【摘要】目的 了解口腔鱗癌（OSCC）組織中基質(zhì)金屬蛋白酶-2（MMP-2）的表達(dá)情況，探討其與口腔鱗癌組織浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移潛能及預(yù)后的關(guān)系。方法 采用免疫組化SP法檢測(cè)50例口腔鱗癌組織和10例正?？谇火つそM織中MMP-2的表達(dá)，分析其表達(dá)與臨床指標(biāo)的關(guān)系。結(jié)果 OSCC中MMP-2的表達(dá)顯著高于正?？谇徽衬そM（P<0.01），其陽(yáng)性表達(dá)率分別為76%和10%，深層浸潤(rùn)的口腔鱗癌組織中，MMP-2的陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于淺層浸潤(rùn)的口腔鱗癌組織（P<0.01）。結(jié)論 OSCC中MMP-2的表達(dá)顯著高于正?？谇火つそM織，MMP-2的陽(yáng)性表達(dá)與腫瘤浸潤(rùn)程度密切相關(guān)，提示MMP-2有促進(jìn)腫瘤浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移的作用。

【關(guān)鍵詞】口腔鱗癌；MMP-2；浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移；免疫組織化學(xué)

口腔鱗癌是口腔頜面部最常見(jiàn)的惡性腫瘤，并多呈高度局部破壞性而危及生命。有研究表明，MMP-2的活性和表達(dá)的增加與人類(lèi)多種惡性腫瘤浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移潛能及預(yù)后密切相關(guān)［1］。本研究采用免疫組化方法檢測(cè)OSCC中MMP-2的表達(dá)，分析其與OSCC浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料 50例口腔鱗癌標(biāo)本取自本院2009～2010年手術(shù)切除標(biāo)本，10例正?？谇火つ?biāo)本取自本院2009～2010年非腫瘤患者手術(shù)切除標(biāo)本。50例口腔鱗癌病例術(shù)前未經(jīng)化療、放療或其他生物治療，經(jīng)病理證實(shí)，其中30例為深層浸潤(rùn)（浸潤(rùn)累及肌層、骨質(zhì)或深層腺體），20例為淺層浸潤(rùn)（腫瘤局限于黏膜及黏膜下層）。全部標(biāo)本經(jīng)10%甲醛固定，石蠟包埋，4 μm厚連續(xù)切片。

1.2 方法 采用免疫組化SP法（試劑均購(gòu)于福州邁新生物工程有限公司），以MMP-2即用型鼠抗人多克隆抗體標(biāo)記MMP-2，抗原修復(fù)采用檸檬酸組織抗原修復(fù)液進(jìn)行加熱抗原修復(fù)，嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)時(shí)間、實(shí)驗(yàn)溫度和各種試劑濃度等條件，按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行染色，以0.01 mol/L的PBS液代替一抗做陰性對(duì)照，陽(yáng)性對(duì)照切片由試劑公司提供。

1.3 結(jié)果判定 MMP-2免疫組化陽(yáng)性信號(hào)位于細(xì)胞漿內(nèi)，呈棕色或棕黃色顆粒，依照陽(yáng)性細(xì)胞密度計(jì)分：0%，0分；＜25%，1分；25%～50%，2分；＞50%，3分。＜2分者為陰性（-），≥2分者為陽(yáng)性（+）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 14.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 MMP-2的表達(dá) MMP-2陽(yáng)性信號(hào)位于OSCC細(xì)胞胞漿中，口腔鱗癌組織中，MMP-2的陽(yáng)性率為76%（38/50），正?？谇火つぶ?，MMP-2的陽(yáng)性率為10%（1/10），兩者相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。

2.2 MMP-2的表達(dá)與口腔鱗癌浸潤(rùn)深淺程度的關(guān)系 研究表明，在深層浸潤(rùn)的口腔鱗癌組織中，MMP-2的陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于淺層浸潤(rùn)的口腔鱗癌組織，兩者相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=8.095，P<0.05）。

3 討論

浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤的重要生物學(xué)特征，浸潤(rùn)主要是指癌細(xì)胞侵犯和破壞周?chē)＝M織，進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng)的過(guò)程，同時(shí)癌細(xì)胞在繼發(fā)組織器官中定位生長(zhǎng)也包含浸潤(rùn)。浸潤(rùn)的實(shí)現(xiàn)取決于腫瘤細(xì)胞對(duì)正常組織的破壞能力，腫瘤本身可產(chǎn)生多種分解酶降解細(xì)胞外基質(zhì)及基底膜，基質(zhì)蛋白酶在這一過(guò)程中起重要作用［2，3］。與腫瘤浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移有關(guān)的基質(zhì)金屬蛋白酶主要是MMP-2，MMP-2的主要水解底物是變性膠原及細(xì)胞外基質(zhì)（BM）的主要成分Ⅳ型膠原和Ⅴ型膠原等，還可分解糖蛋白成分FN和LN。大多數(shù)口腔鱗癌呈高度局部破壞性，并侵犯周?chē)M織器官（包括呼吸道和頸部大血管）危及生命。在口腔鱗癌浸潤(rùn)及轉(zhuǎn)移過(guò)程中，細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜的降解和破壞是重要的環(huán)節(jié)。MMP-2（基質(zhì)金屬蛋白酶-2）在腫瘤細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜降解中起關(guān)鍵作用。有學(xué)者對(duì)高轉(zhuǎn)移和非轉(zhuǎn)移口腔癌細(xì)胞株的MMP-2表達(dá)進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)高轉(zhuǎn)移口腔癌細(xì)胞株主要表達(dá)MMP-2，且MMP-2的活性與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和對(duì)局部下頜骨浸潤(rùn)顯著相關(guān)?；罨腗MP-2定位于細(xì)胞穿透基質(zhì)的突出部位，估計(jì)其有“鉆頭”的作用。本組實(shí)驗(yàn)免疫組化染色顯示MMP-2蛋白主要表達(dá)于口腔鱗癌的細(xì)胞漿內(nèi)，在肌層、骨質(zhì)、深層腺體口腔鱗癌組織中的表達(dá)顯著高于黏膜及黏膜下的表達(dá)，提示MMP-2可能是口腔鱗癌具有高轉(zhuǎn)移高浸潤(rùn)能力的分子基礎(chǔ)。

以往研究表明，MMP-2在卵巢癌、前列腺癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、肺癌等惡性腫瘤的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移過(guò)程中起關(guān)鍵作用。韓月等［4］對(duì)42例原發(fā)性膽囊癌標(biāo)本行SABC免疫組化染色后顯示，MMP-2的高表達(dá)與膽囊癌細(xì)胞分化程度差、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、預(yù)后差有關(guān)，表明MMP-2的表達(dá)有利于判斷膽囊癌的生物學(xué)行為和預(yù)后。本組實(shí)驗(yàn)中，MMP-2的表達(dá)與腫瘤浸潤(rùn)的深淺程度相關(guān)，提示MMP-2可作為判斷口腔鱗癌浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移及預(yù)后的指標(biāo)。

參 考 文 獻(xiàn)

［1］ Davies B， Miles DW， Happerfield LC，et al.Activity of type Ⅳ collagenases in benign and m alignant breast disease. Br J cancer，1993，67:1126-1131.

［2］ Currann S， Murray GI. Matrix metalloproteinases in tumour invasion and metastasis. J Pothol， 1999，189:300.

［3］ Kleiner DE，Statler-Stevebson WG.Matrix metalloproteinases and metustasis. Cancer Chemmother Pharmacl，1999（43）:42.

［4］ 韓月，石景森.CD44V6和基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-2表達(dá)與膽囊癌侵襲轉(zhuǎn)移關(guān)系的研究.中華肝膽外科雜志，2002，8(40):253-254.