強度都低，當尿中細菌超過一定量聚集時會被誤認為紅細胞[5-6]；(4)酵母菌、類酵母菌4例，精子1例，其形態(tài)大小與紅細胞類似，造成儀器判別有誤,有文獻資料也證實了這一點[7-8]。而對于假陰性(5.76%)的產(chǎn)生則是由于：(1)紅細胞碎片3例，影紅細胞6例[9]，后也經(jīng)過干化學驗證；(2)未知原因11例，可能是患者在治療過程中使用了能產(chǎn)生熒光染料類似作用的藥物，使紅細胞不易被染液染色或被其他染料染色，從而影響計數(shù)[1]。

3.2H-800的原理是利用紅細胞內(nèi)的血紅蛋白中的亞鐵血紅素有過氧化物酶樣活性，使過氧化氫茴香素分解產(chǎn)生氧離子，氧化四甲基聯(lián)苯胺呈藍色來進行測定。所以其結(jié)果與尿中過氧化酶類活性有關，本實驗結(jié)果與顯微鏡對比，差異無統(tǒng)計學意義(χ2=2.88,P>0.05)。從表1中得到H-800的假陽性率為2.84%，產(chǎn)生的原因可能為：(1)血紅蛋白尿4例，2例為濃茶色，2例為醬油色,H-800蛋白定性的結(jié)果均為“+++”；(2)細菌尿3例，因為大多革蘭陰性桿菌和某些革蘭陽性球菌可釋放過氧化酶活性物質(zhì)或由于細菌代謝繁殖過程中合成的觸酶、過氧化物酶和超過氧化物歧化酶，這些物質(zhì)和酶都能使試帶中的過氧化氫分解出游離氧，使色源呈色而出現(xiàn)假陽性[10]；(3)腎病患者15例，3例pH>8.0 ，因腎病患者的紅細胞在腎臟或泌尿道破壞及尿液pH偏高均易造成紅細胞破壞，血紅蛋白釋放入尿中；(4)未知原因2例，可能是尿液中有對熱不穩(wěn)定的酶或試紙條被污染、保存不當、操作不正確等。而對于假陰性(4.32%)的產(chǎn)生可能是：(1)5例抗壞血酸大于5.7 mmol/L，因高濃度的抗壞血酸可起競爭性抑制反應；(2)4例尿SG>1.030；(3)4例尿pH<5.0；(4)2例可能為某些藥物影響，如利福平可降低紅細胞的反應性，使結(jié)果偏低一個陽性等級。

綜上所述，UF-1000i和H-800作為自動化儀器，其標準化提高了結(jié)果的可靠性，可作為一個常規(guī)篩查的重要手段而又不可以單獨完全依賴，二者在聯(lián)合應用中可以減輕顯微鏡鏡檢的工作量、降低使用單一儀器造成的假陽性和假陰性率、降低人為誤差，在臨床檢驗中具有較高的應用價值。但同時也必須認識到其中假陽(陰)性的存在，必要時還是要結(jié)合顯微鏡以保證尿液分析的精確度[11-12],為臨床提供快速、準確的數(shù)據(jù)。

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