摘要：為了驗證多肽因子具有增強機體免疫，提高機體免疫應(yīng)答水平并具有填補疫苗免疫空白期，加快機體抗體產(chǎn)生的時間等作用，利用反復(fù)凍融超濾法對雞脾臟及雞法氏囊進行多肽的提取，并利用所提取的多肽作為佐劑制備滅活疫苗而進行一系列實驗。結(jié)果表明，多肽因子與疫苗同時免疫及利用多肽因子代替滅活疫苗中水相組的ＨＩ比單獨免疫疫苗組ＨＩ值提高１～２個滴度。

關(guān)鍵詞：脾臟；法氏囊；多肽；雞新城疫滅活疫苗；抗體滴度

中圖分類號：Ｓ８５２．５＋２；Ｓ８５８．３１ 文獻標(biāo)識碼：A 文章編號：１００７－２７３Ｘ（２０11）12-0011-01

多肽因子是一種新型免疫增強劑，也叫新型細胞因子佐劑，是由免疫活性淋巴細胞釋放的一種特定的參與機體免疫功能的淋巴因子，有增強體液免疫、解除免疫抑制和免疫耐受性、促進機體的生長發(fā)育及緊急輔助治療的作用［１，２］，并具有填補疫苗免疫潛伏期機體內(nèi)未產(chǎn)生抗體的作用，促進機體加快抗體的產(chǎn)生［３］。

１ 材料及設(shè)備

（１）雞脾臟、雞法氏囊（購于開封正大雞場）；雞新城疫滅活疫苗（購于天津瑞普生物）；１日齡海蘭雞（購于開封正大雞場）。

（２）超濾系統(tǒng)及膠體磨為上海集美食品機械有限公司產(chǎn)品；高速離心機為上海盧湘儀離心機儀器有限公司產(chǎn)品。

２ 方法與步驟

２．１ 多肽的制備

（１）勻漿液制備：用生理鹽水分別充分洗滌選取的新鮮雞脾臟及雞法氏囊，除去被膜、脂肪和大血管等，剪碎，稱量，置組織勻漿機勻漿３～５ ｍｉｎ，獲得勻漿液［４］。

（２）組織細胞破碎：將勻漿液在－２０℃凍透后，再放入２５℃環(huán)境中融化。此凍融過程反復(fù)８次至９５％細胞破碎即可［５］。

（３）勻漿液處理：將反復(fù)凍融處理的勻漿液４ ０００ ｒ／ｍｉｎ離心２０ ｍｉｎ。

（４）超濾：上清液用截留分子量為３ ０００ Da的超濾機進行超濾，收集濾液。

（５）按照１∶１的比例分別將提取的雞脾臟提取物與雞法氏囊提取物利用膠體磨勻漿混勻，制成多肽因子。

２．２ 新型多肽因子佐劑試驗

（１）將３５只１日齡海蘭公雛分為４組，每組分別于７日齡免疫，其中第1~3組為試驗組，每組１０只雛雞，第４組為對照組共５只雛雞。具體如下：第１組：在免疫雞新城疫滅活疫苗（Ｌａ Ｓｏｔａ株）前按０．５ｍＬ／羽劑量肌肉注射多肽因子，連用３ｄ。第２組：免疫雞新城疫滅活疫苗（Ｌａ Ｓｏｔａ株）。第３組：利用多肽因子來取代油乳劑滅活疫苗水相中的注射用水，按０．５ｍＬ／羽免疫雛雞。第４組為對照組，不做任何免疫。

（２）飼養(yǎng)管理：試驗雞只飼養(yǎng)管理條件完全一致，試驗期間，每天觀察各組雞群的采食量、精神狀態(tài)等。

（３）抗體水平檢測：在免疫后２１ｄ每組隨機采集５只雞進行心肌采血，分離血清，檢測抗體滴度。

（４）重量測定：各組分別于７日齡、２８日齡試驗結(jié)束時，稱取每只雞的體重。

3 結(jié)果與分析

由表１可見，多肽因子＋疫苗免疫組及利用多肽因子代替滅活疫苗中水相組ＨＩ比單獨免疫疫苗組ＨＩ值提高１~２個滴度。但各組的體重結(jié)果無明顯差別。

４ 小結(jié)與討論

（１）ＨＩ試驗結(jié)果顯示，多肽因子＋疫苗免疫組及利用多肽因子代替滅活疫苗中水相組ＨＩ比單獨免疫疫苗組ＨＩ值提高１～２個滴度。

（２）試驗結(jié)果表明，多肽因子與疫苗同用及混合使用，可增強機體免疫功能，可提高機體免疫應(yīng)答水平，增強疫苗抗體產(chǎn)生。其中多肽因子與滅活疫苗混合使用效果更佳并且使用方便。

（３）對各組雞只的體重結(jié)果分析發(fā)現(xiàn)無明顯差別，說明多肽因子不影響雞只增重。

參考文獻：

［１］ 馬鳳龍，傅興倫，賈世玉，等．雞轉(zhuǎn)移因子的制備及其對雞免疫應(yīng)答影響的研究［Ｊ］．山東畜牧獸醫(yī)，１９９９（５）：５－６．

［２］ 江青艷，黃軍兒，傅偉龍．雞脾臟小分子活性物質(zhì)的組分分析［Ｊ］．華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，２００１（４）：７１－７４．

［３］ 諶南輝，鄧舜洲，何后軍，等．法氏囊三肽囊素（Ｂｕｒｓｉｎ）的研究 Ⅱ．Ｂｕｒｓｉｎ在雞體免疫器官中免疫組織化學(xué)的定位［Ｊ］．江西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，１９９７（４）：３－１２．

［４］ 張秀根，蔣貽海，范根成，等．法氏囊活性肽對新城疫油乳劑滅活疫苗免疫效果的初步研究［Ｊ］．中國獸醫(yī)雜志，１９９８（１１）：４８－４９．

［５］ 侯艷紅．法氏囊活性肽的制備與應(yīng)用［Ｄ］．保定：河北農(nóng)業(yè)大學(xué)，２００１．２４３－２４５．