唐文 胡端敏 楊勇

JAM-C單抗對小鼠急性壞死性胰腺炎急性肺損傷的保護作用

唐文 胡端敏 楊勇

急性肺損傷是重癥急性胰腺炎(SAP)的主要并發(fā)癥，是造成SAP高病死率的一個重要原因。目前研究認(rèn)為，SAP導(dǎo)致的炎癥細胞過度激活和肺部浸潤是急性肺損傷甚至急性肺功能衰減的中心環(huán)節(jié)[1]。連接黏附分子C(junctional adhesion molecule-C, JAM-C)是近年新發(fā)現(xiàn)的在血管內(nèi)皮細胞上分布的細胞黏附分子。它介導(dǎo)中性粒細胞向炎癥部位和組織損傷處浸潤和聚集[2]。我們前期的研究顯示,JAM-C在急性壞死性胰腺炎(ANP)小鼠的肺組織高表達[3]。本研究應(yīng)用抗小鼠JAM-C單抗干預(yù)治療，觀察其對ANP小鼠急性肺損傷和全身炎癥反應(yīng)的保護作用。

一、材料與方法

1．動物模型制備及分組：清潔級昆明小鼠18只，雌雄不分，體重(20±2)g，購自蘇州大學(xué)動物實驗中心。按數(shù)字表法隨機分成對照組、ANP組和抗JAM-C單抗組，每組6只。ANP組小鼠腹腔注射雨蛙素50 μg/kg體重(Sigma公司)6次，間隔1 h，末次注射后立即腹腔注射內(nèi)毒素10 mg/kg體重(Sigma公司)；抗JAM-C單抗組小鼠在首次腹腔注射雨蛙素后30 min腹腔內(nèi)注射羊抗小鼠JAM-C單抗0.3 ml(300 μg，美國RnD公司)，末次雨蛙素注射后腹腔內(nèi)注射內(nèi)毒素10 mg/kg體重。對照組腹腔注射等容積生理鹽水。

2．血清淀粉酶和TNF-α測定：末次注射后3 h，經(jīng)股動脈取血，通過OLYMPUS全自動生化儀檢測血清淀粉酶水平，應(yīng)用ELISA法測定血清TNF-α濃度，試劑盒購自武漢博士德生物有限公司，嚴(yán)格按試劑盒說明書操作。

3．胰腺及肺組織病理檢查及肺濕/干重比測定：取血后處死小鼠，肉眼觀察胰腺及肺組織變化。取小鼠右肺稱肺濕重,置60℃烤箱烘烤72 h后稱肺干重,計算肺濕/干重比。取左肺及胰腺組織，常規(guī)病理檢查。選取10個高倍視野，用雙盲法按Schmidts等[4]和Gultekin等[5]的標(biāo)準(zhǔn)分別對胰腺和肺組織行病理評分。

二、結(jié)果

1．血清淀粉酶、TNF-α濃度及肺濕/干重比的變化：對照組、抗JAM-C單抗組和ANP組小鼠血清淀粉酶、TNF-α濃度及肺濕/干重比依次升高，各組間差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05，表1)。

2．胰腺病理改變：對照組胰腺無明顯異常。ANP組胰腺腫脹，色暗紅，表面可見白色點狀皂化斑及出血點，胰腺與周圍組織粘連，腹腔內(nèi)可見少量淡紅色腹水；鏡下見胰腺高度水腫，細胞壞死，結(jié)構(gòu)模糊不清，胞質(zhì)內(nèi)空泡形成，局部有壞死灶，可見大量中性粒細胞和單核細胞浸潤，胰周脂肪壞死，血管擴張充血，間質(zhì)內(nèi)動脈痙攣，靜脈明顯擴張淤血，炎癥細胞附著，局部血管壁出血、壞死。抗JAM-C單抗組小鼠均未見腹水，胰腺損傷較ANP組減輕(圖1)，病理評分較ANP組顯著降低(P<0.05，表1)。

表1 各組血淀粉酶、TNF-α水平及肺濕/干重比、胰腺病理評分、肺病理評分的比較

注：與對照組比較，aP<0.05；與ANP組比較，bP<0.05

圖1對照組(a)、ANP組(b)、抗JAM-C單抗組(c)的胰腺病理改變(HE ×100)

3．肺組織病理改變：對照組肺組織無明顯異常。ANP組小鼠肺充血、腫脹明顯，表面暗紅色，見散在出血點；鏡下見肺泡和間質(zhì)水腫、出血,灶性或片狀肺不張,肺泡間隔增寬,大量炎性細胞浸潤，肺組織結(jié)構(gòu)紊亂?？笿AM-C單抗組肺損傷較ANP組減輕(圖2)，病理評分較ANP組顯著降低(P<0.05，表1)。

圖2對照組(a)、ANP組(b)、抗JAM-C單抗組(c)的肺組織病理改變(HE ×100)

討論目前研究認(rèn)為，ANP時白細胞過度激活是引起急性肺損傷乃致肺功能衰竭的中心環(huán)節(jié)。各種細胞黏附分子主要作用于炎癥細胞的黏附過程,對白細胞過度激活和肺部浸潤具有重要意義，因此以各種黏附分子為靶點的治療手段被認(rèn)為可能是治療ANP急性肺損傷的突破口。Rau等[6]使用細胞間黏附分子-1(ICAM-1)單抗預(yù)處理ANP大鼠，能有效地減少胰腺內(nèi)的白細胞浸潤、明顯減輕胰腺的病理損傷、抑制了胰腺的早期壞死和后期的胰腺細胞凋亡。Hartwig等[7]報道，阻斷黏附分子L選擇素的表達能明顯降低白細胞滲出和肺損害。

JAM-C是免疫球蛋白超家族成員之一，JAM-C主要分布在血管內(nèi)皮細胞之間的緊密連接上,它的配體主要是分布在各種白細胞上的整和素Mac-1，因此在白細胞激活向炎癥區(qū)域募集的過程中主要作用于白細胞的跨壁穿越過程。Chavakis等[8]使用可溶性JAM-C(sJAM-C)結(jié)合中性粒細胞上的整和素Mac-1，結(jié)果血管炎癥明顯減輕，且白細胞滲出也明顯減少。Scheiermann等[9]報道，拮抗JAM-C能使缺血再灌注損傷小鼠的中性粒細胞血管外滲出明顯減少。Vonlaufen等[10]報道，高表達JAM-C的轉(zhuǎn)基因小鼠ANP模型的胰腺和肺組織炎癥損傷明顯重于正常小鼠。本結(jié)果顯示，抗JAM-C單抗處理后的ANP小鼠胰腺和肺組織的白細胞浸潤顯著減少，病理損傷明顯減輕。且血淀粉酶、TNF-α濃度明顯下降，故JAM-C不僅能減輕ANP小鼠胰腺和肺組織的炎癥損傷，還可能有效緩解全身炎癥反應(yīng)。因此，拮抗JAM-C可能成為治療ANP肺損傷的有效治療方法。

[1] Bhatia M,Slavin J,Cao Y,et al.Preprotachykinin-A gene deletion protects mice against acute pancreatitis and associated lung injury.Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol,2003，284:G830-G836.

[2] Ody C,Jungblut-Ruault S,Cossali D,et al.Junctional adhesion molecule C (JAM-C) distinguishes CD27+ germinal center B lymphocytes from non-germinal center cells and constitutes a new diagnostic tool for B-cell malignancies.Leukemia,2007,21:1285-1293.

[3] 胡端敏,楊勇,唐文.JAM-C在小鼠急性壞死性胰腺炎模型不同組織中的表達.世界華人消化雜志,2010，18:81-83.

[4] Schmidt J,Rattner DW,Lewandrowshi K.A better model of acute pancreatitis for eraluation therapy.Ann Surg,1992,215:44-56.

[5] Gultekin FA, Kerem M, Tatlicioglu E, et al.Leptin treatment ameliorates acute lung injury in rats with cerulein-induced acute pancreatitis. World J Gastroenterol,2007，13:2932-2938.

[6] Rau B, Paszkowski A，Esber S, et al. Anti-ICAM-1 antibody modulates late onset of acinar cell apoptosis and early necrosis in taurocholate-induced experimental acute pancreatitis. Pancreas, 2001，23:80-88.

[7] Hartwig W, Jimenez RE, Fernandez-del Castillo C, et al. Expression of the adhesion molecules Mac-1 and L-selectin on neutrophils in acute pancreatitis is protease-and complement-dependent. Ann Surg,2001，233:371-378.

[8] Chavakis T,Keiper T,Matz-Westphal R,et al.The junctional adhesion molecule-C promotes neutrophil transendothelial migration in vitro and in vivo.J Biol Chem,2004,279:55602-55608.

[9] Scheiermann C, Colom B, Meda P, et al. Junctional adhesion molecule (JAM)-C mediates leukocyteinfiltration in response to ischemia reperfusion injury. Arterioscler Thromb Vasc Biol,2009，29:1509-1515.

[10] Vonlaufen A, Aurrand-Lions M, Pastor CM, et al. The role of junctional adhesion molecule C (JAM-C) in acute pancreatitis. J Pathol, 2006, 209:540-548.

2010-10-28)

(本文編輯：屠振興)

10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2011.04.021

蘇州大學(xué)醫(yī)學(xué)發(fā)展基金項目(EE123715)

215004 蘇州，蘇州大學(xué)第二附屬醫(yī)院消化科

唐文,Email:louisetangwen@yahoo.com.cn