侯華鵬，馬 睿，張文兵，麥康森

（中國海洋大學海水養(yǎng)殖教育部重點實驗室，山東青島266003）

飼料中過量添加晶體蛋氨酸和蛋氨酸羥基類似物對大菱鲆生長、飼料利用和抗氧化反應的影響＊

侯華鵬，馬 睿，張文兵＊＊，麥康森

（中國海洋大學海水養(yǎng)殖教育部重點實驗室，山東青島266003）

以初始體質(zhì)量為（5.49±0.01）g的大菱鲆幼魚為實驗對象，探討飼料中過量添加晶體蛋氨酸或蛋氨酸羥基類似物對大菱鲆生長、飼料利用和抗氧化反應的影響。以白魚粉和豆粕為主要蛋白源，飼料中同時添加0.25%DL－蛋氨酸和0.3%蛋氨酸羥基類似物鈣鹽（MHA）作為對照，在此基礎上分別添加0.5%DL－蛋氨酸、1.25%DL－蛋氨酸、0.59%MHA、1.49%MHA、1.25%DL－蛋氨酸＋0.85%檸檬酸鈣，配制出6種實驗飼料，使飼料中蛋氨酸和蛋氨酸羥基類似物（H MTBA）含量分別是1.35%、1.83%、2.50%、1.45%、1.37%、2.51%和0.22%、0.22%、0.22%、0.63%、1.38%、0.29%。養(yǎng)殖試驗在室內(nèi)流水系統(tǒng)中進行，持續(xù)10周，每個處理設5個重復，每個重復放養(yǎng)大菱鲆幼魚30尾。結果顯示，過量添加DL－蛋氨酸和HMTBA對大菱鲆幼魚生長無顯著影響（P＞0.05）。過量添加DL－蛋氨酸和HMTBA對大菱鲆體組分、肥滿度（CF）、臟體比（VSI）和肝體比（HSI）均無顯著影響（P＞0.05），但檸檬酸鈣添加組（處理6）體蛋白含量與基礎飼料組相比顯著降低（P＜0.05）。對大菱鲆肝臟過氧化氫酶（CAT）、超氧化物歧化酶（SOD）和肝臟硫代巴比妥酸反應產(chǎn)物量（TBARS）進行測定，各處理組間均無顯著性差異（P＞0.05）。結果顯示，在該實驗條件下，過量添加晶體蛋氨酸（1.31～1.73倍）和HMTBA（1.32～1.75倍）對大菱鲆幼魚的生長、飼料利用和抗氧化反應沒有顯著影響。

大菱鲆；DL－蛋氨酸；蛋氨酸羥基類似物；生長性能；抗氧化

魚粉是飼料工業(yè)生產(chǎn)中十分重要的蛋白來源，但目前由于各種原因造成供需矛盾突出，已經(jīng)成為一種世界范圍內(nèi)越來越短缺的資源［1］。因此，尋求魚粉替代品的研究已成為水產(chǎn)飼料的一個重要課題［2］。相對動物蛋白而言，植物蛋白源價格低廉且來源廣泛，是替代魚粉的理想蛋白源［3］。但是因為大部分植物蛋白源都不能滿足魚體必需氨基酸的需要，因此以植物蛋白源為基礎料的飼料需要補充部分外源氨基酸以滿足必需氨基酸的需要［4－6］。

蛋氨酸是魚類飼料中典型的限制性氨基酸，屬含硫氨基酸，不但參與體內(nèi)蛋白質(zhì)合成，為S－腺苷蛋氨酸、肌酸、膽堿等物質(zhì)的合成提供甲基；而且還參與體內(nèi)各種含硫化合物如谷胱甘肽、牛磺酸等的合成。作為必需氨基酸，飼料中蛋氨酸缺乏時會導致魚類攝食減少、生長受阻、飼料利用率和蛋白沉積率降低，以及白內(nèi)障的發(fā)生和死亡率的增加［7－16］。同時，研究表明在蛋氨酸缺乏的基礎飼料中逐漸提高蛋氨酸的添加量，牙鲆、北極紅點鮭、大西洋鮭和斜帶石斑魚的增重率和生長速度逐漸提高［15，17－19］。因此，在飼料中添加蛋氨酸是解決植物蛋白中蛋氨酸缺乏的有效途徑。

目前，關于水生動物對晶體氨基酸的利用有一些研究，比較一致的看法是，鮭鱒魚類能有效利用飼料中添加的外源晶體氨基酸，而蝦類及無胃的鯉科魚類對飼料中添加的晶體氨基酸不能利用或利用效果不明顯［20］。Helena的研究表明大菱鲆幼魚飼料中19%的完整蛋白可以被晶體氨基酸替代而對魚體生長沒有顯著影響［21］。對其它一些海水魚類的研究也表明，飼料中補充晶體蛋氨酸，可有效地促進其生長［22－24］。另一方面，晶體氨基酸的利用效果與其添加形式有關。在飼料工業(yè)中廣泛使用的蛋氨酸添加劑主要有2類：一類是L－蛋氨酸或DL－蛋氨酸，另一類是商品名為MHA的DL－蛋氨酸羥基類似物（4－甲硫基－2－羥基丁酸，HMTBA）及其鈣鹽［17］。L－蛋氨酸、DL－蛋氨酸和蛋氨酸羥基類似物（HMTBA）等外來蛋氨酸源的生物學效價各有不同。Keembiyehett和Gatlin［25］對雜交鱸魚（Moronechrysops♀×M.saxatilis♂）的試驗表明，飼料中添加L－蛋氨酸、DL－蛋氨酸、N－乙酰基－DL－蛋氨酸后魚體增重率、攝食率和蛋白質(zhì)效率均明顯升高，而HMTBA促進生長的效率為L－蛋氨酸的75%。同時，Kelly等［26］對鱸魚（Moronechrysops♀×M.saxatilis♂）的研究表明以增重率作為評價指標，HMTBA促進生長的效率為L－蛋氨酸的83%。Goff和Gatlin［27］研究表明以眼斑擬石首魚（Sciaenops ocellata）生長指標作為評價依據(jù)，HMTBA具有和L－蛋氨酸相同的促生長作用。因此，晶體蛋氨酸和HMTBA均可以有效改善蛋氨酸和胱氨酸缺乏的飼料［28］。

大菱鲆（Scophthatmus maximus L.）在分類上屬于硬骨魚綱（Osleichthyes）、鰈形目（Pleuronectiformes）、鰈亞目（Pleuronectoidei）、鲆科（Bothidae）、菱鲆屬（Scophthalmus），為原產(chǎn)于歐洲的重要海水名貴養(yǎng)殖良種［29］，是世界市場公認的優(yōu)質(zhì)比目魚類之一。1992年引進我國，在國內(nèi)俗稱“多寶魚”，具有經(jīng)濟價值高、生長迅速、餌料轉(zhuǎn)換率高、活動量小、耗氧量低、適合密養(yǎng)等特點［30］。現(xiàn)已迅速發(fā)展成為我國北方優(yōu)勢養(yǎng)殖魚種，取得了良好的經(jīng)濟和社會效益。

魚類不但對氨基酸總量有一定的需求，而且要求氨基酸平衡。如果飼料中某種必需氨基酸缺乏或過量，均會產(chǎn)生不良影響。飼料中蛋氨酸過量引起的生長和飼料利用下降有很多報道［31－32］。但也有一些研究則表明隨著飼料中蛋氨酸過量添加，魚類生長相對穩(wěn)定［33－35］。目前關于大菱鲆氨基酸的需求已有部分研究［36］，并以飼料系數(shù)為評判標準確定大菱鲆幼魚的蛋氨酸需要量為1.52%，占飼料蛋白質(zhì)的3.20%。本研究的目的是通過分析飼料中過量添加晶體蛋氨酸和HMTBA對大菱鲆幼魚生長、飼料利用和抗氧化反應的影響，為這2種營養(yǎng)性添加劑在大菱鲆飼料中的正確使用提供基礎數(shù)據(jù)。

表1 飼料配方組成（%干物質(zhì)）Table 1 Composition of the experimental diets（%dry matter）

1 材料與方法

1.1 飼料配方和制作

實驗飼料配方設計和成分見表1?；A飼料以白魚粉、豆粕、啤酒酵母和小麥粉為蛋白來源；以魚油、大豆卵磷脂為脂肪來源；同時以大菱鲆魚體氨基酸組成［37］為依據(jù)添加部分晶體氨基酸（0.25%DL－蛋氨酸、0.3%MHA、0.5%L－賴氨酸和0.3%L－蘇氨酸）（見表1）。處理1飼料中粗蛋白和粗脂肪含量分別為46.44%和11.37%，滿足大菱鲆基本營養(yǎng)需求［38］。另外5組實驗飼料是在處理1的基礎上分別添加0.5%DL－蛋氨酸、1.25%DL－蛋氨酸、0.59%MHA、1.49%MHA、1.25%DL－蛋氨酸＋0.85%檸檬酸鈣（見表1）。用全自動氨基酸分析儀（Biochrom 30，England）測得從處理1到處理6飼料中蛋氨酸的實際含量分別為1.35%、1.83%、2.50%、1.45%、1.37%、2.51%；用高效液相色譜儀（HPLC，HP1100，USA）測定飼料中HMTBA的實際值分別為：0.22%、0.22%、0.22%、0.63%、1.38%、0.29%。

飼料原料粉碎過篩后，按逐級放大法混合均勻，加魚油攪拌均勻后加水制成有一定硬度的面團，用雙螺桿擠壓機（F－26（Ⅱ），華南理工大學）壓出顆粒（1.5 mm×2.0 mm）飼料，50℃烘干后－20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 動物飼養(yǎng)管理

大菱鲆幼魚選用煙臺海陽市黃海水產(chǎn)有限公司當年孵化的同批魚苗。實驗開始前魚苗在室內(nèi)流水養(yǎng)殖系統(tǒng)內(nèi)暫養(yǎng)，使用處理1飼料馴化2周使其適應實驗飼料。馴化結束后停食24 h，然后挑選體格健壯，規(guī)格均一的大菱鲆幼魚（5.49±0.01）g進行分組。

實驗設6個處理，每個處理5個重復，每個重復放養(yǎng)30尾大菱鲆。實驗期間每日飽食投喂2次（上午08：00，下午19：00），每日投喂后吸污及換水2次以保持水質(zhì)，同時收集殘餌烘干稱重以獲得飼料攝食量。實驗期間記錄死魚數(shù)量及其體質(zhì)量。實驗采用室內(nèi)流水系統(tǒng)，每個養(yǎng)殖桶為300 L；持續(xù)充氣，流水速度不小于2 L／min，水溫19～24℃，鹽度24～26‰，溶氧含量≥7 mg／L，p H＝7.9～8.05，養(yǎng)殖實驗持續(xù)10周。

1.3 取樣及樣品分析

實驗開始前隨機取6尾魚用作樣品待測。實驗結束時，停喂實驗魚24 h，對每桶實驗魚進行記數(shù)和稱重。然后每桶隨機取15尾，6尾用于測定魚體組分，－20℃保存；3尾分別測其體質(zhì)量、體長、內(nèi)臟團質(zhì)量和肝臟質(zhì)量；3尾在冰上迅速解剖，取肝臟液氮速凍，后轉(zhuǎn)到－80℃保存。

飼料及魚體樣品均按照AOAC［39］方法進行生化組成分析。其中，水分含量測定于105℃烘至恒重；采用凱氏定氮法測定樣品粗蛋白含量；采用索氏抽提法，以乙醚為抽提劑測定粗脂肪含量；灰分測定于馬福爐中550℃下灼燒至恒重。

肝臟過氧化氫酶（CAT）和超氧化物歧化酶（SOD）的活性采用試劑盒測定（南京建成生物工程研究所）。肝臟硫代巴比妥酸反應產(chǎn)物值（TBARS）的測定采用硫代巴比妥酸反應物試劑盒（DTBA－100，博世生物技術有限公司）。

1.4 計算公式

存活率（Survival rate，%）＝100×終末尾數(shù)／初始尾數(shù)

特定生長率（Specific growth rate，%／d）＝100×（ln終末體質(zhì)量－ln初始體質(zhì)量）／試驗天數(shù)

飼料干物質(zhì)轉(zhuǎn)化率（Feed conversion efficiency，%）＝100×魚體質(zhì)量增加量（g）／飼料消耗量（g）

蛋白質(zhì)效率（Protein efficiency ratio）＝魚體質(zhì)量增加量（g）／蛋白質(zhì)攝入量（g）

蛋白質(zhì)沉積效率（Productive protein value，%）＝100×體組織蛋白質(zhì)沉積量（g）／蛋白質(zhì)攝入量（g）

攝食率（Feeding intake，%／d）＝100×飼料消耗量（g）×2／（初始體質(zhì)量（g）＋終末體質(zhì)量（g））／試驗天數(shù)（d）

肥滿度（Condition factor，g／cm3）＝100×魚體質(zhì)量（g）／（體長×體長×體長）（cm3）

肝指數(shù)（Hepatosomatic index，%）＝100×肝臟質(zhì)量（g）／魚體質(zhì)量（g）

內(nèi)臟指數(shù)（Viscerosomatic index，%）＝100×內(nèi)臟團質(zhì)量（g）／魚體質(zhì)量（g）

1.5 數(shù)據(jù)分析方法

實驗所得數(shù)據(jù)用平均值±標準誤表示，所有數(shù)據(jù)用SPSS16.0軟件進行單因數(shù)方差（ANOVA）分析。如果差異顯著（P＜0.05），再進行Tukey多重比較（Tukey HSD test）。

2 實驗結果

2.1 飼料中過量添加蛋氨酸和HMTBA對大菱鲆存活和生長性能的影響

飼料中添加過量晶體蛋氨酸和HMTBA對大菱鲆存活率（SR）、攝食率（FI）、飼料干物質(zhì)轉(zhuǎn)化率（FCE）、特定生長率（SGR）、蛋白質(zhì)效率（PER）和蛋白質(zhì)沉積效率（PPV）沒有顯著影響（P＞0.05），但FI、SGR和PPV隨著飼料蛋氨酸的添加量的增加（處理1、處理2和處理3）和HMTBA添加量的增加（處理1、處理4和處理5）有變小的趨勢（見表2）。處理3組的大菱鲆SR、SGR和PER最低，在此基礎上添加0.85%檸檬酸鈣（處理6）后這些指標均有所提高。

表2 不同實驗飼料對大菱鲆攝食率、特定生長率、飼料干物質(zhì)轉(zhuǎn)化率、蛋白質(zhì)效率、蛋白質(zhì)沉積效率和存活率的影響①Table 2 Feed intake（FI），specific growth rate（SGR），feed conversation efficiency（FCE），protein efficiency ratio（PER），productive protein value（PPV）and survival rate（SR）of turbot fed different experimental diets

2.2 飼料中過量添加蛋氨酸和HMTBA對大菱鲆魚體常規(guī)組成的影響

如表3所示，飼料中過量添加晶體蛋氨酸和HMTBA對大菱鲆魚體蛋白、脂肪、灰分、水分組成沒有顯著性影響（P＞0.05）。但隨著晶體蛋氨酸和HMTBA添加量的增加，魚體蛋白和脂肪含量均有下降的趨勢，而灰分和水分含量有上升的趨勢。處理6組魚體粗蛋白含量最低，與處理1和處理2組有顯著差異（P＜0.05），與處理3、處理4和處理5組無顯著差異。

表3 不同實驗飼料對大菱鲆魚體常規(guī)組成的影響Table 3 Final carcass composition of turbot fed different experimental diets

表4 不同實驗飼料對大菱鲆魚體肥滿度、臟體比和肝體比的影響Table 4 Condition factor（CF），visceral indexes（VSI）and hepatosomatic indexes（HSI）of turbot fed different experimental diets

2.3 飼料中過量添加蛋氨酸和HMTBA對大菱鲆形體指標的影響

如表4所示，飼料中過量添加晶體蛋氨酸和HMTBA對大菱鲆肥滿度（CF）、臟體比（VSI）和肝體比（HSI）等形體指標沒有顯著性影響（P＞0.05），但大菱鲆VSI和HSI隨蛋氨酸添加量的增加（處理1、處理2和處理3）和HMTBA添加量的增加（處理1、處理4和處理5）均有下降的趨勢。

2.4 飼料中過量添加蛋氨酸和HMTBA對大菱鲆肝臟抗氧化反應的影響

如表5所示，飼料中過量添加晶體蛋氨酸和HMTBA對肝臟過氧化氫酶（CAT）、超氧化物歧化酶（SOD）和硫代巴比妥酸反應產(chǎn)物值（TBARS）沒有顯著影響（P＞0.05），在處理3組大菱鲆肝臟CAT活力和TBARS值最低。

表5 不同實驗飼料對大菱鲆肝臟抗氧化反應的影響Table 5 Antioxidant responses in liver of turbot fed different experimental diets

3 討論

3.1 飼料中過量添加蛋氨酸和HMTBA對大菱鲆存活和生長性能的影響

大量研究表明，當飼料中蛋氨酸含量在一定程度上超過其最適需求量后，有些魚類生長相對穩(wěn)定，沒有受到顯著的影響［17，33－35］，但也有些魚類生長顯著下降［18，40］。朱旺明等［41］對歐洲鰻（Anguilla anguilla）的研究表明當?shù)鞍彼崴礁哂谡Ｐ枰浚ㄗ钸m量的1.24倍）時，增重和SGR顯著降低；Ahmed等［42］對印度鯉魚（Cirrhinus mrigala）的研究表明，與飼料蛋氨酸水平為1%組相比較，當?shù)鞍彼崴綖?%（最適量的1.67倍）時，印度鯉魚的增重、SGR、飼料系數(shù)和PER有顯著差異：增重降低了53.59%，SGR降低了42.21%，飼料系數(shù)增加了118.62%，PER降低了54.19%。Zhou等［43］對軍曹魚（Rachycentron canadum）的研究表明當飼料蛋氨酸含量從1.05%增加到1.68%（最適量的1.41倍）時，增重降低了32.50%，SGR降低了16.30%，飼料系數(shù)提高了52.04%，PER降低了35%。而Twibell等［12］對黃鱸（Perca flavescens）的研究，Alam等［17］對牙鲆（Paralichthys olivaceus）的研究，Luo等［19］對斜帶石斑魚（Epinephelus coioides）的研究均表明飼料中過量添加晶體蛋氨酸（最適量的1.36～1.61倍）對實驗動物的生長和飼料利用沒有顯著影響。出現(xiàn)上述現(xiàn)象的一個重要的原因可能是不同魚類對飼料中過量蛋氨酸（最適量的1.24～1.67倍）的耐受量不同。本研究結果表明隨著飼料中晶體蛋氨酸的過量添加（1.31～1.73倍），大菱鲆的存活率、SGR、PER和PPV沒有受到顯著影響，但有下降的趨勢，這和對牙鲆和斜帶石斑魚的研究所得結果一致。

過量添加HMTBA組（處理4和處理5）大菱鲆與基礎飼料組相比，存活和生長指標均無顯著差異。與基礎飼料組相比，處理3組和處理5組造成大菱鲆增重下降的幅度分別為11.86%和5.67%；SGR的下降幅度分別為7.08%和3.64%?？梢娫谙嗤酿B(yǎng)殖環(huán)境中，飼料中過量蛋氨酸羥基類似物（1.32～1.75倍）對大菱鲆造成的負面影響略低于過量晶體蛋氨酸。

3.2 飼料中過量添加蛋氨酸和HMTBA對大菱鲆魚體組成和形體指標的影響

關于飼料中過量蛋氨酸對魚體組成和形體指標的影響，報道不一致。歐洲鰻飼料蛋氨酸過量，體脂肪含量顯著降低，體蛋白和灰分含量不受影響［41］；印度鯉魚飼料中蛋氨酸過量，體蛋白含量顯著降低，體脂肪和灰分不受影響［42］；北極紅點鮭飼料中過量添加蛋氨酸對魚體粗蛋白、脂肪、灰分和水分無顯著性影響［15］；牙鲆飼料過量添加蛋氨酸對魚體粗蛋白、脂肪、灰分和水分無顯著性影響［17］；軍曹魚飼料過量添加蛋氨酸對魚體成分、肥滿度、臟體比和肝體比均無影響［43］；斜帶石斑魚飼料過量添加蛋氨酸對魚體體蛋白、灰分、水分、肥滿度和臟體比無影響，但顯著影響魚體體脂肪和肝體比［19］。本研究中過量添加晶體蛋氨酸和HMTBA對魚體組成、肥滿度、臟體比和肝體比無顯著性影響，但魚體體蛋白、體脂肪、臟體比和肝體比隨蛋氨酸和HMTBA添加量的增加有下降的趨勢，這可能是過量蛋氨酸的毒性導致的［44］。而向處理6組飼料中添加0.85%檸檬酸鈣后，實驗魚體蛋白含量顯著降低，這可能是飼料中過量的鈣離子（1.38%）影響到鈣鎂離子間的平衡［20］，從而影響肝臟中蛋白質(zhì)的合成。MHA中除了含有HMTBA以外，還含有12%的鈣。有趣的是，本研究中過量添加MHA組（處理5，鈣離子的含量為3.13%）對大菱鲆魚體蛋白質(zhì)含量沒有顯著影響。處理6（檸檬酸鈣含量0.85%）中同樣的過量鈣離子（3.13%）卻對魚體蛋白質(zhì)含量造成不同的影響結果，這可能與鈣離子的存在形式有重要關系，具體原因有待于進一步研究。

3.3 飼料中過量添加蛋氨酸和HMTBA對大菱鲆抗氧化反應的影響

硫代巴比妥酸反應產(chǎn)物（TBARS）含量反映機體內(nèi)自由基水平及脂質(zhì)過氧化程度，而過氧化氫酶（CAT）和超氧化物歧化酶（SOD）的變化反映了機體自由基的清除能力［45］。當機體發(fā)生氧化損傷時，脂質(zhì)過氧化物水平往往升高，而抗氧化酶活性降低。本研究中，與基礎飼料組相比，過量添加晶體蛋氨酸和HMTBA組中肝臟CAT、SOD活力和TBARS值均無顯著性差異，可見飼料中過量的晶體蛋氨酸和HMTBA對大菱鲆肝臟抗氧化反應未造成顯著影響。

由以上實驗結果可知：飼料中一定程度過量添加晶體蛋氨酸（1.31～1.73倍）及蛋氨酸羥基類似物（1.32～1.75倍）對大菱鲆幼魚生長、飼料利用和抗氧化反應無顯著性影響。在本實驗條件下，大菱鲆對過量蛋氨酸有較高的耐受性，對蛋氨酸羥基類似物的耐受性要略高于晶體蛋氨酸，這為進一步的蛋氨酸羥基類似物安全性實驗的設計提供了依據(jù)。

［1］ Daniel Pauly，Villy Christensen，Sylvie Guénette，et al.Towards sustainability in world fisheries［J］.Nature，2002，418：689－695.

［2］ Hardy R W，Kissil G W M.Trends in aquaculture feeding［J］.Feed Mix，1997，5：31－34.

［3］ 艾慶輝，謝小軍.水生動物對植物蛋白源利用的研究進展［J］.中國海洋大學學報，2005，35（6）：929－935.

［4］ Ogino C，Nanry H.Relationship between the nutritive value of dietary proteins for rainbow trout and the essential amino acids compositions［J］.Bull Jpn Soc Sci Fish，1980，46：109－112.

［5］ NRC（National Research Council）.Nutrient Requirements of Fish［M］.Washington：Washington National Academy Press，1993：114.

［6］ Kaushik S J，Cravedi J P，Lalles J P，et al.Partial or total replacement of fish meal by soybean protein on growth，protein utilization，potential estrogenic or antigenic effects，cholesterolemia and flesh quality in rainbow trout，Oncorhynchus mykiss［J］.Aquaculture，1995，133：257－274.

［7］ Hallver J E，Delong D C.Mertz.T Z.Methionine and cytine requirements of Chinook salom［J］.Fed Proc，1959，18：1778.

［8］ Schwarz Frieder J，Manfred Kirchgessner，Deuringer U.Studies on the methionine requirement of carp（Cyprinus carpio L.）［J］.Aquaculture，1998，161：121－129.

［9］ EL－Dahhar A A，EL－Shazly K.Effect of essential amino acids（methionine and lysine）and treated oil in fish diet on growth performance and feed utilization of Nile tilapia，Tilapia nilotica（L.）［J］.Aquaculture and Fisheries Management，1993，24：731－739.

［10］ Simmons，Moccia，Bureau.Dietary methionine requirement of juvenile Arctic charr Salvelinus alpinus（L.）［J］.Aquaculture Nutrition，1999，2：93－100.

［11］ Kim Kyu－II.Re－evaluation of protein and amino acid requirement of rainbow trout（Oncorhynchus mykiss）［J］.Aquaculture，1997，151：3－7.

［12］ Twibell Ronald G，Keith A，Wilson and Paul B Brown.Dietary Sulfur amino acid requirement of juvenile Yellow Perch fed the maximum cystine replacement value for methionine［J］.Nutr，2000，130：612－616.

［13］ Goff Jonathan B，Delbert M.Gatlin evaluation of different sulfur amino acid compounds in the diet of red drum（Sciaenops ocellatus）and sparing value of cystine for methionine［J］.Aquaculture，2004，241：465－477.

［14］ Walton M J，Cowey C B，Adron J W.Methionine metabolism in rainbow trout fed diets of differing methionine and cystine content［J］.Nutr，1982，112：1525－153.

［15］ Cowey C B，Cho C Y，Sivak J G，et al.Methionine in take in rainbow trout（Oncorhynchusmykiss），relationship to cataract formation and the metabolism of methionine［J］.Nutr，1992，122：1154－1163.

［16］ Ruchimat Toni，Toshiro Masumoto.Quantitative methionine requirement of yellowtail（Seriola quinqueradiate）［J］.Aquaculture，1997，150：113－122.

［17］ Alam M S，S Teshima，M Ishikawa，et al.Methionine requirement of juvenile Japanese flounder（Paralichthys olivaceus）estimated by the oxidation of radioactive methionine［J］.Aquaculture Nutrition，2001，7：201－209.

［18］ Sveier H，Nordas H，Berge G E，et al..Dietary inclusion of crystalline D－and L－methionine：effects on growth，feed and protein utilization，and digestibility in small and large Atlantic salmon（Salmon salar L.）［J］.Aquaculture Nutrition，2001，7：169－181.

［19］ Luo，Yong－jian Liu and Kang－sen Mai，et al.Dietary L－methionine requirement of juvenile grouper Epinephelus coioides at a constant dietary cystine level［J］.Aquaculture，2004，241：465－477.

［20］ 李愛杰.水產(chǎn)動物營養(yǎng)與飼料學［M］.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，1996：143－144.

［21］ Helena P，Aires O T.The effect of dietary protein replacement by crystalline amino acid on growth and nitrogen utilization of turbot Scophthalmus maximus juveniles［J］.Aquaculture，2005，250：755－764.

［22］ Takagi S，Shimeno S，Hosokawa H，et al.Effect of lysine and methionine supplementation to a soy protein concentrate diet for red sea bream Pagrus major［J］.Fish Sci，2001，67：1088－1096.

［23］ Watanabe T，Aoki H，Watanabe K，et al.Quality evaluation of different types of non－fish meal diets for yellowtail［J］.Fish Sci，2001，67：461－469.

［24］ Williams K，Barlow C，Rodgers L.Efficacy of crystalline and protein－bound amino acids for amino acid enrichment of diets for barramundi／Asian seabass（Lates calcarifer Bloch）［J］.Aquaculture Research，2001，32：415－429.

［25］ Keembiyehetty C N，Gatlin D M III.Evaluation of different sulfur compounds in the diet of juvenile sunshine bass（Morone chrysops♀×M.saxatilis♂）［J］.Comparative Biochemistry and Physiolology，1995，112：155－159.

［26］ Mark Kelly，Barbara Grisdale－Helland，Stale J Helland et al.GatlinIII.Refined understanding of sulphur amino acid nutrition in hybrid striped bass，Moronechrysops♀×M.saxatilis♂［J］.Aquaculture Research，2006，37：1546－1555.

［27］ Goff J B，Gatlin D M III.Evaluation of different sulfur amino acid compounds in the diet of the red drum Sciaenops ocellata（L），and sparing value of cystine for methionine［J］.Aquaculture，2004，241：465－477.

［28］ 程宗佳.在豆粕型飼料中添加蛋氨酸羥基類似物（MHA）對虹鱒魚生產(chǎn)性能的影響——（二）最適MHA添加量［J］.飼料廣角，2004，13：30－32.

［29］ 雷霽霖.大菱鲆養(yǎng)殖技術［M］.上海：上海科學技術出版社，2003：8.

［30］ 雷霽霖.英國養(yǎng)殖大菱鲆簡況［J］.水產(chǎn)科技情報，1983，2：26－27.

［31］ Eckhert C D，Kemmerer A R.Effect of vitamin A and methionine on growth and amino acid composition of body protein in rainbow trout fingerlings［J］.Nutr，1974，104：865－870.

［32］ Jackson A J，Capper B S.Investigation into the requirements of the tilapia Sarotherodon mossambicus for dietary methionine，lysine and arginine in semi－synthetic diets［J］.Aquaculture，1982，29：289－297.

［33］ Harding D E，Allen O W，Wilson R P.Sulfur amino acid requirement of channel catfish：L－methionine and L－cystine［J］.Nurt，1977，107：2031－2035.

［34］ Ruchimat T，Masumoto T，Hosokawa H.Quantitative methionine requirement of yellow tail（Seriola quinqueradiata）［J］.Aquaculture，1997，150：113－122.

［35］ Coloso R M，Murillo－Gurrea G，Borlongan I，et al.Sulphur amino acid requirement of juvenile Asian sea bass Lates calcarifer［J］.Appl Ichthyol，1999，15：54－58.

［36］ 魏玉婷.大菱鲆幼魚對飼料中蛋氨酸、精氨酸、維生素A和維生素E需求量的研究［D］.青島：中國海洋大學，2010.

［37］ Kaushik S J.Whole body amino acid composition of European seabass（Dicentrarchus labrax），gilthead seabream（Sparusaurata）and turbot（Psetta maxima）with an estimation of their IAA requirement profiles［J］.Aquat Living Resour，1998，11：355－358.

［38］ 劉興旺.大菱鲆及半滑舌鰨蛋白質(zhì)營養(yǎng)生理研究［D］.青島：中國海洋大學，2010.

［39］ AOAC.Official methods of analysis of the association of official analytical chemists［M］.16th edn.Association of official Analytical Arlington，VA：Chemists，1995.

［40］ Akiyama T ＆Arai S.Amino acid requirements of chum salmon fry and supplementation of amino acid to diet［C］∥Proceedings of the 20th USA－Japan Symposium on Aquaculture Mc Vey J P ed.，Nutrition，1993：35－48.

［41］ 朱旺明，王道尊.歐洲鰻對蛋氨酸需要量的研究［J］.上海水產(chǎn)大學學報，1998，8（7增刊）：84－90.

［42］ Ahmed，Mukhtar A Khan，A K Jafri.Dietary methionine requirement of fingerling Indian major carp，Cirrhinus mrigala（Hamilton）［J］.Aquaculture International，2003，11：449－462.

［43］ Zhou，Wu Zao－He.Optimal dietary methionine requirement for Juvenile Cobia（Rachycentron canadum）［J］.Aquaculture，2006，258：551－557.

［44］ Kaushik S J，Luquet P.Influence of bacterial protein incorporation and sulphur amino acid supplementation to such diets on growth of rainbow trout（Salmo gairdneri R.）［J］.Comp Biochem Physiol，1980，73B：17－24.

［45］ Mourente G，Diaz－Salvago E，Bell J G，et al.Increased activities of hepaticanti－oxidant defence enzymes in juvenile gilthead sea bream Sparus aurata L.Fed dietary oxidized oil：attenuation by dietary vitamin E［J］.Aquaculture，2002，214：343－361.

The Influence of Overdose Dietary DL－Methionine or HMTBA on Growth，F(xiàn)eed Utilization and Anti－Oxidant Responses of Turbot（Scophthalmus maximus L.）

HOU Hua－Peng，MA Rui，ZHANG Wen－Bing，MAI Kang－Sen
（The Key Laboratory of Mariculture，Ministry of Education，Ocean University of China，Qingdao 266003，China）

A growth experiment was conducted to evaluate the influence of overdose dietary DL－methionine（Met）or 2－Hydroxy－4－（Methylthio）butanoic acid（HMTBA）on turbot（initial body weight：（5.49±0.01）g）.The control contained 1.35%Met and 0.22%HMTBA.Five different doses of Met or HMTBA were added to the basal diet，respectively.Finally，6 experimental diets were formulated，and the analyzed levels of Met or HMTBA in diets are as follows：Met：1.35%，1.83%，2.50%，1.45%，1.37%，2.51%；HMTBA：0.22%，0.22%，0.22%，0.63%，1.38%and 0.29%.Each diet was fed to five replicate groups of turbot for 10 weeks.Results showed that no significant differences in growth responses were found among dietary treatments（P＞0.05）.No significant difference was observed in body composition，condition factor（CF），visceral indexes（VSI），and hepatosomatic indexes（HSI）（P＞0.05），but the content of body protein of fish in treatment of diet 6 was significantly lower than those in the control and diet 2（P＜0.05）.No significant differences in hepatic catalase activity，superoxide dismutase activity，thiobar－bituric acid reactive substances value were found in liver（P＞0.05）.In conclusion，overdose dietary DL－Met（1.31～1.73 times）or HMTBA（1.32～1.75 times）had no significant effects on growth，feed utilization and anti－oxidant responses in turbot under the current experimental conditions.

Turbot；DL－methionine；HMTBA；growth；anti－oxidation

S963

A

1672－5174（2012）03－036－08

國家自然科學基金項目（31072219）資助

2011－06－09；

2011－09－25

侯華鵬（1988－），女，碩士生。E－mail：hhphaida＠163.com

＊＊通訊作者：E－mail：wzhang＠ouc.edu.cn

責任編輯 王 莉