吉維民 江蘇省寶應縣人民醫(yī)院 225800

解脲支原體(Uu)感染是泌尿生殖系統(tǒng)感染的常見病原體,大量研究表明,解脲支原體感染與男性不育密切相關[1],但其機制迄今尚未明了。近年來男性不育患者有增加趨勢,且耐藥性問題也日趨嚴重[2]。本文就精漿解脲支原體感染培養(yǎng)陽性患者精子凋亡進行檢測,旨在探討解脲支原體感染引起男性不育的原因,并作藥敏結果統(tǒng)計分析,以供臨床參考。

1 材料和方法

1.1 研究對象 2008年2月-2010年4月在我院治療、檢查的患者40例,年齡22～45歲,平均年齡28.5歲。其中,不育男性精漿培養(yǎng)Uu陽性20例,陰性生育對照20例。檢查前均以無菌生理鹽水清洗陰莖和睪丸,洗凈后,手淫法留取精液。

1.2 實驗材料 Olympus BH-2型顯微鏡,臺式離心機,37℃孵箱。藥敏試驗采用法國生物梅里埃IST2支原體培養(yǎng)鑒定及藥敏試劑盒。測定藥物包括四環(huán)素(T ET)、氧氟沙星(OFX)、紅霉素(ERY)、多西環(huán)素(DOX)、交沙霉素(JOX)、克拉霉素(CLR)、阿奇霉素(AZM)、環(huán)丙沙星(CIP)、普那霉素(PRI)共9種藥物。

1.3 研究方法 (1)解脲支原體培養(yǎng):按《全國臨床檢驗操作規(guī)程》操作。(2)精子凋亡檢測采用原位末端標記法(T UNEL):自行液化精液離心取沉淀,pH7.40,PBS洗滌2次,校精子密度約為25.4×106/ml,涂片,95%乙醇固定30min,自行干燥,0.3%H2O2孵育30min,0.1%T ritonX-100 4℃2min沖洗晾干,加 TUNEL反應混合液,濕盒中37℃60min,PBS轉洗,POD轉換液37℃30min DAB-H2O2顯色10min,封片觀察。陽性精子頭部顯黃色,陰性精子不著色。(3)精子凋亡率計算:所有樣本均計數(shù)500個精子,計算陽性凋亡精子數(shù)占總精子數(shù)的比率,結果數(shù)據(jù)以(±s)表示,兩組數(shù)據(jù)比較采用χ2檢驗。(4)藥敏試驗:按試劑盒說明書操作。

2 結果

2.1 精子凋亡率結果 20例Uu陽性不育組和20例Uu陰性生育對照組對比,精子凋亡率(±s):前者為(0.126±0.025)(即 12.6%±2.5%),后者為(0.004± 0.001)(即0.4%±0.1%),兩者有顯著差異(P＜0.01)。

2.2 藥敏試驗結果 20例Uu陽性菌株對抗菌藥物敏感率情況:T ET95%、OFX20%、CLR85%、CIP15.0%、ERY75%、DOX100%、JOX85%、AZM80%、PRI100%。

3 討論

3.1 解脲支原體感染導致男性不育即因精子細胞凋亡異常增多。細胞凋亡是指細胞生物體正常的細胞生理死亡過程,在胚胎發(fā)育和成體生長過程中,用于清除不需要的細胞或對自身有害的細胞。從本文結果可以看出解脲支原體陽性不育和陰性生育組男性體內精子凋亡均可見到,所不同的是不育組精子凋亡率(0.126±0.025)明顯高于生育組(0.004±0.001),(P＜0.01)。感染導致不育男性精子凋亡異常增多可能的病理機制是:Uu可寄生在生精細胞和吸附于不育男性精子表面,在精子局部膜上攝取精子中的營養(yǎng)物,進行代謝蓄積毒性產(chǎn)物,吸附于精子表面的支原體其原膜上的類脂能溶入精子細胞膜的結構內,導致精子細胞與支原體原生質融合,這就使支原體胞漿內有毒性的蛋白質和類脂能溶入精子細胞而產(chǎn)生損傷。其所產(chǎn)生的 H2O2具有很高的細胞毒性,H2O2進一步通過Fenten氏反應,產(chǎn)生毒性更強的物質,研究表明 H2O2能導致細胞內大分子包括直接的DNA損傷、蛋白質損傷,從而誘導細胞凋亡[3]。國內學者通過感染動物模式研究發(fā)現(xiàn)Uu可提高巨噬細胞產(chǎn)生腫瘤壞死因子(TNF)。睪丸生精細胞也可能為 TNF-α,而 TNF可啟動細胞凋亡。同時,升高后可使活性氧(ROS)增高,ROS水平的增加造成DNA解聚,誘導精子發(fā)生凋亡。

3.2 支原體感染與不育關系研究進展。隨著對支原體研究的進展,筆者了解了肺炎支原體(Mp)、解脲支原體(Uu)、人型支原體(Mh)、生殖支原體(Mg)、發(fā)酵支原體(Mf),他們可單純一種感染,也可混合感染且與人類多種疾病相關。以Uu最常見,越來越多證據(jù)表明,Uu感染與人類自發(fā)性流產(chǎn)、非菌性尿道炎、新生兒體重不足、不孕不育等關系密切。且Uu感染易遷延,反復發(fā)作,久治不愈。因為支原體缺乏細胞壁,因此青霉素類、頭孢類抗生素無效?？紤]到支原休是一種傳染性疾病,不同性別的培養(yǎng)陽性率有顯著差異[4],支原體還能在母嬰間垂直傳播。因此導致不孕不育的機理比較復雜,有待進一步廣泛探討。

3.3 本組藥敏結果顯示,Uu的耐藥性有一定的變遷,與其他作者的研究結果比較一致。相同的抗菌藥物女性比男性的耐藥率顯著升高,這與抗菌藥物的使用不當密切相關。治療支原體感染常用的九種藥物中喹諾酮類和林可類產(chǎn)生的耐藥率較高,其耐藥機制可能與DNA消旋酶和拓樸異構酶基因極易發(fā)生變異有關,而四環(huán)素類及大環(huán)內酯類敏感率高,可作為治療Uu感染的首選藥物。

1 呂麗華.解脲支原體感染研究進展〔J〕.中國婦幼保健,2004,19(5):87-88.

2 陳紅霞.1 503例泌尿生殖道支原體感染及藥敏分析〔J〕.中華醫(yī)院感染學雜志,2008,18(2):290-294.

3 吉維民.解脲支原體感染與精子凋亡〔J〕.陜西醫(yī)學檢驗,2001,16(3):29.

4 王勇,祝曉瑩,袁紅英,等.泌尿生殖道感染及耐藥性研究〔J〕.中華醫(yī)院感染學雜志,2009,19(6):702-704.